發(fā)布時間：2020-12-15 07:14

　　目的運用噬菌體展示技術,對結核分枝桿菌PPE17蛋白特異性結合肽進行了初步篩選。方法從結核分枝桿菌基因組中擴增PPE17基因,克隆到pET28a中,在大腸桿菌BL21中表達,Ni²⁺柱純化,并用SDS-PAGE和Western blot鑒定。將純化的PPE17蛋白包被到ELISA板中,用噬菌體7肽庫進行篩選,經4輪淘選后,隨機選取噬菌斑進行測序,并用DNAMAN對陽性克隆所編碼的多肽氨基酸序列進行分析比較。結果成功構建并表達了PPE17抗原,獲得分子量約為37kD的可溶性蛋白。從第4輪的洗脫物中,隨機挑選20個噬菌斑。測序結果可翻譯成8種多肽分子,其中重復6次的多肽序列為LKWGHVY。結論通過噬菌體展示技術篩選到PPE17蛋白的特異性結合肽,有望成為鑒定該抗原的小分子診斷制劑。 

【文章來源】：公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學. 2020年05期

【文章頁數】：3 頁

【部分圖文】：

PPE17的克隆擴增(M:Marker)

PPE17基因鏈接到質粒pET28a中后,轉化到大腸桿菌BL2l中表達,經Ni2+親和層析柱純化后,進行SDS-PAGE電泳,發(fā)現在37kDa處有一條純化帶,與PPE17大小相符,說明PPE17蛋白得到了表達和純化(圖2)。2.3 淘選結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]我國結核病防治現狀與展望[J]. 陳凡,朱榮生,周菁,薛云,楊凡.  公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學. 2019(04)



本文編號：2917882