目的:評估重組梅毒螺旋體（Tp）黏附素蛋白Tp0750（rTp0750）在新西蘭兔體內(nèi)誘導的免疫保護性及體外診斷價值,以篩選新的梅毒候選疫苗分子與診斷抗原。方法:1.構(gòu)建原核表達載體pET-28a/Tp0750,轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌中誘導表達rTp0750并以Western blot鑒定;2.將新西蘭兔隨機分為三個組,即A:rTp0750（實驗組）,B:rTp0751（陽性對照組）,C:PBS（陰性對照組）,用純化重組蛋白/PBS肌注和皮下注射新西蘭兔,間隔兩周共免疫四次,每次免疫前收集血清檢測特異性IgG抗體水平;取末次免疫后2周兔脾細胞,用CCK-8細胞增殖試劑盒及逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）試劑盒分別檢測脾淋巴細胞增殖及IFN-γ的mRNA轉(zhuǎn)錄水平;同時在新西蘭兔背部皮內(nèi)注射Tp攻擊感染,觀察皮損直徑變化及皮膚潰瘍形成,實時熒光定量PCR（qPCR）檢測新西蘭兔不同組織部位Tp-DNA載量,光鏡下觀察皮損與腎臟病理組織中炎癥細胞浸潤。3.建立基于rTp0750的間接ELISA,檢測不同時期的梅毒患者血清、正常人血清、交叉血清的特異性IgG抗體水平,評估Tp0750的診斷價值。結(jié)果:1... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

pET-28a/Tp0750的PCR擴增Fig.4.1PCRamplificationofpET-28a/Tp0750.Lane1,2000-bpDNAladder;Lanes2,3:

pET-28a/Tp0750的菌液PCRFig.4.2PCRamplificationofpET-28a/Tp0750.1,1500-bpDNAladder;3and5,pET-28a

26圖4.2pET-28a/Tp0750的菌液PCRFig.4.2PCRamplificationofpET-28a/Tp0750.1,1500-bpDNAladder;3and5,pET-28a/Tp0750；2and4,negativecontrol.4.3原核表達載體pET-28a/Tp0750的測序及比對測序結(jié)果與GenBank上的母的序列進行Blast比對，結(jié)果顯示無堿基突變。測序結(jié)果與Blast比對見附錄。4.4Tp0750的表達與純化將測序結(jié)果正確的原核表達載體pET-28a/Tp0750轉(zhuǎn)入E.coilBL21菌中，分別在不同溫度，不同濃度IPTG誘導4h，取菌液上清和沉淀進行SDS-PAGE跑膠分析最佳誘導條件。最佳誘導條件為37℃，IPTG終濃度為1.0mM（圖4.3）。圖4.3pET-28a/Tp0750重組蛋白的誘導表達Fig4.3ExpressionofrecombinantproteinpET-28a/Tp0750

【參考文獻】：
期刊論文
[1]重組梅毒螺旋體診斷抗原的研究進展[J]. 王斯倩,符波,趙宇龍,廖夢佳,李長清,曹龍古,曾鐵兵.  中國人獸共患病學報. 2019(09)
[2]Assessment of the immune responses to Treponema pallidum Gpd DNA vaccine adjuvanted with IL-2 and chitosan nanoparticles before and after Treponema pallidum challenge in rabbits[J]. ZHAO FeiJun,ZHANG XiaoHong,LIU ShuangQuan,ZENG TieBing,YU Jian,GU WeiMing,ZHANG YueJun,CHEN Xi,WU YiMou.  Science China（Life Sciences）. 2013(02)



本文編號：2971453