本文關(guān)鍵詞：流行性乙型腦炎PCR檢測方法的建立與應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:根據(jù)Genebank收錄的流行性乙型腦炎病毒序列使用Oligo6.0軟件及NCBI Blast設(shè)計特異性引物序列;不斷優(yōu)化PCR檢測條件,采用不同反應(yīng)溫度,不同反應(yīng)時間,不同引物濃度確定最佳PCR檢測條件,建立流行性乙型腦炎病毒RT-PCR檢測方法。方法:以2013年6月至2013年10月間來本院就診的21例流行性乙型腦炎患者為研究對象,并且以此期間在本院進行體檢的健康人20例為健康對照組,收集所有患者和健康對照組研究對象的血液樣本。采用PCR進行檢測,并與ELISA方法進行比較。首先從研究對象的血液中分離流行性乙型腦炎病毒,接種BHK-21乳倉鼠腎細胞進行擴大培養(yǎng),收集增殖培養(yǎng)后的病毒,根據(jù)Genebank收錄的流行性乙型腦炎病毒序列使用Oligo6.0軟件及NCBI Blast設(shè)計特異性引物序列,同時不斷優(yōu)化PCR檢測條件,采用不同反應(yīng)溫度,不同反應(yīng)時間,不同引物濃度確定最佳PCR檢測條件。對2013年6月至2014年12月間來本院就診的87例疑似流行性乙型腦炎患者用RT--PCR方法進行檢測,檢測時直接使用疑似流行性乙型腦炎患者的血清進行檢測。并與流行性乙型腦炎腦脊液ELISA檢測方法進行比較。檢測其準確度和靈敏度。結(jié)果:PCR條件為50℃、60min,引物加入1μl時PCR反應(yīng)效果最佳。結(jié)果顯示,PCR檢測結(jié)果陽性率為95.2%,PCR產(chǎn)物測序表明PCR檢測準確率達到100%。臨床應(yīng)用測評顯示PCR檢測的準確率可以達到96.8%。結(jié)論:RT-PCR具有很高的診斷準確率,能夠縮短診斷時間,降低診斷費用,減少患者受到的傷害,可以在臨床診斷乙型腦炎方面推廣應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】：乙型腦炎 PCR 陽性率 準確率
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R512.32;R440
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文縮略詞表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 研究內(nèi)容11-20
• 2.1 材料11-12
• 2.1.1 研究對象11
• 2.1.2 主要試劑11-12
• 2.1.3 主要儀器12
• 2.1.4 主要溶液配制12
• 2.2 方法12-20
• 2.2.1 流行性乙型腦炎病毒的分離12-13
• 2.2.2 接種和分離病毒13-14
• 2.2.3 RT--PCR14
• 2.2.4 RT-PCR的檢測14-16
• 2.2.5 PCR產(chǎn)物測序16-17
• 2.2.6 ELISA檢測17-19
• 2.2.7 臨床應(yīng)用測評19
• 2.2.8 統(tǒng)計學(xué)處理19-20
• 第3章 結(jié)果20-24
• 3.1 RNA提取結(jié)果20
• 3.2 PCR條件的優(yōu)化結(jié)果20-21
• 3.3 PCR結(jié)果21-22
• 3.4 PCR產(chǎn)物測序結(jié)果22
• 3.5 應(yīng)用建立的RT-PCR方法與ELISA檢測比較結(jié)果22
• 3.6 臨床應(yīng)用測評結(jié)果22-24
• 第4章 討論24-26
• 第5章 結(jié)論26-27
• 致謝27-28
• 參考文獻28-29
• 綜述29-47
• 參考文獻43-47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹齊樹;錢平;朱巧艷;錢蘇紅;李靜逸;林飛宏;李祥敏;孫艷芳;陳煥春;;山西豬源基因Ⅰ型乙型腦炎病毒的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2011年05期

2 沈婷;周斌;陳溥言;;檢測豬乙型腦炎病毒抗體間接ELISA方法的建立與應(yīng)用[J];畜牧與獸醫(yī);2010年04期

3 吳鵬;曹瑞斌;周斌;張羽;沈婷;陳溥言;;乙腦病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1的原核表達及重組蛋白間接ELISA方法的初步建立[J];畜牧與獸醫(yī);2010年03期

4 高曉艷;付士紅;王環(huán)宇;翟友剛;馮云;呂志;梁國棟;;流行性乙型腦炎病毒IgG抗體捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測方法的建立[J];疾病監(jiān)測;2010年02期

5 李乙江;鮑曉偉;洪雪花;黃勇;張泉鵬;王意銀;鄭鈞豐;杜強;李剛山;邱薇;鄭穎;張富強;范泉水;張海林;李作生;;流行性乙型腦炎病毒實驗室檢測研究進展[J];中國自然醫(yī)學(xué)雜志;2009年03期

6 潘麗雯;梁惠慈;林海生;高媛媛;李金玲;;小兒流行性乙型腦炎48例臨床分析[J];廣州醫(yī)藥;2009年03期

7 朱兆奎;張曦;滕崢;趙百慧;邵俊杰;李燕婷;盧偉;;SYBR GreenⅠ實時PCR檢測乙腦病毒方法的建立與初步應(yīng)用[J];中國媒介生物學(xué)及控制雜志;2007年03期

8 鄧永;徐高原;;豬乙型腦炎研究進展[J];養(yǎng)殖與飼料;2007年06期

9 汪永紅;李軍;王昌富;江濤;張國良;高清萍;王植雄;;溫育和洗板方式對ELISA測定結(jié)果的影響[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2006年11期

10 譚翰清;陳華;譚海芳;;乙型腦炎病毒檢測技術(shù)研究進展[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2006年11期

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本文編號：256319