【摘要】：出血熱(hemorrhagic fever)是危害人類健康的重要傳染病，即流行性出血熱，又稱腎綜合征出血熱，是由病毒引起以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。出血熱的病原為病毒，屬布尼亞病毒科的一個新屬，稱為漢坦病毒屬。漢坦病毒的核酸為單鏈、負(fù)性RNA型，分大(L)、中(M)、小(S)三個不同片段，分別編碼L蛋白、G1和G2蛋白、NP蛋白，其中L蛋白為多聚酶，G1、G2為包膜糖蛋白，NP為核蛋白。 眾所周知，病原體蛋白質(zhì)與宿主蛋白質(zhì)的相互作用是感染性疾病發(fā)生的基礎(chǔ)，目前國內(nèi)外已經(jīng)開展了幽門螺桿菌、皰疹病毒、瘧原蟲、鼠疫菌、病毒性肝炎、流感病毒等病原體與宿主蛋白質(zhì)的相互作用網(wǎng)絡(luò)研究，而未見出血熱病毒與宿主蛋白相互作用的報(bào)道，并且其致病機(jī)制尚不明確，因此開展出血熱病毒與宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)研究對提高出血熱的防治能力具有重要作用。 利用酵母雙雜交(Y2H)技術(shù)篩選人脾cDNA文庫中與流行性出血熱病毒AMRV H8205毒株的G2相互作用的蛋白質(zhì)。共篩選到211個獵物，符合閱讀框的177個，其回轉(zhuǎn)驗(yàn)證陽率約為85%。與Y.pestis、EBV、HCV、H5N1的篩庫數(shù)據(jù)均有不同程度的重合。 核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB(Nuclear factor-κB)是響應(yīng)環(huán)境變化的一個至關(guān)重要的轉(zhuǎn)錄因子，是機(jī)體中重要的參與免疫調(diào)節(jié)與炎癥反應(yīng)的信號通路，參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞黏附、生長、分化、凋亡等多個生物學(xué)過程。Ribosomal proteinS3(RPS3)是NF-kB的一個亞基并直接調(diào)節(jié)其特定的下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。 在G2蛋白篩庫結(jié)果中，RPS3共篩到6次，通過外源免疫共沉淀以及GST-PullDown實(shí)驗(yàn)證明G2與RPS3存在蛋白質(zhì)相互作用。GST-Pull Down實(shí)驗(yàn)確定G2與RPS3的相互作用結(jié)構(gòu)域?yàn)镽PS3(42-243aa)。報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明G2增強(qiáng)NF-κB轉(zhuǎn)錄活性，Real-time PCR結(jié)果表明G2顯著上調(diào)NF-κB通路中依賴于RPS3的下游靶基因的mRNA水平。干涉RPS3后，G2對NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響消失，對其下游靶基因的上調(diào)作用也消失。同時G2能夠增強(qiáng)RPS3與Imp-α/IKKβ的相互作用，促進(jìn)RPS3的磷酸化和入核。 綜上所述，，G2能夠通過增強(qiáng)IKKβ對RPS3的磷酸化，進(jìn)而促進(jìn)RPS3的入核來激活NF-κB信號通路，影響其下游靶基因的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示我們，RPS3在出血熱病毒G2蛋白的致病過程中發(fā)揮著重要作用，這一發(fā)現(xiàn)在分子水平上對流行性出血熱的預(yù)防和治療提供了一種新的理論依據(jù)和思路。
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2541946