乙型肝炎（hepatitis B）是一種由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起的全球范圍的傳染病,主要在肝臟發(fā)生病變。臨床上,通過檢測HBV血清標(biāo)志物來輔助判斷HBV感染與否、評價預(yù)后、治療方案和藥物反應(yīng)等。近年來隨著越來越多的研究,乙肝病毒核心蛋白（hepatitis B core protein,HBc）作為新型檢測HBV手段受到廣泛關(guān)注。HBc單體構(gòu)成同型二聚體,進(jìn)一步包裹前基因組RNA（pregenome RNA,pgRNA）和HBV聚合酶組裝為正20面體的核殼體。核殼體腔內(nèi)包含HBV松弛環(huán)狀DNA（relax circular DNA,rcDNA）和病毒聚合酶的復(fù)合體,最終和HBV包膜蛋白（hepatitis B surface protein,HBs）相互作用形成成熟病毒顆粒。HBV感染肝臟機(jī)制的深入研究發(fā)現(xiàn),HBc尤為重要。目前乙肝病毒學(xué)界的共識認(rèn)為,HBc的表達(dá)量與肝細(xì)胞核內(nèi)HBV共價閉合環(huán)狀DNA（covalenty closed circular DNA,cccDNA）的功能活性正相關(guān),通過定量檢測HBc可以指示慢性乙肝患者體內(nèi)cccDNA... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基因電泳圖譜，和為產(chǎn)物，為

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文292結(jié)果2.1重組質(zhì)粒的構(gòu)建將合成的pUC-57質(zhì)粒作為模板，用上下游引物HBC-F1和HBC-R1擴(kuò)增目的基因HBc（圖1），將目的基因與pBE-SDNA都進(jìn)行雙酶切，純化，連接之后測序，陽性結(jié)果與pBE-SDNA進(jìn)行對比（圖2），再進(jìn)行單酶切與雙酶切驗證（圖3）。圖1.HBc基因電泳圖譜，1和2為PCR產(chǎn)物，M為DL2000DNAmarkerFig1.HBcgeneelectrophoreticmap,1and2arePCRproducts,MisDL2000DNAmarker圖2.質(zhì)粒電泳圖譜,1為pBE-SDNA質(zhì)粒，2為pBE-S/HBc重組質(zhì)粒，M為λ-EcoT14DNA

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文30markerFig2.Electrophoresisofplasmid,1ispBE-SDNAplasmid,2ispBE-S/HBcrecombinantplasmid,Misλ-EcoT14DNAmarker圖3.質(zhì)粒酶切電泳圖譜，1為pBE-S/HBc重組道為質(zhì)粒，2為pBE-S/HBc重組質(zhì)粒單酶切，3為pBE-S/HBc重組質(zhì)粒雙酶切，M為DL5000DNAmarkerFig3.Electrophoresisofplasmiddigestion,1pBE-S/HBcrecombinantplasmid,2pBE-S/HBcrecombinantplasmid,3pBE-S/HBcrecombinantplasmid,MDL5000DNAmarker2.2上清中HBc的含量鑒定隨機(jī)挑選50株單菌落（編號1-50）放大培養(yǎng)24小時，用上下游引物HBc-F1(NdeI)和HBc-R1(SalI)擴(kuò)增目的基因HBc，菌液PCR檢測顯示（圖4），50株菌種有16株包含HBc基因，分別收集16株陽性菌的培養(yǎng)上清做ELISA檢測，檢測顯示（圖5），12、17、21和32菌株的培養(yǎng)基中有HBc蛋白的陽性表達(dá)，其中32菌株分泌表達(dá)量最高。


本文編號：2954745