目的探究人肝癌細(xì)胞HepG2.2.15中Ras相關(guān)蛋白7a （Rab7a）的巰基化機(jī)制及其對乙型肝炎病毒（HBV）復(fù)制的影響。方法通過生物素轉(zhuǎn)換實驗檢測H₂S對HepG2.2.15細(xì)胞中Rab7a巰基化水平的影響并驗證Rab7a的巰基化位點;通過酶聯(lián)免疫法、RT-qPCR和Western blot檢測巰基化的Rab7a對HBV復(fù)制標(biāo)志物水平的影響。結(jié)果在HepG2.2.15細(xì)胞中H₂S可增強內(nèi)源性Rab7a的巰基化水平（P<0.01）;NaHS（H₂S速釋供體）可增強外源性Rab7a的巰基化表達(dá),但其巰基化位點突變后則不受NaHS影響（P<0.01）;Rab7a巰基化后,可抑制HepG2.2.15細(xì)胞上清中HBsAg、HBeAg和HBV-DNA及細(xì)胞內(nèi)HBV-cccDNA、3.5kb RNA、total RNA和HBcAg蛋白的表達(dá)（P<0.05）。結(jié)論 Rab7a的巰基化抑制HBV陽性細(xì)胞系HepG2.2.15細(xì)胞中HBV的復(fù)制水平。 

【文章來源】：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2020,40(01)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

NaHS對過表達(dá)Rab7a巰基化位點的驗證

NaHS處理后Rab7a過表達(dá)組細(xì)胞上清中HBV DNA、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的表達(dá)明顯低于對照組(P<0.05),Rab7a(Δ)突變組較對照組細(xì)胞上清HBV標(biāo)志物的表達(dá)水平無明顯差異(圖3)。2.4 Rab7a對HepG2.2.15細(xì)胞中HBV標(biāo)志物影響

Rab7a屬于GTPase家族,以Rab7a GDP和Rab7aGTP兩種形式的轉(zhuǎn)換以及Rab7a在胞質(zhì)和膜之間的轉(zhuǎn)位完成Rab7a對囊泡運輸?shù)恼{(diào)控,發(fā)揮特有的生物功能。已有報道,在HBV進(jìn)入細(xì)胞初期,Rab5a和Rab7a協(xié)助HBV早期內(nèi)體到晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)運[8];而在HBV病毒復(fù)制的后期,Rab7a活化形式的過表達(dá)抑制HBV病毒的擴(kuò)增,降低病毒載量,相反,敲低Rab7a能夠減少病毒向降解溶酶體的傳遞,增強HBV的釋放[9-10]。本研究中H2S使Rab7a第83、83、和143位半胱氨酸發(fā)生巰基化,從而激活Rab7a,巰基化的Rab7a顯著降低HBV標(biāo)志物的表達(dá),發(fā)揮抑制HBV的復(fù)制的作用。H2S介導(dǎo)的巰基化修飾通過作用于關(guān)鍵半胱氨酸殘基,從而調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生理病理過程,這也為在HBV相關(guān)信號通路和機(jī)制研究提供了新的策略。

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]ADAR1和ADAR2通過對MAVS基因的3’UTR進(jìn)行RNA編輯影響HBV表達(dá)機(jī)制的研究[D]. 李濤.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2017



本文編號：3004529