【摘要】：第一章:高致病性H7N9病毒的致病特征及生物特性研究背景:2017年,H7N9病毒發(fā)生變異,出現(xiàn)新型高致病性H7N9禽流感病毒感染病例。在廣東高致病H7N9病人中,存在持續(xù)的病毒血癥。為了進(jìn)一步明確高致病性H7N9病毒的致病特點(diǎn)及生物特性,我們開(kāi)展了以下研究。研究方法:收集患者臨床資料,并采集高致病性H7N9病人的血漿和痰液進(jìn)行病毒分離。采用液相芯片技術(shù)檢測(cè)高致病性H7N9病人與正常人血漿的細(xì)胞因子水平。利用高致病性H7N9病毒和ZJU01毒株(2013年H7N9毒株)對(duì)小鼠進(jìn)行病毒感染造模,觀察兩個(gè)毒株的致病特征。在感染后2天,4天,6天分別處理小鼠,取血清和器官組織,進(jìn)行病毒檢測(cè)和分離。利用高致病性H7N9病毒和ZJU01毒株感染A549細(xì)胞模型,提取外泌體,對(duì)外泌體中流感病毒及其基因進(jìn)行檢測(cè)。研究結(jié)果:高致病性H7N9病人存在病毒血癥,血漿分離到活病毒。高致病H7N9病人同樣存在細(xì)胞因子風(fēng)暴,表現(xiàn)為 IL-1ra,IL-6,IP-10,IL-10,IFN-γ,MCP-3,IL-18,HGF,MCP-1異常高表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,高致病H7N9毒株的致病力明顯強(qiáng)于ZJU01毒株,并導(dǎo)致模型小鼠病死。對(duì)高致病H7N9模型小鼠的組織器官進(jìn)行病毒檢測(cè),發(fā)現(xiàn)多個(gè)重要臟器尤其是腦組織中檢測(cè)和分離到高滴度的病毒。研究進(jìn)一步證實(shí),病毒感染的A549細(xì)胞分泌的外泌體含有病毒全基因組及具有感染性的病毒樣顆粒。研究結(jié)論:高致病性H7N9病人持續(xù)存在病毒血癥,誘導(dǎo)細(xì)胞因子風(fēng)暴和重要組織器官的損害。腦部感染可能是病人致死的主要原因之一。外泌體包裹可能是病毒入血并導(dǎo)致肺外組織感染的重要途徑之一。第二章:H7N9裂解佐劑(MF59)疫苗的長(zhǎng)期穩(wěn)定性和免疫原性研究研究背景:2013年至2018年,H7N9禽流感病毒在中國(guó)人群中造成了顯著的發(fā)病率和病死率。H7N9疫苗對(duì)疾病預(yù)防至關(guān)重要。為驗(yàn)證MF59佐劑疫苗長(zhǎng)期保存后是否保持穩(wěn)定,我們?cè)u(píng)估了該疫苗的穩(wěn)定性和免疫原性。研究方法:我們用疫苗株制備疫苗成品(抗原0.25 ml/劑量和MF59 0.25 ml/瓶)。在37±2℃環(huán)境中進(jìn)行熱穩(wěn)定性測(cè)試,在第3、7、14、28天對(duì)血凝素含量進(jìn)行檢測(cè)。在25±2℃環(huán)境中進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn),在第1、2、3個(gè)月進(jìn)行血凝素含量檢測(cè)。在5±3℃環(huán)境中進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性測(cè)試,在第3、6、9、12、18、24、30個(gè)月進(jìn)行血凝素含量檢測(cè)。取保存6個(gè)月、24個(gè)月和30個(gè)月后的疫苗,對(duì)小鼠進(jìn)行免疫,評(píng)估該疫苗的免疫原性。以血凝抑制和微量中和滴度來(lái)評(píng)價(jià)抗體反應(yīng)。同時(shí)利用存放30個(gè)月的MF59佐劑疫苗進(jìn)行二次免疫后,對(duì)小鼠進(jìn)行攻毒,觀察MF59佐劑疫苗的免疫保護(hù)效應(yīng)。研究結(jié)果:H7N9裂解佐劑(MF59)疫苗,在37±2℃環(huán)境下可保存3天,在25±2℃可保存3個(gè)月,在5±3℃至少可保存30個(gè)月。各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到藥典關(guān)于疫苗評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)。在保存30個(gè)月后,佐劑疫苗免疫后抗體血凝抑制效價(jià)和微量中和滴度沒(méi)有明顯的變化,免疫小鼠能夠有效抵御H7N9病毒的感染及其致病效應(yīng)。研究結(jié)論:我們的研究結(jié)果表明H7N9裂解(MF59)佐劑疫苗具有很好的穩(wěn)定性。在5±3℃至少可保存30個(gè)月,適合大流行疫苗儲(chǔ)備。第三章:A/ZJU01/PR8/2013裂解H7N9疫苗對(duì)高致病H7N9感染的小鼠的保護(hù)效應(yīng)研究研究背景:自從第一例H7N9以來(lái),已經(jīng)有5波H7N9高峰,2017年出現(xiàn)新的高致病性H7N9毒株,為了評(píng)價(jià)A/ZJU01/PR8/2013疫苗是否還對(duì)高致病性H7N9毒株有保護(hù)效應(yīng),我們開(kāi)展了此項(xiàng)研究。研究方法:用500μ1裂解疫苗(2.5μg HA和7.5μg HA兩個(gè)劑量)或者M(jìn)F59佐劑疫苗腹腔二針免疫小鼠,采集第二次免疫后14天血清,體外做血凝抑制實(shí)驗(yàn),用于評(píng)價(jià)免疫血清對(duì)高致病性H7N9毒株的抗體水平。同時(shí),對(duì)免疫后小鼠進(jìn)行高致病性H7N9毒株攻毒,觀察1周,2周后小鼠的生長(zhǎng)狀態(tài),后殺死小鼠取肺進(jìn)行病理及肺部病毒量檢測(cè),同時(shí)檢測(cè)免疫效應(yīng)。研究結(jié)果:免疫血清能夠中和高致病性毒株,與ZJU01毒株比較,效價(jià)有所下降。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,高致病性H7N9毒株對(duì)小鼠致病力明顯大于ZJU01毒株,但是疫苗仍然能有效保護(hù),MF59佐劑疫苗效果更好。研究結(jié)論:以ZJU01毒株為模板研發(fā)的H7N9裂解/佐劑疫苗,能有效地保護(hù)模型小鼠抵御高致病性H7N9的感染及其所致的病理效應(yīng)。MF59佐劑疫苗的保護(hù)效果更好。當(dāng)然,進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)應(yīng)該開(kāi)展,同時(shí)也應(yīng)該及時(shí)更新疫苗以發(fā)揮更好的效果。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R511.7
【圖文】：

