目的:建立效率高的、靈敏的針對溶瘤2型單純皰疹病毒（Oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2）的熒光定量PCR方法,依據中國藥典的方法學驗證指導原則對該PCR方法進行初步的驗證,并檢測給藥后小鼠腫瘤組織內粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colonystimulation factor,GM-CSF）的表達。方法:（1）分析oHSV2的全基因組序列,根據它的GM-CSF基因片段,登錄Beacon Designer8.0軟件設計一對特異性高的引物。提取前期已經重組好的陽性質粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,超微量分光光度計測定該質粒的濃度,并根據公式換算成拷貝數,將其梯度稀釋為熒光定量PCR的模板。建立標準曲線,做該方法的特異性、敏感性和重復性試驗。（2）采集捐獻者的血液和尿液,與10³、10⁴、10^5.5、10^6.5 copies/μL pHG52d34.5CMVhGM-CSF混合后用QIAamp DN... 

【文章來源】：湖北科技學院湖北省

【文章頁數】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SYBRGreenRealtimePCR特異性結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]利用實時熒光定量聚合酶鏈式反應快速檢測人及動物糞便中的沙門菌[J]. 陳丹妮,韓營營,李杰,閆梅英.  疾病監(jiān)測. 2020(02)
[2]Ⅲ期臨床試驗非盲延期階段聯合使用吡侖帕奈的局灶性癲癇患者的四年藥物安全性、耐受性及發(fā)作結局：307號研究[J]. Gregory L Krauss,Emilio Perucca,Patrick Kwan,覃英杰,熊維希,慕潔.  癲癇雜志. 2020(01)
[3]染料法熒光PCR鑒別卵形瘧原蟲curtisi和wallikeri亞種[J]. 張瑾,李剛,徐翮飛,薛曉寧,王勇,張娟,朱可,陳曉光.  中國國境衛(wèi)生檢疫雜志. 2019(05)
[4]單純皰疹病毒2型疫苗的研究進展[J]. 柳蕾,李琦涵.  微生物與感染. 2019(04)
[5]1期臨床耐受性試驗鍵盤設計方法[J]. 郝肖迪,孫瑞華,沈慶,虞康達,吳婉玲,肖暢,王蜜源.  中南藥學. 2019(06)
[6]實時熒光定量PCR技術的原理及其應用[J]. 安鋼力.  中國現代教育裝備. 2018(21)
[7]熒光定量PCR技術的原理及其在植物研究中的應用[J]. 黃小玲,張登,廖嘉明,歐陽昆唏.  安徽農業(yè)科學. 2018(25)
[8]實時熒光定量PCR技術的應用及研究進展[J]. 李萌,李雪,鄭志強.  飼料博覽. 2018(07)
[9]實時熒光定量PCR技術在細菌學檢測方面應用進展[J]. 彭召紅.  臨床醫(yī)藥文獻電子雜志. 2018(56)
[10]在醫(yī)學檢驗中應用實時熒光定量PCR的研究進展[J]. 李鑫.  中西醫(yī)結合心血管病電子雜志. 2017(35)

博士論文
[1]溶瘤型單純皰疹病毒的構建及效應研究[D]. 蘭萍.武漢大學 2003

碩士論文
[1]番茄斑萎病毒實時熒光定量PCR快速檢測方法的建立[D]. 習鳳妮.中南大學 2013
[2]葡萄根瘤蚜的熒光定量PCR檢測及間種植物防控研究[D]. 郭慶.中國農業(yè)科學院 2011
[3]瓜類細菌性果斑病菌及辣椒細菌性斑點病菌的快速檢測技術研究[D]. 董明明.山東農業(yè)大學 2011



本文編號：2927390