本文關(guān)鍵詞：多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的抗原表位的預(yù)測及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的預(yù)測并鑒定分析多房棘球絳蟲抗原蛋白Emy162及TSP3的B細胞和T細胞(Th1型、Th2型、Th17型)優(yōu)勢抗原表位,為后續(xù)抗多房棘球蚴多表位疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。方法1.Genbank獲取Emy162、TSP3的氨基酸序列后通過生物信息學(xué)軟件SOPMA預(yù)測二級結(jié)構(gòu)特征,進一步通過在線軟件IEDB、SYFPEITHI、Bcepred和ABCpred預(yù)測潛在的T細胞和B細胞表位。2.收集Emy162蛋白、TSP3蛋白、PBS分別免疫后的BALB/c小鼠得脾臟淋巴細胞,并用化學(xué)合成的抗原小肽進行刺激共培養(yǎng)。通過脾臟淋巴細胞增殖實驗、培養(yǎng)上清與病人血清ELISA實驗,鑒定出具有良好免疫原性的B細胞抗原表位。3.人工合成的T細胞抗原小肽刺激Emy162蛋白、TSP3蛋白、PBS致敏小鼠脾臟淋巴細胞,通過ELISA、ELISpot、流式細胞術(shù)等方法檢測Th1、Th2、Th17型細胞因子的表達,鑒定出具有良好免疫原性的Th1、Th2、Th17型細胞抗原表位。結(jié)果1.Emy16、TSP3蛋白均存在潛在優(yōu)勢抗原性表位存在。Emy162的8個潛在優(yōu)勢B細胞表位為E7-13、E19-27、E28-36、E37-48、E78-83、E101-109、E112-121、E129-139;Emy162的6個T細胞潛在優(yōu)勢抗原表位為E7-13、E36-41、E80-89、E87-96、E97-106、E129-139。TSP3的7個B細胞潛在優(yōu)勢抗原表位分別為T18-33、T45-55、T53-63、T64-75、T80-90、T92-104、T110-122;TSP3蛋白的8個T細胞表位是T33-42、T45-55、T53-63、T68-77、T80-90、T92-104、T110-122、T134-144。2.Emy162、TSP3蛋白各B抗原表位的抗原性不同。Emy162的3個優(yōu)勢B抗原表位為E19-27、E112-121、E129-139;TSP3的3個優(yōu)勢B抗原表位為T18-33、T45-55、T110-122。3.Emy162蛋白各T抗原表位可誘導(dǎo)不同細胞因子的表達。E7-13、E36-41、E80-89、E129-139為Emy162的Th1型優(yōu)勢抗原表位;E36-41、E87-96、E97-106為Emy162的Th2型優(yōu)勢抗原表位;E36-41、E87-96、E97-106為Emy162的Th17型優(yōu)勢抗原表位。4.TSP3蛋白各T抗原表位可誘生不同細胞因子的表達。TSP3的優(yōu)勢Th1型抗原表位為T33-42、T45-55、T80-90、T110-122;TSP3的Th2型優(yōu)勢抗原表位為T45-55、T68-77、T92-104;TSP3的Th17型優(yōu)勢抗原表位為T53-60、T80-90。結(jié)論1.Emy162及TSP3具有良好的抗原性,并存在潛在優(yōu)勢抗原表位。利用生物信息學(xué)的方法預(yù)測分析出了Emy162的8個B細胞表位和6個T細胞表位,預(yù)測分析出TSP3蛋白8個T細胞和7個B細胞表位。2.Emy162蛋白具有3個優(yōu)勢B細胞表位、4個Th1型優(yōu)勢抗原表位、3個Th2型優(yōu)勢抗原表位、3個Th17型優(yōu)勢抗原表位。3.TSP3蛋白具有3個優(yōu)勢B細胞表位、4個Th1型優(yōu)勢抗原表位、3個Th2型優(yōu)勢抗原表位、2個Th17型優(yōu)勢抗原表位。4.鑒定出的各優(yōu)勢抗原表位,為后續(xù)研制用于免疫預(yù)防接種、診斷、治療的高效多表位疫苗奠定了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：多房棘球蚴 生物信息學(xué) 抗原表位 B細胞表位 T細胞表位
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R532.32
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要符號對照表10-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的免疫優(yōu)勢表位的預(yù)測14-30
