乙型肝炎（hepatitis B）是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的,以肝臟炎性病變?yōu)橹?并能引起其他多器官病變的疾病。部分乙肝患者轉(zhuǎn)化為肝硬化及肝癌,嚴(yán)重威脅生命健康。文獻(xiàn)報道,HBV感染可以引起肝細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)ER（endoplasmic reticulum,ER）應(yīng)激,而ER應(yīng)激會激活非折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response,UPR）。MANF（Mesencephalic Astrocyte-derived Neurotrophic Factor）是一種對ER應(yīng)激敏感的蛋白,在ER應(yīng)激時特異性高表達(dá)。MANF在細(xì)胞中起著保護(hù)細(xì)胞避免ER應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。我們的發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn),MANF的啟動子區(qū)存在ER應(yīng)激反應(yīng)元件,但UPR分支信號如何影響MANF的表達(dá)目前還不清楚。本研究主要觀察HBV誘導(dǎo)的肝組織的ER應(yīng)激以及UPR分支通路對MANF表達(dá)的影響。結(jié)果如下:（1）通過對收集的肝炎病人組織切片免疫組化及肝炎病人組織Q-PCR方法檢測,發(fā)現(xiàn)ER應(yīng)激主要標(biāo)志蛋白BIP,CHOP的的表達(dá)上調(diào),且表達(dá)水平隨著肝炎的病程進(jìn)展逐漸升高。（2）采用免疫組化及Q-PCR方法對肝炎... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1. 前言
2. 實驗材料
    2.1 細(xì)胞株
    2.2 標(biāo)本收集
    2.3 抗體
    2.4 實驗用引物以及si RNA設(shè)計
    2.5 實驗用試劑
    2.6 實驗儀器
3. 實驗方法
    3.1 免疫組化
    3.2 實時熒光定量PCR
        3.2.1 RNA的提取
        3.2.2 RNA的逆轉(zhuǎn)錄
        3.2.3 QPCR試驗方法的建立
    3.3 免疫熒光雙標(biāo)
    3.4 免疫共沉淀（co-ip）
        3.4.1 裂解細(xì)胞
        3.4.2 耦聯(lián)抗體
        3.4.3 CO-IP
    3.5 染色質(zhì)免疫共沉淀
        3.5.1 交聯(lián)和細(xì)胞分離
        3.5.2 染色質(zhì)斷裂
        3.5.3 免疫共沉淀實驗
        3.5.4 IP洗脫
        3.5.5 DNA恢復(fù)
        3.5.6 PCR檢測
    3.6 免疫印跡實驗
        3.6.1 蛋白樣品的制備
        3.6.2 SDS-PAGE凝膠電泳
    3.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.8 肝炎病人組織標(biāo)本的收集
    3.9 統(tǒng)計學(xué)分析
4. 實驗結(jié)果
    4.1 乙肝病人肝組織中BIP的表達(dá)
    4.2 乙肝病人肝組織中CHOP的表達(dá)
    4.3 乙肝病人肝組織中MANF的表達(dá)
    4.4 乙肝病人肝組織中XBP1的表達(dá)
    4.5 MANF和XBP1/XBP1s在肝炎組織中的共表達(dá)
    4.6 MANF與XBP1在細(xì)胞內(nèi)相互作用
    4.7 XBP1s在MANF的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中起關(guān)鍵作用
    4.8 抑制IRE1α 核酸酶活性降低MANF的表達(dá)
    4.9 XBP1與MANF基因啟動子序列相互作用
5.討論
6. 結(jié)論
7.參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人中腦星形膠質(zhì)來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子基因啟動子區(qū)域的克隆及活性檢測[J]. 張利,陸鵬,王濤,沈玉先.  中國藥理學(xué)通報. 2012(06)



本文編號：3014541