研究背景:肝癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）在我國屬于高發(fā)病率和高死亡率的癌癥。目前,HCC的各種檢測方法分別受其技術(shù)特點的限制,均存在特異性低、取樣不便和不能早期診斷等缺陷。近年來有大量研究表明:隨著腫瘤的發(fā)生發(fā)展,患者的腫瘤組織、血清和唾液等體液中發(fā)生了糖蛋白糖基化異常改變。實驗方法:本研究以唾液為檢測樣本,比較健康志愿者（Healthy Volunteers,HV）,慢性乙型肝炎患者（Viral Hepatitis-B Patients,HB）,乙肝后肝硬化患者（Hepatic Cirrhosis Patients,HC）和HCC患者的唾液糖蛋白糖鏈差異。利用一款本實驗室自制的專用于肝病檢測的小規(guī)模凝集素芯片對215例唾液樣本（51例HV,51例HB,68例HC和45例HCC）進行逐例檢測,目的是篩選可以特異性指示HCC患者唾液異常糖基化的凝集素;并且進一步利用90例慢性肝病患者唾液樣本（30例HB,30例HC和30例HCC）和30例HV唾液樣本進行唾液芯片、凝集素印跡實驗驗證。此后利用該凝集素偶聯(lián)磁性微粒并分離純化特定的糖蛋白,對分離純化獲得的糖蛋... 

【文章來源】：西北大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

由HBV引發(fā)的“慢性乙型肝炎、乙肝后硬化、肝癌”發(fā)展過程示意圖

圖 1.2 各種糖鏈結(jié)構(gòu)及其與細胞間關(guān)系[14]糖基化具有重要的生物學意義：例如胞外基質(zhì)中纖黏連蛋白和層粘連蛋白等糖蛋白作為重要的結(jié)構(gòu)分子為細胞外環(huán)境提供緩沖、潤滑環(huán)境；細胞間粘附分子（CellAdhesion Molecule，CAM）多以跨膜糖蛋白的形式存在于細胞表面，其暴露在膜外的部分往往有糖鏈修飾并參與細胞間的粘附；有的糖鏈作為特殊的抗原位點被對應(yīng)的生物分子識別形成特殊的免疫機制，例如人體的 ABO 血型物質(zhì)即由血紅細胞表面糖蛋白糖鏈末端H抗原（Fucα1-2Galβ1-4GlcNAcβ1-）的Gal上是否被半乳糖（Galactose，Gal）或乙酰半乳糖胺（Acetyl Galactosamine，GalNAc）所修飾而決定，據(jù)此紅細胞表面糖鏈與血液內(nèi)抗體共同形成了血液的排異系統(tǒng)[15]；目前糖生物學的研究中普遍認為糖基化過程中參與調(diào)控的酶調(diào)節(jié)如若發(fā)生異常，隨之而變的糖蛋白（Glycoproteins）或糖脂（Glycolipids）上的糖鏈結(jié)構(gòu)改變則會引起多種異常的生理狀態(tài)甚至引發(fā)多種疾病[16,17]，因此糖鏈的改變不僅是疾病發(fā)生發(fā)展過程中反映出的特征變化，并且其本

圖 2.1 一款專用于肝病檢測的 14 探針凝集素芯片陣列示意圖凝集素芯片檢測樣本之前，從 4℃取出芯片，于 37℃真空干隨后利用 1×PBST 于水平震蕩搖床 70rpm 清洗 5min×2 次，再 次，以充分清洗未偶聯(lián)至玻片上的游離凝集素。清洗完成后殘留的 PBS。在上樣前，向孵育盒的各陣列區(qū)域內(nèi)先加入 液對玻片空白表面的環(huán)氧化基團進行封閉以降低熒光掃描時育盒密封后于恒溫孵育箱內(nèi)37℃反應(yīng)1h，封閉完成后，1×PBSS 清洗 5min×2 次，甩干后向孵育盒的各陣列區(qū)域內(nèi)加入蛋白集素芯片孵育液，8μL4M 羥胺，2μL0.1% Tween-20，4μg Cy超純水補足終體積至 120μL），于 37℃恒溫孵育 3h，待反應(yīng)結(jié)×2 次， 1×PBS 清洗 5min×2 次，甩干并掃描。凝集素芯片最 公司所產(chǎn)的 Genepix 4000B 芯片掃描儀實現(xiàn)，掃描參數(shù)設(shè)定MT 功率 70%，激發(fā)強度為 100%。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3005444