【摘要】：目的研究可溶性蟲卵抗原(SEA)和可溶性成蟲抗原(SWA)刺激日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)感染小鼠腸系膜淋巴結(jié)(MLN)Th17細(xì)胞的免疫應(yīng)答。方法新西蘭大白兔2只,經(jīng)腹部皮膚感染日本血吸蟲尾蚴(約1 000條/兔),45 d后收集成蟲及蟲卵,制備SWA和SEA。20只C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為感染組和健康組(10只/組),感染組小鼠經(jīng)腹部皮膚感染日本血吸蟲尾蚴,(40±5)條/鼠,感染后5~6周ELISA檢測(cè)血清中SEA和SWA特異性IgG抗體。分離兩組小鼠MLN中的淋巴細(xì)胞,均給予4種不同條件刺激:無(wú)刺激組(A組),SEA(100μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml)(B組),SWA(100μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml)(C組),抗-CD3 mAb(1μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml)(D組)。培養(yǎng)9 h后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17細(xì)胞;培養(yǎng)72 h后,ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的白細(xì)胞介素(IL-17)和γ干擾素(IFN-γ)。結(jié)果 ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,感染組小鼠血清SEA、SWA特異性IgG抗體的吸光度(A_(450)值)分別為2.66±0.20和1.68±0.66,高于健康組的0.19±0.05和0.25±0.12(P0.01)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,B組刺激后,感染組淋巴細(xì)胞中CD4~+IL-17~+和CD4~+IFN-γ~+細(xì)胞分別占0.43%和0.56%,高于健康組的0.05%和0.20%(P0.05);C組刺激后則分別占0.39%和0.76%,高于健康組的0.04%和0.19%(P0.05)。兩組小鼠的淋巴細(xì)胞體外經(jīng)SEA(B組)刺激后,感染組淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ和IL-17分別為(49.13±14.71)和(41.73±2.42)pg/ml,高于健康組的(3.27±0.33)和(9.22±0.58)pg/ml(P0.01);經(jīng)SWA(C組)刺激后則分別為(46.92±16.73)和(36.14±4.82)pg/ml,高于健康組的(3.38±0.34)和(8.78±0.93)pg/ml(P0.01)。B組的IL-17含量高于C組(P0.05)。結(jié)論SEA和SWA能體外誘導(dǎo)日本血吸蟲感染C57BL/6小鼠腸系膜淋巴結(jié)的淋巴細(xì)胞分泌IL-17和IFN-γ,SEA刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IL-17的含量明顯高于SWA;SEA和SWA均能誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞分化為CD4~+IL-17~+細(xì)胞和CD4~+IFN-γ~+細(xì)胞。
【圖文】：

中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志2017年4月第35卷第2期ChinJParasitolParasitDisApr.2017，Vol.35，No.2a:P<0.01，b:P<0.05。圖1ELISA檢測(cè)日本血吸蟲感染小鼠血清SEA（A）和SWA（B）特異性IgG抗體Fig.1SEA（A）andSWA（B）specificIgGinseraofmiceinfectedwithS.japonicumdetectedbyELISA蚴/只，感染面積約8cm×12cm，保留20min。45d后收集日本血吸蟲成蟲和蟲卵，用于制備SWA和SEA。20只C57BL/6小鼠按隨機(jī)表法隨機(jī)分為感染組和健康組（10只/組)，感染組小鼠經(jīng)腹部皮膚感染日本血吸蟲尾蚴（40±5）條/鼠。1.4血清采集與腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞懸液的制備小鼠感染日本血吸蟲后第5～6周，眼球取血，分離血清。頸椎脫臼處死小鼠，無(wú)菌取腸系膜淋巴結(jié)，置于200目篩網(wǎng)中央，加1mlHank’s液，用注射器針芯研磨；用15ml離心管收集過(guò)濾的細(xì)胞懸液，，4℃、600×g離心8min，棄上清；10mlHank’s液重懸細(xì)胞，4℃、600×g離心5min；Hank’s液洗滌細(xì)胞2次后，用2mlRPMI1640完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，立即用0.4％臺(tái)盼藍(lán)染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)。1.5SWA和SEA的制備參照文獻(xiàn)［7］的方法，將成蟲和蟲卵分別在冰浴上勻漿，超聲10min，反復(fù)凍融3次，4℃、12000×g離心20min，收集上清液，即為SWA和SEA。分別用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，用多功能微孔板檢測(cè)儀測(cè)定SWA及SEA的濃度并調(diào)整為5mg/ml。1.6流式細(xì)胞儀檢測(cè)特異性抗原刺激細(xì)胞IL-17和IFN-γ的表達(dá)將健康組與感染組小鼠淋巴細(xì)胞密度分別調(diào)整為2×106/ml，分別給予4種不同的刺激：無(wú)刺激組(A組)，SEA（終濃度100μg/ml）+抗-CD28mAb（1μg/ml）（B組），SWA（終濃度100μg/ml）+抗-CD28mAb（1μg/ml）（C組），抗-CD3mAb（1μg/ml）+抗-CD28mAb（1μg/ml）（D組）。37℃?

0.34）和（8.78±0.93）pg/ml（P<0.01）；且B組刺激后感染組小鼠產(chǎn)生IL-17的水平明顯高于C組（P<0.05）（圖2）。2.3SEA和SWA刺激后特異性Th17細(xì)胞的檢測(cè)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，SEA（B組)刺激后，感染組小鼠淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17+CD4+T細(xì)胞占（0.39±0.03）%，IFN-γ+CD4+T細(xì)胞占（0.52±0.05）%，明顯高于健康組的（0.04±0.01）%和（0.19±0.02）%（均P<0.05）；SWA（C組）刺激后為（0.33±0.02）%和（0.70±0.04）%，明顯高于健康組的（0.02±0.01）%和（0.17±0.03）%（均P<0.05）（圖3）。3討論成蟲和蟲卵均能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗原特異性免疫效應(yīng)，即針對(duì)血吸蟲的抗感染免疫和對(duì)宿主臟器造成損害的免疫病理反應(yīng)。目前認(rèn)為日本血吸蟲感染過(guò)程中對(duì)宿主影響最大、最主要的抗原是SWA和SEA。在抗血吸蟲感染過(guò)程中，IgG抗體是抗感染的主要抗體，它具有調(diào)理作用，可增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬功能。日本血吸蟲感染所涉及的細(xì)胞應(yīng)答是逐漸伴隨著IgG抗體產(chǎn)生的過(guò)程。因此，本研究觀察了日本血吸蟲感染誘導(dǎo)的SEA和SWA特異性IgG·108·
【作者單位】： 廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科;廣州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院外二科;廣州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原學(xué)與免疫學(xué)教研室;
【分類號(hào)】：R532.21


本文編號(hào)：2550765