目的運(yùn)用噬菌體展示技術(shù),對(duì)結(jié)核分枝桿菌PPE17蛋白特異性結(jié)合肽進(jìn)行了初步篩選。方法從結(jié)核分枝桿菌基因組中擴(kuò)增PPE17基因,克隆到pET28a中,在大腸桿菌BL21中表達(dá),Ni²⁺柱純化,并用SDS-PAGE和Western blot鑒定。將純化的PPE17蛋白包被到ELISA板中,用噬菌體7肽庫(kù)進(jìn)行篩選,經(jīng)4輪淘選后,隨機(jī)選取噬菌斑進(jìn)行測(cè)序,并用DNAMAN對(duì)陽(yáng)性克隆所編碼的多肽氨基酸序列進(jìn)行分析比較。結(jié)果成功構(gòu)建并表達(dá)了PPE17抗原,獲得分子量約為37kD的可溶性蛋白。從第4輪的洗脫物中,隨機(jī)挑選20個(gè)噬菌斑。測(cè)序結(jié)果可翻譯成8種多肽分子,其中重復(fù)6次的多肽序列為L(zhǎng)KWGHVY。結(jié)論通過(guò)噬菌體展示技術(shù)篩選到PPE17蛋白的特異性結(jié)合肽,有望成為鑒定該抗原的小分子診斷制劑。 

【文章來(lái)源】：公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué). 2020年05期

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【部分圖文】：

PPE17的克隆擴(kuò)增(M:Marker)

PPE17基因鏈接到質(zhì)粒pET28a中后,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL2l中表達(dá),經(jīng)Ni2+親和層析柱純化后,進(jìn)行SDS-PAGE電泳,發(fā)現(xiàn)在37kDa處有一條純化帶,與PPE17大小相符,說(shuō)明PPE17蛋白得到了表達(dá)和純化(圖2)。2.3 淘選結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]我國(guó)結(jié)核病防治現(xiàn)狀與展望[J]. 陳凡,朱榮生,周菁,薛云,楊凡.  公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué). 2019(04)



本文編號(hào)：2917882