【摘要】：第一部分：南京地區(qū)淋病奈瑟菌耐藥表型和基因型監(jiān)測目的：日益嚴(yán)峻的淋球菌耐藥問題已成為公共健康的嚴(yán)重威脅。本研究旨在更新南京地區(qū)淋球菌的耐藥監(jiān)測數(shù)據(jù),并對篩選出的頭孢曲松低敏株進(jìn)行基因分型和頭孢曲松耐藥相關(guān)基因檢測。方法：在2011至2012年間于南京性病門診連續(xù)招募具有急性尿道炎癥狀的男性受試者。對采集的334株淋球菌以瓊脂稀釋法確定每株菌對青霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、大觀霉素和頭孢曲松的最小抑菌濃度(MIC)。分別采用酸性紙片法和聚合酶鏈反應(yīng)(PCCR)法鑒定產(chǎn)青霉素酶淋球菌(PPNG)和四環(huán)素高度耐藥淋球菌(TRNG),并對PPNG和TRNG所攜帶的耐藥質(zhì)粒以多重PCR法分型。在頭孢曲松低敏株(MIC≥0.125mg/L)中檢測5個耐藥相關(guān)基因(penA、mtrR、porBlb、ponA和pilQ)的序列變異情況,并確定其淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)的序列型(STs)。結(jié)果：本研究中98.8%(330/334)的淋球菌對環(huán)丙沙星耐藥,四環(huán)素和青霉素的耐藥率分別高達(dá)97.9%(327/334)和67.7%(226/334)。未發(fā)現(xiàn)頭孢曲松和大觀霉素的耐藥株。質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥株所占比例為52%(175/334),包括120株(36%)PPNG和104株(31%)TRNG。90%(108/120)的PPNG株攜帶亞洲型β-內(nèi)酰胺質(zhì)粒,96%(100/104)TRNG菌株含有荷蘭型tetM質(zhì)粒。增高的頭孢曲松MIC值見于15株(4.5%)淋球菌,分布于多種NG-MAST序列型,在penA、mtrR、porB1b基因序列中檢測到多個耐藥突變位點。共發(fā)現(xiàn)四種非鑲嵌狀PBP2氨基酸突變模式,其中一種為本研究首次報道。結(jié)論：南京地區(qū)目前的淋病奈瑟菌的抗生素耐藥模式與5年前基本相同。耐藥質(zhì)粒譜的變化提示了淋球菌株間存在頻繁的基因交換。頭孢曲松和大觀霉素仍可作為本地區(qū)淋病治療的一線用藥。但頭孢曲松低敏株的存在和大觀霉素MIC的上升趨勢提示應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)淋病奈瑟菌抗生素耐藥表型和基因型的檢測。第二部分：淋病奈瑟菌依賴吲哚胺2,3雙加氧酶-1的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制研究目的：人體對淋病奈瑟菌的免疫防御反應(yīng)短暫而微弱。本研究嘗試在體外細(xì)胞水平證明IDO-1參與淋球菌的免疫調(diào)節(jié)。方法：淋球菌體外感染人外周血來源的樹突狀細(xì)胞(moDC),檢測IDO-1的蛋白表達(dá)量和其酶活性。在淋球菌感染后的noDC與同源淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)體系(MLR)中,加入IDO-1抑制劑L-1-MT,檢測IDO-1活性阻斷對T細(xì)胞增殖的影響。在淋球菌和moDC的共培養(yǎng)體系中,分別加入IFN-γ和TLR4的中和抗體,檢測IFN-γ和TLR4阻斷對活性IDO-1誘導(dǎo)的影響。結(jié)果：淋球菌體外感染人moDC可誘導(dǎo)產(chǎn)生活性IDO-1,并且淋球菌感染DC對T細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)依賴于IDO-1活性。淋球菌在人DC對IDO-1的誘導(dǎo)作用不依賴于菌體的活力,部分由TLR4介導(dǎo),部分依賴于IFN-γ的表達(dá)。結(jié)論：淋球菌通過誘導(dǎo)產(chǎn)生IDO-1下調(diào)DC的T細(xì)胞刺激能力,可能作為淋球菌的一種免疫逃避機(jī)制。
【圖文】：

圖１．本研究中的Ｎ巧淋球菌株（頭袍曲松ＭＩＣ＝０．１巧ｍｇ／Ｌ）的ＰＢＰ２氨蒜酸序列與野生逡逑型ＦＭ９株ＰＢＰ２氨基酸序列的比對結(jié)果示意圖。Ｎ巧株的陽Ｐ２發(fā)現(xiàn)了目個突變位點，逡逑分別為３４■日Ｄ插入，Ａ５０１Ｖ，巧０４Ｌ．Ａ５１０Ｖ和Ａ日１６Ｇ，是本研究新報道的巧列模式，被命逡逑名為序列型ＸＵ逡逑．－：巧化－ＭＡＴ

Ｕ刮取ＦＡ１０９０凍存菌懸液接種于ＧＣ平板，置于３６’Ｃ，５％Ｃ０２解箱培養(yǎng)逡逑１８－２４ｈ；逡逑引體式顯微鏡下選取約２００個RGｉ－，Ｏｐａ＋菌落（圖１）重懸于５0ｎｌＰＢＳ，涂板逡逑后于上述條件培養(yǎng)過夜增菌；逡逑巧收集約？ｌ0６ＣＦＵ重懸于３ｍｌ大豆膀酶凍存液，５０叫／管分叛－８0‘Ｃ凍存：逡逑４）滅活：調(diào)整菌懸液濃度至１０７ＣＦＵ／ｍｌ峰梯度稀釋法確定ＯＤｍｏｏ＝0．１）；邋ａ．多逡逑聚甲酸固定；化５0／0多聚甲醒室溫固定ＩＳｍｉｎ，，ＰＢＳ溶液，３５００ｇ離也５ｍｉｎ逡逑充分洗涂Ｈ次；ｂ．熱滅活：６０’Ｃ加熱３０ｍｈｉ；逡逑巧調(diào)整濃度后，！特定ＭＯＩ〔１；邋１、１；邋３、１：邋１０）感染細(xì)胞。阻斷實驗在逡逑３４逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R759.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 蔣英;劉鍵;謝延;林惠玲;王怡心;;103株淋球菌耐藥性研究[J];實用預(yù)防醫(yī)學(xué);2013年03期

2 鐘娜;鄭文愛;王芳乾;張麗芬;陸玉珠;;2006-2011年海南地區(qū)淋球菌耐藥性監(jiān)測分析[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2013年01期

本文編號：2571137