在顯微鏡下，ＨＥ染色片上可以發(fā)現(xiàn)肺泡組織破裂，肺損傷嚴(yán)重，肺內(nèi)大量炎性細(xì)逡逑胞浸潤(rùn)。在同部位流感核心蛋白免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)尤其是細(xì)支氣管肺泡逡逑上皮內(nèi)可檢出大量的病毒抗原（圖１．２）。逡逑１９逡逑

細(xì)胞因子中，有９種細(xì)胞因子和趨化因子包括ＩＬ－ｌｒａ、ＩＬ－６．丨Ｐ－１０、ＩＬ－�。�、ＩＦＮ－ｙ、逡逑ＭＣＰ－３、ＩＬ－１８、ＨＧＦ、ＭＣＰ－１升高最為明顯。這些細(xì)胞因子是正常人血漿中細(xì)胞逡逑因子的３０多倍（圖１．３）。逡逑２０逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張菊平;孫敏淇;;基于活禽市場(chǎng)的H7N9禽流感傳播動(dòng)力學(xué)分析[J];生物數(shù)學(xué)學(xué)報(bào);2019年02期

2 任元?jiǎng)P;倪正杰;顧小琳;張遠(yuǎn)鵬;董建成;王理;;一種知識(shí)化中國(guó)H7N9公共衛(wèi)生突發(fā)事件的方法[J];智慧健康;2017年01期

