【摘要】：目的：結(jié)核性腦膜炎（tuberculous meningitis，TBM）簡(jiǎn)稱結(jié)腦，占全身結(jié)核病的5-10%，是最嚴(yán)重的肺外結(jié)核病，致死率和致殘率較高，為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題，早期診斷和及時(shí)規(guī)范治療是降低致死率和致殘率的關(guān)鍵。結(jié)腦的致病菌是結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）簡(jiǎn)稱結(jié)核桿菌（tubercle bacilli），屬分枝桿菌屬，因菌體含大量分枝菌酸，故不易著色，但加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間后能抵抗鹽酸乙醇的脫色，，為抗酸桿菌（acid-fast bacilli）的一種類型。若腦脊液抗酸染色陽(yáng)性，則提示結(jié)腦的可能性極大。傳統(tǒng)抗酸染色法的抗酸桿菌檢出率低，對(duì)臨床結(jié)腦診斷的意義不大。改良抗酸染色法通過(guò)提高有限腦脊液中抗酸桿菌的檢出率，為臨床結(jié)腦的診斷提供直接的病原學(xué)依據(jù)。品紅為抗酸染液的重要成分之一，可以與抗酸桿菌的核酸相結(jié)合，在光鏡下呈現(xiàn)紅色外觀，另外，品紅具有自發(fā)熒光的特性，在特定波長(zhǎng)的熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)橘紅色外觀，更易于被發(fā)現(xiàn)。通過(guò)對(duì)傳統(tǒng)抗酸染色法進(jìn)行改良，尋求有助于結(jié)腦診斷的高效、簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法。 方法：對(duì)臨床上考慮結(jié)腦患者的病歷資料進(jìn)行收集，依據(jù)最新的結(jié)腦臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，根據(jù)得分情況入選確診結(jié)腦組1例，很可能結(jié)腦組15例，可能結(jié)腦組30例，不可能結(jié)腦組5例，病例組共計(jì)51例，腦脊液標(biāo)本共126份。對(duì)照組為非結(jié)腦，共36例，腦脊液標(biāo)本38份，包括腦膜癌病12例，化膿性腦膜炎5例，隱球菌性腦膜炎4例，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病4例，吉蘭巴雷綜合征5例，腦囊蟲病2例，多發(fā)性硬化2例，病毒性腦膜炎1例，布氏桿菌病1例。病例組與對(duì)照組的所有病例均留取至少一次的新鮮腦脊液標(biāo)本行改良抗酸染色，分別在光學(xué)顯微鏡及熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)抗酸桿菌的數(shù)量，記錄并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1改良抗酸染色法發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌的形態(tài)：光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果，在淡藍(lán)色背景下發(fā)現(xiàn)的抗酸桿菌為淡紅色，呈細(xì)長(zhǎng)略彎曲的桿狀，有的呈分枝狀，部分呈短桿狀，測(cè)量其長(zhǎng)度2~5μm，寬度0.3~0.5μm，多成堆出現(xiàn)，大部分為胞外菌，可見可疑胞內(nèi)菌，位于嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及淋巴細(xì)胞內(nèi)。熒光顯微鏡下觀察，抗酸桿菌在黑暗背景下為橘紅色外觀，形態(tài)及大小均與光鏡下保持一致，部分視野內(nèi)，相較于光鏡觀察更易于發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。 2病例組與對(duì)照組抗酸桿菌檢出情況：病例組51例光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有44例檢出抗酸桿菌，檢出率86.27%；對(duì)照組光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有5例檢出抗酸桿菌，5例抗酸染色陽(yáng)性者，其中3例為腦膜癌病，1例為腦囊蟲病，1例為化膿性腦膜炎，抗酸桿菌檢出率13.89%。病例組與對(duì)照組抗酸桿菌檢出率，兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（P0.001）。改良抗酸染色的敏感性為84.78%，特異性為86.11%。 3光鏡鏡檢與熒光鏡檢結(jié)果：以病例數(shù)為觀察對(duì)象，病例組光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有44例抗酸染色陽(yáng)性，抗酸桿菌檢出率為86.27%。