世界上超過(guò)3.5億的人口感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV), HBV感染仍然是全球的健康問(wèn)題。慢性乙型肝炎病毒持續(xù)感染可能會(huì)演變?yōu)楦斡不透伟?每年死于HBV感染相關(guān)的肝衰竭、肝細(xì)胞癌達(dá)百萬(wàn)。故臨床治療仍然是很大的挑戰(zhàn)。核苷(酸)類似物類抗病毒藥物的出現(xiàn)及廣泛應(yīng)用,對(duì)長(zhǎng)期抑制病毒、延緩疾病進(jìn)展、減少并發(fā)癥的發(fā)生起到了關(guān)鍵性的作用。該類藥物主要作用于HBV的聚合酶RT區(qū)而發(fā)揮抗病毒作用,顯著抑制HBV的復(fù)制、改善肝功能和組織學(xué)損傷。但要鞏固療效需長(zhǎng)期維持治療。長(zhǎng)期治療勢(shì)必誘導(dǎo)乙肝病毒耐藥株的產(chǎn)生,引起臨床治療失敗。乙型肝炎病毒為逆轉(zhuǎn)錄病毒,逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中因逆轉(zhuǎn)酶無(wú)校對(duì)功能,造成基因突變高發(fā)。在藥物選擇壓力下,HBV耐藥株更易成為優(yōu)勢(shì)株。因此,一旦臨床治療過(guò)程中出現(xiàn)病毒學(xué)突破等治療失敗的情況,均應(yīng)進(jìn)一步分析其耐藥情況。體外表達(dá)質(zhì)粒研究HBV復(fù)制特性及藥物敏感性,對(duì)特殊耐藥株的深入研究尤為重要,可將臨床分離株的在體外得以真實(shí)表達(dá),指導(dǎo)臨床合理治療、評(píng)價(jià)藥物療效。對(duì)臨床耐藥HBV毒株的研究需構(gòu)建能反映感染者體內(nèi)HBV株生物學(xué)功能的體外表達(dá)克隆。為此,我們開展了以下工... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

包含1.1拷貝HBV基因組的重組質(zhì)粒構(gòu)建流程圖

高復(fù)制性阿德福韋酷耐藥/缺失變異HBV株的克隆及部分生物學(xué)特性分析 第一部分2. 6個(gè)克隆HBV全基因測(cè)序及結(jié)果分析2.1.全長(zhǎng)結(jié)構(gòu)分析分別對(duì)構(gòu)建成功的6個(gè)HBV全基因克隆進(jìn)行HBV全長(zhǎng)測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)與野生株序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)6個(gè)克隆的HBV序列均于PreSl/Spacer區(qū)段存在巨大缺失區(qū)，缺失達(dá)207個(gè)堿基。該缺失未造成其他各個(gè)開放讀碼框架序列的移位。同時(shí)測(cè)序證實(shí)該臨床株的逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)存在阿德福韋醋相關(guān)的耐藥位點(diǎn)rtA181T和或rtN236T，與該患者接受拉米夫定、阿德福韋酷序貫治療后出現(xiàn)病毒學(xué)突破的臨床特征相符。測(cè)序所見(jiàn)該臨床株結(jié)構(gòu)及序列缺失段如圖14所示。207bp16001900

連接至同樣BspQffll切處理的載體PHY106，構(gòu)建含1.1拷貝HBV基因組的具有體外復(fù)制能力的重組質(zhì)粒。如圖1-7所示，構(gòu)建過(guò)程中需判定是否成功將HBV插入預(yù)定載體。圖為酶切鑒定電泳圖，正確構(gòu)建的質(zhì)粒經(jīng)Sac I和Hindlll酶切后應(yīng)為2.9kb及4.0kb兩個(gè)條帶�？蓳�(jù)此蹄選出成功構(gòu)建的重組質(zhì)粒。


本文編號(hào)：2917668