3 黃鵬;曲湘勇;;近期H7N9流感對(duì)衡陽(yáng)家禽產(chǎn)業(yè)影響及對(duì)策[J];湖南畜牧獸醫(yī);2017年03期

4 李海斌;劉艷芹;劉影影;李盼;安珍;吳衛(wèi)東;;人感染H7N9禽流感的診治與防控措施[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2017年09期

5 韓有恩;崔桓瑜;陳慶中;高寶德;;H7N9甲型流感研究進(jìn)展[J];甘肅畜牧獸醫(yī);2017年08期

6 李善琴;黃保英;齊香榮;任皎;趙莉;宋敬東;王文玲;譚文杰;阮力;田厚文;;H7N9流感假病毒制備條件的優(yōu)化及其在中和抗體檢測(cè)中的初步應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2016年03期

7 白愛(ài)竹;曾穎玲;王艷明;曾婉輝;;H7N9疫情時(shí)期發(fā)熱門(mén)診護(hù)理管理[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2015年07期

8 許煥如;;12例人感染H7N9禽流感重癥患者的護(hù)理[J];家庭醫(yī)藥.就醫(yī)選藥;2016年09期

9 董志珍;鄭文杰;王乃福;趙祥平;吳冬雪;王玉玲;馬晶;賈潤(rùn)清;王建華;張曉光;;H7N9禽流感病毒等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2013年07期

10 張湘安;代茂;楊麗莎;;由H7N9引發(fā)的對(duì)人獸共患病的思考[J];湖南畜牧獸醫(yī);2013年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 董航;丁壯;;H7N9引發(fā)食品安全問(wèn)題對(duì)中國(guó)肉雞產(chǎn)業(yè)的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

2 潘艷艷;王志娟;馬紅麗;;H7N9禽流感期間臨時(shí)隔離病房的籌備[A];第四屆長(zhǎng)三角地區(qū)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)大會(huì)暨2014年浙江省創(chuàng)傷學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2014年

3 李長(zhǎng)貴;徐康維;劉書(shū)珍;邵銘;袁力勇;徐苗;王軍志;;同亞型抗血清參考品在甲型H7N9流感病毒血凝素含量檢測(cè)中的適用性研究[A];2013年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國(guó)藥師周論文集[C];2013年

4 郭曉偉;;循證護(hù)理作用于1例人感染H7N9禽流感患者的效果觀察[A];2014第十屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)災(zāi)害醫(yī)學(xué)、重癥醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)暨健康產(chǎn)業(yè)成果展示洽談會(huì)學(xué)術(shù)論文集[C];2014年

5 盧受f;;H7N9流感的生態(tài)學(xué)分析及防控對(duì)策[A];第25屆廣東省科技進(jìn)步活動(dòng)月畜牧獸醫(yī)學(xué)術(shù)與科技創(chuàng)新發(fā)展大會(huì)論文集[C];2016年

6 劉超宇;;屠呦呦獲獎(jiǎng)引發(fā)中醫(yī)爭(zhēng)議的文本分析研究——基于與中醫(yī)防治H7N9事件的對(duì)比[A];安徽省第七屆新聞傳播學(xué)科研究生論壇論文集[C];2015年

7 施會(huì)強(qiáng);顧云飛;顧玉萍;俞亞波;;后H7N9流感時(shí)代京海黃雞產(chǎn)業(yè)化經(jīng)營(yíng)的思考[A];第四屆（2014）中國(guó)黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會(huì)會(huì)刊[C];2014年

8 王國(guó)政;崔大偉;周華君;金美彤;戴玉柱;成軍;;標(biāo)本類(lèi)型對(duì)甲型禽流感H7N9病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的影響[A];2015浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2015年

9 Xiliang Wang;Penghui Yang;Yueqiang Duan;Hongjing Gu;Rui Chen;Zhongpeng Zhao;Liangyan Zhang;Li Xing;Chengcai Lai;;Response to a monovalent influenza A(H7N9) vaccine[A];第九屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2014年

10 徐小燕;許金美;殳儆;王黎梅;;高致病性人禽流感(H7N9)疑似與確診患者的護(hù)理[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一屆重癥心臟全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)暨第二屆西湖重癥醫(yī)學(xué)論壇、2013年浙江省重癥醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 董偉;衛(wèi)計(jì)委：尚未發(fā)現(xiàn)H7N9人傳人證據(jù)[N];中國(guó)青年報(bào);2013年

