發(fā)布時間：2017-04-08 03:08

  本文關鍵詞：基于一種新型蛋白質芯片建立,用于梅毒和萊姆病免疫血清學篩查，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:建立一種新型蛋白質芯片技術,用于檢測梅毒患者血清抗蒼白螺旋體Ig G和Ig M抗體。方法:收集286例梅毒患者和270例無梅毒史健康者血清樣本,分別作為實驗組和對照組。用二硫雙(琥珀酰亞氨基十一酸酯)[dithiobis(succinimidyl undecanoate),DSU]修飾金平面芯片,并對芯片進行物理表征,包括原子力電子顯微鏡實驗(Atomic force microscope,AFM)和傅里葉紅外光譜法(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)。對DSU修飾芯片進行可重復性實驗,并對各項試驗參數優(yōu)化。用已建立蛋白質芯片方法、甲苯胺紅不加熱血清試驗(toluidine red unheated serum test,TRUST)和梅毒螺旋體明膠凝集試驗(Treponema Pallidum particle assay,TPPA)對實驗組和對照組樣本進行檢測。并對比觀察該芯片檢測結果與TRUST和TPPA方法的差異。結果:建立了一種DSU修飾芯片方法,并用于梅毒血清樣本檢測。該實驗建立的蛋白質芯片平臺有較高的敏感性,抗蒼白螺旋體Ig G抗體檢測線是0.39μg/ml;有較高的實驗可重復性,芯片檢測變異系數(coefficient of variation,CV)范圍從4.55%到5.36%;實驗特異性較強,蛋白質芯片、TPPA和TRUST方法檢測梅毒患者血清中Ig G和Ig M抗體的特異性分別是100%,100%和97%;血樣檢測陽性率分別是99.0%,97.9%,76.2%。蛋白質芯片方法分別與TPPA和TRUST方法檢測結果進行統(tǒng)計學χ2檢驗,結果分別是P0.05和P0.01。因此該蛋白質芯片方法與TPPA方法沒有統(tǒng)計學差異,而與TRUST方法有顯著性統(tǒng)計學差異。結論:本實驗建立的蛋白質芯片可以實現同步快速檢測梅毒患者血清中Ig G和Ig M抗體,具有較高的靈敏度和特異性。該蛋白芯片方法可以作為一種替代TPPA和TRUST方法檢測梅毒感染。目的:建立一種蛋白質組合芯片檢測技術,用于聯(lián)合檢測萊姆病患者血清抗伯氏疏螺旋體螺旋體Ig G和Ig M抗體,并評估患者感染的狀況。方法:收集56例神經萊姆病患者血清和114例健康者血清樣本,分別作為實驗組和對照組。用二硫雙(琥珀酰亞氨基十一酸酯)[dithiobis(succinimidyl undecanoate),DSU]修飾芯片,然后用包被有Vls E、flagellin、Osp C、三種IR6多肽(P1、P2和P3)抗原的組合蛋白質芯片,對實驗組和對照組樣本進行Ig M抗體和Ig G抗體聯(lián)合檢測。并把抗Flagellin抗原Ig M抗體芯片檢測結果與傳統(tǒng)的ELISA檢測結果進行對比分析。結果:萊姆病患者血清中Ig G和Ig M抗體的特異性分別是100%,抗Vls E、Flagellin、Osp C Ig M抗體陽性率分別是60.71%,69.64%,46.43%�？筕ls E、Flagellin、Osp C Ig G抗體陽性率分別是75.00%,50.00%,35.71%�？筕ls E、Flagellin、Osp CIg M或者Ig G抗體陽性率分別增加到89.29%,82.14%,66.07%。此外,而Flagellin或Vls E或Osp C或P1或P2或P3陽性率增加到92.9%。同樣的,實驗結果表明,抗單一Vls E IR6多肽P1,P2,及P3的Ig M和Ig G陽性率分別是75.00%,71.43%,76.79%,抗二種同時出現的Vls E IR6多肽Ig G和Ig M抗體陽性率分別是28-48%和23-41%;抗三種同時出現的Vls E IR6多肽(P1,P2和P3)Ig G和Ig M抗體陽性率分別是25.00%和19.64%。蛋白芯片方法分別與ELISA方法檢測結果進行統(tǒng)計學χ2檢驗,得結果分別是P0.05,此兩種方法有顯著性統(tǒng)計學差異。結論:1)蛋白質芯片聯(lián)合檢測有助于提高萊姆病診斷陽性率;2)萊姆病患者可以出現不同菌株的重復感染;3)本課題建立的萊姆病病源體組合蛋白質芯片可以替代ELISA方法,用于檢測萊姆病診斷。
【關鍵詞】：蛋白芯片 梅毒 蒼白螺旋體 二硫雙(琥珀酰亞氨基十一酸酯) 甲苯胺紅不加熱血清試驗 梅毒螺旋體明膠凝集試驗 蛋白質芯片 伯氏疏螺旋體抗原 神經萊姆病 酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R759.1
【目錄】：