以腦脊液份數(shù)為觀察對(duì)象，126份腦脊液標(biāo)本中，光鏡鏡檢抗酸染色陽(yáng)性85份，其中1+：50份、2+：28份、3+：7份，抗酸桿菌檢出率為67.46%，熒光鏡檢抗酸染色陽(yáng)性為90份，其中1+：49份、2+：31份、3+：10份，抗酸桿菌檢出率71.43%。兩種鏡檢方法檢出率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（P=0.359），結(jié)果具有一致性（P0.001）。 4光鏡鏡檢聯(lián)合熒光鏡檢抗酸桿菌檢出率：病例組126份腦脊液標(biāo)本，光鏡鏡檢抗酸染色陽(yáng)性85份，抗酸桿菌檢出率為67.46%，熒光鏡檢抗酸染色陽(yáng)性為90份，抗酸桿菌檢出率71.43%，光鏡聯(lián)合熒光鏡檢時(shí)，抗酸染色陽(yáng)性97份，檢出率76.98%，比單純光鏡鏡檢或熒光鏡檢的檢出率高，經(jīng)比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.001，P=0.016）。 5單次送檢病例與重復(fù)送檢病例抗酸桿菌檢出率比較：病例組51例中，單次送檢病例26例，重復(fù)送檢病例25例。光鏡鏡檢單次送檢與重復(fù)送檢組抗酸桿菌陽(yáng)性均為22例，抗酸桿菌檢出率分別為84.62%、88.00%，兩者比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（P=0.523）；熒光鏡檢單次送檢與重復(fù)送檢抗酸桿菌陽(yáng)性分別為21例、23例，抗酸桿菌檢出率分別為80.77%、92.00%，兩者比較亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（P=0.226）。 6腦脊液細(xì)胞數(shù)與抗酸染色關(guān)系：病例組腦脊液標(biāo)本按細(xì)胞計(jì)數(shù)達(dá)100與否分為兩組，細(xì)胞計(jì)數(shù)100共14份，抗酸染色陽(yáng)性8份，抗酸桿菌檢出率57.14%，細(xì)胞計(jì)數(shù)≥100共101份，抗酸染色陽(yáng)性72份，抗酸桿菌檢出率71.29%，兩組抗酸桿菌檢出率經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無(wú)意義（P=0.218）。 7腦脊液細(xì)胞學(xué)與抗酸染色關(guān)系：病例組27份標(biāo)本以嗜中性粒細(xì)胞為主，抗酸染色陽(yáng)性24份，抗酸桿菌檢出率88.89%；22份標(biāo)本呈混雜細(xì)胞學(xué)，其中抗酸染色陽(yáng)性18份，抗酸桿菌檢出率81.82%；51份標(biāo)本以淋巴細(xì)胞為主，抗酸染色陽(yáng)性29份，抗酸桿菌檢出率56.86%。腦脊液細(xì)胞學(xué)呈混雜細(xì)胞學(xué)或以嗜中性粒細(xì)胞為主者，抗酸桿菌檢出率高于以淋巴細(xì)胞為主者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.035，P=0.004）。 8病例組各組分抗酸桿菌檢出率比較：以病例數(shù)為觀察對(duì)象，確診組1例，抗酸染色陽(yáng)性；很可能組15例，抗酸染色陽(yáng)性12例；可能組30例，抗酸染色陽(yáng)性26例；不可能組5例，抗酸染色均陽(yáng)性。以腦脊液標(biāo)本數(shù)為觀察對(duì)象，確診組3份，抗酸染色陽(yáng)性2份；很可能組51份，抗酸染色陽(yáng)性36份；可能組65份，抗酸染色陽(yáng)性42份；不可能組7份，抗酸染色陽(yáng)性5份。兩種不同觀察對(duì)象下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組分抗酸桿菌檢出率均無(wú)差別（P=0.692, P=0.915）。 結(jié)論： 1無(wú)論是普通光鏡鏡檢還是熒光鏡檢，改良抗酸染色法相較于傳統(tǒng)抗酸染色可以明顯提高腦脊液標(biāo)本中抗酸桿菌的檢出率，此法敏感性84.78%，特異性86.11%，可作為臨床上可疑結(jié)腦患者篩查的檢測(cè)手段，確診仍需結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。 2改良抗酸染色光鏡鏡檢與熒光鏡檢的抗酸桿菌檢出率無(wú)明顯差別，兩種鏡檢結(jié)果一致性較好，將光鏡鏡檢與熒光鏡檢相結(jié)合，可以提高抗酸桿菌檢出率。 3針對(duì)同一患者的腦脊液標(biāo)本，單次送檢與重復(fù)送檢改良抗酸染色的抗酸桿菌檢出率沒有明顯差別。 4改良抗酸染色抗酸桿菌檢出率與腦脊液細(xì)胞數(shù)的多少?zèng)]有明顯關(guān)系，而與腦脊液細(xì)胞分類有關(guān)，呈混雜細(xì)胞學(xué)反應(yīng)或以嗜中性粒細(xì)胞為主的比以淋巴細(xì)胞為主的抗酸桿菌檢出率高。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R529.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2547230