2 記者 郭習(xí)松;H7N9可防可控，沒(méi)必要談禽色變[N];湖北日?qǐng)?bào);2017年

3 健康時(shí)報(bào)記者 徐瑤 實(shí)習(xí)記者 曹敏;H7N9來(lái)襲，別怕!這些疫苗在路上了[N];健康時(shí)報(bào);2017年

4 通訊員 劉振 吳蕾;首例重癥人感染H7N9禽流感患者[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2017年

5 本報(bào)記者 肖玫麗;H7N9變異株出現(xiàn)耐藥性 鐘南山：尚不能得出任何結(jié)論[N];21世紀(jì)經(jīng)濟(jì)報(bào)道;2017年

6 記者 鄭可歡;廣東率先啟動(dòng)H7N9免疫試點(diǎn)工作[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2017年

7 記者 楊金偉;5月H7N9禽流感死亡37人[N];健康報(bào);2017年

8 記者 陳青;滬研究人員發(fā)現(xiàn)人體用H7N9抗體[N];文匯報(bào);2017年

9 記者 張建列 通訊員 石睿;“防治H7N9亞型禽流感科技攻關(guān)”項(xiàng)目通過(guò)驗(yàn)收[N];廣東科技報(bào);2017年

10 記者 周凱;上海新增1例人感染H7N9禽流感病例[N];中國(guó)青年報(bào);2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳曉鑫;高致病性H7N9的致病特征及疫苗對(duì)病毒的免疫效應(yīng)研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 劉晶晶;重組嵌合新城疫病毒載體的構(gòu)建及其在H7N9和H9N2亞型禽流感疫苗研制中的應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

3 俞亮;甲型H7N9禽流感重癥患者臨床、病毒學(xué)、組織病理學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2014年

4 張旋;膿毒癥在H7N9禽流感以及侵襲性肺曲霉菌病中的臨床研究[D];浙江大學(xué);2018年

5 趙永坤;H7N9亞型流感病毒樣顆粒免疫原制備與精制免疫球蛋白研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2017年

6 楊美芳;H7N9禽流感重癥化預(yù)警臨床研究[D];浙江大學(xué);2015年

7 孔暉暉;H7N9亞型流感病毒遺傳演化分析及H7N9弱毒疫苗在哺乳動(dòng)物模型上的免疫效力評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

8 王鐵成;H7N9亞型流感病原生態(tài)學(xué)調(diào)查與流感病毒通用型人源化抗體的初步探索[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

9 鮑琳琳;小鼠模型評(píng)價(jià)球蟲(chóng)佐劑對(duì)H7N9禽流感病毒滅活疫苗的增效作用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 朱聞斐;H7N9禽流感病毒致病與傳播機(jī)制研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李繼清;兩株不同H7N9病毒抗宿主天然免疫比較研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

2 徐思璇;基于風(fēng)險(xiǎn)社會(huì)放大框架的廣東廣播電視臺(tái)H7N9流感報(bào)道研究[D];廣西大學(xué);2018年

3 鄭曉琴;ECMO在人感染H7N9禽流感引起的重癥呼吸衰竭中的應(yīng)用及預(yù)后危險(xiǎn)因素分析[D];浙江大學(xué);2018年

4 馬旺;江蘇省人感染H7N9禽流感臨床和流行病學(xué)特征及疾病負(fù)擔(dān)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

5 夏云;H7N9疫情對(duì)家禽產(chǎn)業(yè)的影響[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 李善琴;基于假病毒的H7N9流感病毒中和抗體檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2016年

7 陳原一;《解放日?qǐng)?bào)》和《東方早報(bào)》H7N9新聞報(bào)道研究（2013年4月至9月）[D];華東師范大學(xué);2014年

8 安麗莎;對(duì)甲型H7N9流感新聞報(bào)道的批評(píng)性語(yǔ)篇分析[D];陜西師范大學(xué);2014年

9 郭金磊;重組人甘露糖結(jié)合凝集素與人感染H7N9亞型流感病毒相互作用研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2015年

10 黃生波;玉竹多糖對(duì)H7N9流感病毒裂解疫苗粘膜免疫的佐劑效力研究[D];湖南師范大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2741820