發(fā)布時間：2020-12-18 23:08

　　SERINC5（Ser5）是于2015年首次報道的一種具有10-12次跨膜結(jié)構(gòu)的宿主限制性因子,有著很強的抗HIV-1病毒的功能。區(qū)別于其他已經(jīng)被報道的宿主限制因子,SERINC5的抗病毒能力發(fā)揮在HIV-1病毒生命周期的晚期階段,其主要的作用機制是隨著細(xì)胞膜包裝進(jìn)病毒,并且包裝進(jìn)病毒的量越大,降低釋放病毒感染力的能力越強。多篇文章報道,HIV-1病毒中輔助蛋白Nef蛋白缺失時包裝出來的病毒上含有大量的SERINC5蛋白,使得病毒的感染力極低;而當(dāng)病毒中含有Nef蛋白時,則SERINC5包裝進(jìn)病毒顆粒的含量減少,使病毒恢復(fù)了較強的感染力,這說明Nef對SERINC5的拮抗能力很大程度上限制了SERINC5的抗病毒功能。所以,闡明Nef蛋白與SERINC5之間的作用機制對于研究具有新型靶點的抗HIV-1藥物至關(guān)重要。目前人們對于其拮抗機制的認(rèn)識僅僅局限于認(rèn)為Nef會改變SERINC5包裝進(jìn)病毒顆粒的含量,而對于具體的作用機制尚缺少相關(guān)的報道。因此本論文根據(jù)前期的報道,提出了Nef是通過影響SERINC5在細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)量來實現(xiàn)其對SERINC5拮抗作用的假說,并且圍繞Nef對SERIN... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Fig3.2SERINC5-VR1012質(zhì)粒構(gòu)建電泳圖(a)SERINC5PCR片段；(b)SERINC5-VR1012質(zhì)粒小提；(c)SERINC5-VR1012

同樣利用PCR技術(shù)，獲取并擴增了SERINC5的目的片段，通過凝膠電泳鑒定了PCR產(chǎn)物，鑒定目的片段大小正確，約為1400bp，如圖Fia）。然后，利用HindⅢ和BamHⅠ限制性核酸內(nèi)切酶將PCR產(chǎn)物和pEYFP-N1達(dá)載體酶切，通過T4連接酶將目的片段與載體連接在一起后，經(jīng)過轉(zhuǎn)化、提取質(zhì)粒等步驟后，獲得了連入的目的片段的質(zhì)粒。對獲得的質(zhì)粒，首先進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳鑒定，質(zhì)粒大小正確，約為3000下來，用SalⅠ和BamHⅠ對質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，載體和目的片段大小正別約為4700bp和1400bp。最后，將雙酶切鑒定正確的質(zhì)粒進(jìn)行測序，測序確，結(jié)果如圖Fig 3.3（b）（c）。經(jīng)過鑒定，最終獲得了由HindⅢ和BamHⅠ的SERINC5-flag- pEYFP-N1真核表達(dá)質(zhì)粒。


本文編號：2924764