• 一、中英文縮略詞對照表7-8
• 第一部分：一種基于二硫雙（琥珀酰亞氨基十一酸酯）修飾、用于梅毒螺旋體IgG和IgM抗體血清學檢測新型蛋白芯片制作工藝及方法學建立8-38
• 中文摘要8-10
• Abstract10-11
• 1 前言11-12
• 2 材料與方法12-21
• 2.1 研究對象12-13
• 2.2 實驗試劑及儀器13-15
• 2.2.1 金箔芯片的清洗試劑及儀器13
• 2.2.2 金箔芯片化學修飾的試劑及儀器13-14
• 2.2.3 芯片表征檢測試劑和儀器14
• 2.2.4 質控實驗的試劑及儀器14-15
• 2.2.5 樣本檢測的試劑和儀器15
• 2.3 實驗方法與步驟15-20
• 2.3.1 載體的選擇及表面化學處理15-16
• 2.3.2 PBS溶液和PBST-BSA溶液配制16
• 2.3.3 金箔芯片的化學修飾及表征16
• 2.3.4 抗原孵育溫度-時間質控實驗16-17
• 2.3.5 梅毒螺旋體重組rTpN151747 抗原質控實驗17
• 2.3.6 多克隆兔抗梅毒抗原IgG抗體濃度梯度孵育質控實驗17-18
• 2.3.7 Cy3標記山羊抗兔IgG抗體濃度梯度孵育質控實驗18
• 2.3.8 金箔芯片的可重復性實驗18-19
• 2.3.9 血清稀釋度實驗19
• 2.3.10 血清樣本抗梅毒螺旋體rTpN151747 抗原抗體檢測19-20
• 2.4 TRUST和TPPA實驗方法20-21
• 2.5 統(tǒng)計學分析21
• 3 結果21-30
• 3.1 金箔芯片的化學修飾及表征21-22
• 3.2 抗原孵育溫度-時間質控實驗結果22-23
• 3.3 梅毒螺旋體rTpN151747 抗原濃度梯度孵育質控實驗結果23-24
• 3.4 多克隆兔抗梅毒抗原IgG抗體濃度梯度孵育質控實驗結果24-25
• 3.5 Cy3標記山羊抗兔IgG抗體濃度梯度孵育質控實驗結果25-26
• 3.6 可重復性實驗結果26-27
• 3.7 血清稀釋度實驗結果27-28
• 3.8 梅毒患者血清樣本檢測結果28-30
• 4 討論30-32
• 5 結論32
• 6 對本課題的進一步設想32-33
• 參考文獻33-38
• 第二部分：一種基于二硫雙（琥珀酰亞氨基十一酸酯）修飾、用于萊姆病病源微生物感染抗體聯(lián)合檢測組合蛋白質芯片方法學建立38-59
• 中文摘要38-40
• Abstract40-42
• 1 前言42-44
• 2 材料與方法44-48
• 2.1 研究對象44-46
• 2.1.1 金箔芯片的清洗試劑及儀器44-45
• 2.1.2 金箔芯片化學修飾的試劑及儀器45
• 2.1.3 質控實驗的試劑及儀器45-46
• 2.1.4 樣本檢測的試劑和儀器46
• 2.2 實驗方法與步驟46-48
• 2.2.1 金箔芯片的清洗及修飾46-47
• 2.2.2 伯氏疏螺旋體重組Vls E、Flagellin、Osp C抗原濃度梯度孵育質控實驗47
• 2.2.3 兔抗Vls E、Flagellin、Osp C抗原IgG抗體濃度梯度孵育質控實驗47-48
• 2.2.4 萊姆病患者血清樣本檢測48
• 2.3 統(tǒng)計學分析48
• 3 結果48-54
• 3.1 伯氏疏螺旋體重組Vls E、Flagellin、Osp C抗原濃度孵育質控實驗結果48-50
• 3.2 兔抗Vls E、Flagellin、Osp C抗原IgG抗體濃度梯度孵育質控實驗50-51
• 3.3 萊姆病患者血清樣本檢測結果51-53
• 3.4 芯片方法與ELISA方法相關性分析53-54
• 4 討論54-55
• 5 結論55-56
• 參考文獻56-59
• 三、附錄59-60
• 四、致謝60-61
• 五、綜述61-69
• 參考文獻65-69

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