【摘要】：背景:不同病因引起的肝臟慢性炎癥都會(huì)引起纖維化的免疫反應(yīng),最終會(huì)導(dǎo)致肝衰竭。目前,基因治療是一種很有前景的治療方法,通過激活巨噬細(xì)胞減輕肝纖維化。GRA15_(II)可以直接誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞激活為M1型巨噬細(xì)胞。我們前期的研究表明,LV-gra15_Ⅱ可體外驅(qū)使巨噬細(xì)胞向M1型巨噬細(xì)胞偏移,尾靜脈注射激活的M1型巨噬細(xì)胞進(jìn)入日本血吸蟲病小鼠模型體內(nèi)可以明顯改善血吸蟲病肝纖維化程度。目的:我們的研究目的是為了確定LV-gra15_Ⅱ能否在體內(nèi)促使肝巨噬細(xì)胞極化為M1型巨噬細(xì)胞(LV-gra15_Ⅱ-M),并探索激活的LV-gra15_Ⅱ-M減輕血吸蟲病肝纖維化的潛在機(jī)制。方法:首先,從Ⅱ型弓形蟲PRU株擴(kuò)增出LV-gra15_Ⅱ基因,構(gòu)建重組的pEGFP-gra15_Ⅱ質(zhì)粒,然后,LV-gra15_Ⅱ由吉?jiǎng)P公司構(gòu)建。最后,分別通過尾靜脈高壓注射將LV-gra15_Ⅱ,LV-blank或PBS進(jìn)SPF級的BALB/c小鼠體內(nèi),七天后,經(jīng)皮膚感染日本血吸蟲尾蚴15±2條制作肝纖維化小鼠模型,并在感染當(dāng)天分別再進(jìn)行一次尾靜脈注射LV-gra15_Ⅱ,LV-blank或PBS,尾蚴感染8周后,麻醉小鼠留取血液,提取肝組織及肝巨噬細(xì)胞檢測肝功能,纖維化相關(guān)指標(biāo)及肝巨噬細(xì)胞激活狀態(tài),然后將肝巨噬細(xì)胞與小鼠肝星狀細(xì)胞株(JS1)體外進(jìn)行共培養(yǎng),觀察JS1細(xì)胞凋亡情況及MMP13溶解膠原的情況。結(jié)果:結(jié)果發(fā)現(xiàn)LV-gra15_Ⅱ不僅成功地進(jìn)入了小鼠肝巨噬細(xì)胞,而且能夠有效且持續(xù)地在肝巨噬細(xì)胞內(nèi)表達(dá)GRA15_Ⅱ蛋白至少2個(gè)月以上。此外,LV-gra15_Ⅱ誘導(dǎo)的LV-gra15_Ⅱ-M在體內(nèi)表現(xiàn)為M1型巨噬細(xì)胞,伴iNOS,TNF-α和Ly6C表達(dá)的增加,及CD206表達(dá)的降低。LV-gra15_Ⅱ的注射能明顯降低日本血吸蟲病小鼠肝肉芽腫和纖維化,伴TGF-β1,Arg-1,α-SMA表達(dá)明顯降低,及MMP13表達(dá)明顯增高,而肝功能和小鼠的活力并沒有受到影響。體外實(shí)驗(yàn)表明,LV-gra15_Ⅱ-Ms的細(xì)胞上清中趨化因子配體2(CCL2)和一氧化氮(NO)水平明顯升高。此外,在transwell系統(tǒng)中,LV-gra15_Ⅱ-Ms不僅能夠分泌溶解Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)的MMP13,而且還能促進(jìn)JS1細(xì)胞凋亡。結(jié)論:總之,我們研究發(fā)現(xiàn)LV-gra15_Ⅱ通過尾靜脈注射后可使小鼠肝臟巨噬細(xì)胞激活為M1型巨噬細(xì)胞,并在肝組織中誘發(fā)Th1/M1偏移的免疫反應(yīng);而Th1/M1型為主的免疫微環(huán)境能夠通過減少TGF-β1的分泌,增加MMP13的表達(dá)和促進(jìn)肝星狀細(xì)胞細(xì)胞的凋亡減輕血吸蟲病肝纖維化。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R532.21;R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2619071