【摘要】：目的：蜱媒疾病是指由蜱傳播的某些種類的病毒、細(xì)菌和寄生蟲等所引起的一系列疾病，在世界范圍內(nèi)廣泛流行。在中國新疆蜱媒疾病是非常普遍的，但近年來對于蜱種的分布及攜帶相應(yīng)病原的基因型等方面的信息較少，并且沒有一種相對簡便的檢測方法。本研究通過對新疆北疆部分地區(qū)蜱的地理分布和相應(yīng)病原體的攜帶，為研究媒介蜱和蜱媒病原體的遺傳多態(tài)性和進(jìn)化關(guān)系奠定基礎(chǔ)。 方法：⑴于新疆北疆14個縣市19個調(diào)查點采集畜牧體表寄生硬蜱，，通過傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)分析，結(jié)合線粒體16S rDNA基因與COI基因進(jìn)行綜合分析，鑒定所采集的蜱種的種屬及其分布特征。⑵采用病原體分離培養(yǎng)和巢式PCR擴(kuò)增測序技術(shù)對上述鑒別獲得的所有蜱種進(jìn)行蜱媒病原體的分離檢測，確定病原體基因型，調(diào)查蜱媒病原體的攜帶率。 結(jié)果：經(jīng)傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)分析，采集獲得4711只寄生蜱可歸屬為2個亞科，4個屬，7個種，分別為亞洲璃眼蜱，刻點血蜱，草原革蜱，邊緣革蜱，圖蘭扇頭蜱，殘緣璃眼蜱和嗜群血蜱。相比于三十年前，隨著氣溫及降水的改變，前五位蜱種成為該區(qū)域的優(yōu)勢蜱種。并于部分采集點發(fā)現(xiàn)一些新興蜱種。蜱媒萊姆疏螺旋體于克拉瑪依、木壘、裕民、伊寧、察布查爾和石河子-沙灣地區(qū)檢出，陽性比例分別為18%、6.25%、3.33%、53.5%、86%和6.1%，且從新疆刻點血蜱、亞洲璃眼蜱、圖蘭扇頭蜱和邊緣革蜱中分離到萊姆病螺旋體。通過對萊姆疏螺旋體5S-23S rRNA基因間隔區(qū)測序分析表明，獲得3種伯氏疏螺旋體不同序列，同源性98.6%-99.5%；4種伽式疏螺旋體不同序列，同源性在98.8%-99.6%，并從圖蘭扇頭蜱中首次分離到伯氏疏螺旋體。另外，采用巢式PCR擴(kuò)增結(jié)果可知新疆北疆不同地區(qū)、不同蜱種攜帶埃立克次體、人粒細(xì)胞無形體，且攜帶率較高，提示新疆北疆地區(qū)存在兩種蜱媒立克次體病的自然疫源地。 結(jié)論：(1)采集獲得的成年蜱4711只，鑒定為2個亞科，4個屬，7個種，亞洲璃眼蜱、刻點血蜱成為新疆北疆14個縣市的新優(yōu)勢蜱種；(2)首次從新疆北疆地區(qū)分離到伯氏疏螺旋體，并證明其分布及攜帶蜱種發(fā)生了擴(kuò)散；(3)從調(diào)查點采集到的蜱種均檢測出蜱媒立克次體病，證明新疆北疆可能存在立克次體自然疫源地；(4)優(yōu)勢蜱種的改變、病原分布的擴(kuò)散和檢測的高陽性率，提示隨著氣候及降雨量等因素的改變，蜱媒疾病的分布及病原類型也發(fā)生變化。
【圖文】：

多數(shù)（約占 95%），包括哈薩克羊、美利奴羊、湖羊和阿勒泰羊；牛群主要為新疆褐牛、赫斯特牛和哈薩克牛；還有少部分馬與駱駝分屬于哈薩克馬與雙峰駝。圖1-1 采集地點Fig 1-1 Map of the study area.(A): The Xinjiang Uygur Autonomous Region; (B): fourteen survey counties in northern Xinjiang.1.1.2 蟲體的采集所有硬蜱在兩年里連續(xù)收集。2012 年 4~5 月，首先從 10 個縣 12 個采集點進(jìn)行采集；至 2013 年五一期間，針對不同景觀地貌，又從 5 個縣 7 個點進(jìn)行調(diào)查采集。對所有采集樣本包括采集地點地點，宿主，每個動物采集蜱的數(shù)量和采集日期進(jìn)行記錄。每點隨機(jī)抽取畜牧 10~20 頭，采集其體表寄生蜱，共獲得 4711 只硬蜱，放置于潮濕陰暗處飼養(yǎng)，保持其存活帶回實驗室。各地區(qū)采集蜱的數(shù)量及雌雄比見圖 1-2。AB

圖 1-2 不同地區(qū)蜱蟲組成Fig 1-2 The ticks of different areas1.1.3 主要試劑PCR 所用試劑均購自大連寶生物工程有限公司；DNA 提取試劑盒 DNeasy Blood&Tissue kit 購自德國 Qiagen 公司；DNA Marker、質(zhì)粒小提試劑盒、DNA 回收試劑盒、T4 DNA 連接酶試劑盒均購自北京天根生化科技有限公司；瓊脂糖購自 Sigma 公司，其它所用試劑均為分析純。1.1.4 主要儀器設(shè)備微量移液器（德國 eppendorf 公司）；T-GRADIENT PCR（美國 Bio-Rad 公司）；ImagLab Version 3.0 凝膠成像系統(tǒng)（美國 Bio-Rad 公司）；SW-CJ-2F 超凈工作臺（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；Labofuge 4008 高速冷凍離心機(jī)（德國 Heraeu 公司）；-80℃超低溫冰箱（美國 Thermo 公司）；TGL-16L 型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；DYY-6B型電泳儀（北京六一儀器廠）；YXQ-SG46 高壓蒸汽滅菌器（上海佳勝實驗設(shè)備有限公司）；微波爐（日本松下公司）；SHH.W21 電熱恒溫水浴箱（北京光明醫(yī)療儀器廠）；JA2003N 電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；XW-80A 渦旋振蕩器（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（HIQ-X100）；解剖顯微鏡（LEICA
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R53

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2581075