目的分析2013年-2018年安徽省外環(huán)境中H9N2亞型禽流感病毒（avian influenza virus, AIVs）血凝素（hemagglutinin, HA）基因變異特征。方法將所有安徽省禽流感外環(huán)境監(jiān)測點搜集的H9N2亞型核酸陽性樣本接種雞胚分離病毒,病毒RNA逆轉錄為cDNA后用特異性引物進行擴增,聚合酶鏈式反應產物通過基因測序后獲得HA基因序列,應用分子生物學軟件進行分析;使用DATAMONKEY在線服務器進行基因選擇壓力分析,并使用SWISS-MODLE軟件構建分子突變三維構象。結果獲得33株H9N2 AIVs屬于h9.4.2.5進化分支,受體結合位點183、226和227位置分別突變?yōu)镹、L和M,189和190位置存在多樣性;2015年以后分離的毒株均攜帶6個糖基化位點;選擇壓力分析得出160位置承受較大的正向選擇壓力,至少呈現(xiàn)7種空間構象。結論安徽省外環(huán)境中存在的H9N2亞型AIVs具有感染哺乳動物的分子特征并具備抗原漂移能力,需密切關注該病毒的分子變異特征。 

【文章來源】：中華疾病控制雜志. 2020年03期 北大核心

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HA骨架結構的空間構象變化受因158～160氨基酸突變的影響

HA蛋白潛在糖基化位點中29～31、141～143、298～300、305～307和492～494均為穩(wěn)定存在的糖基化位點,并且和以往H9N2亞型AIVs比,在313～315位置增加了一個糖基化位點,此6個糖基化位點穩(wěn)定地存在于2015年以后安徽省分離的外環(huán)境毒株中。2015年以前外環(huán)境中分離的毒株中在145～147、206～208和218～220位置曾出現(xiàn)過糖基化位點,但隨后分離的毒株中這3個糖基化位點均未再出現(xiàn),見表1。表1 2013年-2018年安徽省活禽市場外環(huán)境分離H9N2亞型禽流感毒株HA基因受體結合位點和糖基化位點分析Table 1 Analysis of receptor binding sites and potential glycosylation sites in the HA gene of H9N2 AIVs isolated from external environment of live poultry markets in Anhui Province from 2013 to 2018 毒株名稱 受體結合位點(H3 numbering) 潛在糖基化位點(H3 numbering)a 155 183 189 190 194 226 227 29 105 141 145 206 218 298 305 313 492 A/Environment/Anhui/08829/2013 T N T A L L M + + + + + + + A/Environment/Anhui/08826/2013 T N T A L L M + + + + + + + A/Environment/Anhui/09183/2014 T N T T L L M + + + + + + + A/Environment/Anhui/09184/2014 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/09185/2014 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/09189/2014 T N T T L L M + + + + + + + A/Environment/Anhui/09180/2014 T N T T L L M + + + + + + + A/Environment/Anhui/40246/2015 T N T A L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/40248/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/40249/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/38992/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/38981/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/38978/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/38977/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/01012/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/01010/2015 T N T T L L M + + + + + + + A/Environment/Anhui/01011/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/46666/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/42489/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/19202/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/19204/2015 T N T T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16914/2016 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16915/2016 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/17450/2017 T N T A L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16916/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16917/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16918/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/04468/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16920/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16921/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16922/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/04713/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Environment/Anhui/16924/2018 T N D T L L M + + + + + + A/Duck/Hong Kong/Y280/97 T N T T L L Q + + + + + + A/Chicken/Hong Kong/G9/97 T N T A L L Q + + + + + + A/Quail/Hong Kong/G1/97 T H T E L L Q + + + + + + + + A/Chicken/Shanghai/F/98 T N T A L Q Q + + + + + + A/Chicken/Beijing/1/94 T N T V L Q Q + + + + + + 注:aHA蛋白潛在糖基化位置分別為29～31、105～107、141～143、145～147、206～208、218～220、298～300、305～307、313～315和492～494;“+”存在糖基化位點,空白表示無糖基化位點

安徽省外環(huán)境分離的H9N2亞型AIVs的HA蛋白有4個毗鄰受體結合位點的糖基化位點(105～107、145～147、206～208和218～220)在進化的過程中均發(fā)生突變并消失,唯獨靠近Right edge的糖基化位點141～143仍存在;、HA的158～160位置為HA蛋白高突變位點,安徽省33株外環(huán)境H9N2 AIVs位置存在7種三維構象:DGN、DNA、NNA、NGE、NGN、NGD和NSD,其中有17株病毒為“NGD”構象。見圖2、圖3。圖3 HA骨架結構的空間構象變化受因158～160氨基酸突變的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]2009-2017年煙臺地區(qū)甲型（H1N1）pdm09流感病毒神經氨酸酶基因進化分析[J]. 劉娟,高巧,徐迎春,孫振璐,董兆靜,徐小雯,宮連鳳.  中華疾病控制雜志. 2018(10)
[2]H9N2亞型禽流感病毒全基因組序列測定方法的建立[J]. 何軍,李曉丹,何蘭,俞俊嶺,蘇斌.  病毒學報. 2018(01)



本文編號：2936308