• 2.1 材料與方法14-15
• 2.1.1 獲取Emy162及TSP3蛋白的氨基酸序列14
• 2.1.2 Emy162及TSP3蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)特征預(yù)測14
• 2.1.3 預(yù)測Emy162及TSP3抗原蛋白的T細胞抗原表位14-15
• 2.1.4 預(yù)測Emy162及TSP3蛋白的B細胞抗原表位15
• 2.2 結(jié)果15-26
• 2.2.1 獲取Emy162及TSP3蛋白的氨基酸序列15-16
• 2.2.2 預(yù)測的Emy162及TSP3蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)16-17
• 2.2.3 預(yù)測所得Emy162及TSP3蛋白的T細胞抗原表位17-21
• 2.2.4 預(yù)測所得Emy162及TSP3抗原的B細胞表位21-26
• 2.3 討論26-28
• 2.4 結(jié)論28-30
• 第3章 多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的B細胞免疫優(yōu)勢表位的鑒定30-40
• 3.1 材料與方法30-33
• 3.1.1 材料30-32
• 3.1.1.1 抗原的獲得30
• 3.1.1.2 實驗動物30
• 3.1.1.3 實驗儀器30-31
• 3.1.1.4 實驗動物及試劑31
• 3.1.1.5 試劑配制31-32
• 3.1.2 方法32-33
• 3.1.2.1 小鼠的免疫32
• 3.1.2.2 小鼠脾臟淋巴細胞的分離[50]32
• 3.1.2.3 小鼠脾臟淋巴細胞增殖實驗32-33
• 3.1.2.4 抗原小肽與病人血清ELISA反應(yīng)33
• 3.2 結(jié)果33-36
• 3.2.1 Emy162的B細胞抗原小肽刺激后淋巴細胞增殖反應(yīng)的檢測33-34
• 3.2.2 TSP3的B細胞抗原小肽刺激后淋巴細胞增殖反應(yīng)的檢測34-35
• 3.2.3 Emy162的B細胞抗原小肽與病人血清ELISA反應(yīng)的檢測35-36
• 3.2.4 TSP3的B細胞抗原小肽與病人血清ELISA反應(yīng)的檢測36
• 3.3 討論36-38
• 3.4 結(jié)論38-40
• 第4章 多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的T細胞免疫優(yōu)勢表位的鑒定40-57
• 4.1 材料與方法40-45
• 4.1.1 材料40-42
• 4.1.1.1 實驗儀器40
• 4.1.1.2 實驗動物40
• 4.1.1.3 免疫物40-41
• 4.1.1.4 實驗試劑41
• 4.1.1.5 試劑配制41-42
• 4.1.2 方法42-45
• 4.1.2.1 小鼠的免疫42
• 4.1.2.2 小鼠脾臟淋巴細胞的分離42-43
• 4.1.2.3 小鼠脾臟淋巴細胞的培養(yǎng)43
• 4.1.2.4 小鼠脾臟淋巴細胞因子ELISA檢測43-44
• 4.1.2.5 小鼠脾臟淋巴細胞因子ELISpot檢測44
• 4.1.2.6 小鼠脾臟淋巴細胞因子流式細胞術(shù)檢測44-45
• 4.2 結(jié)果45-53
• 4.2.1 Emy162的優(yōu)勢T抗原表位鑒定45-49
• 4.2.1.1 不同細胞因子ELISA檢測篩選T表位45-47
• 4.2.1.2 不同細胞因子ELISpot檢測篩選T表位47-48
• 4.2.1.3 流式細胞術(shù)對優(yōu)勢抗原表位的驗證48-49
• 4.2.2 TSP3的優(yōu)勢T抗原表位鑒定49-53
• 4.2.2.1 不同細胞因子ELISA檢測鑒定T表位49-50
• 4.2.2.2 不同細胞因子ELISpot檢測篩選T表位50-52
• 4.2.2.3 流式細胞術(shù)對優(yōu)勢抗原表位的驗證52-53
• 4.3 討論53-55
• 4.4 結(jié)論55-57
• 參考文獻57-64
• 全文總結(jié)64-66
• 創(chuàng)新點66-67
• 不足和展望67-68
• 致謝68-69
• 綜述69-83
• 參考文獻77-83
• 個人簡歷83-84

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：多房棘球蚴抗原蛋白Emy162及TSP3的抗原表位的預(yù)測及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：272854