【摘要】：弓形蟲病是一種由弓形蟲感染引起的重要人畜共患寄生蟲病。弓形蟲是一種細(xì)胞內(nèi)寄生性原蟲,可以感染幾乎所有的溫血?jiǎng)游锖腿祟?呈全球性分布。據(jù)估計(jì)全球約有三分之一的人感染弓形蟲,我國(guó)人體平均感染率達(dá)7.88%,動(dòng)物感染率更高。近些年來,隨著經(jīng)濟(jì)的增長(zhǎng),人們生活水平的不斷提高,飼養(yǎng)寵物已經(jīng)成為一種時(shí)尚。然而,寵物市場(chǎng)的混亂、疾病檢測(cè)技術(shù)的落后、疫苗的缺乏,使得寵物成為一種重要的疾病傳播體,同時(shí)也造成了我國(guó)居民弓形蟲感染率的上升。然而,我國(guó)人體弓形蟲病的流行病學(xué)數(shù)據(jù)相對(duì)較少。此外,人和動(dòng)物弓形蟲病目前尚未得到有效防制的主要原因是對(duì)弓形蟲病防控的基礎(chǔ)研究不足,特別是對(duì)弓形蟲與終末宿主(家貓)之間相互作用的分子機(jī)制尚不清楚。因此,有必要對(duì)我國(guó)人體弓形蟲感染的情況進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查并對(duì)弓形蟲與終末宿主貓之間的相互作用的分子機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)的研究。本研究利用ELISA檢測(cè)方法,對(duì)我國(guó)部分地區(qū)的人體弓形蟲病的感染情況進(jìn)行了血清流行病學(xué)調(diào)查,同時(shí)利用PCR-RFLP技術(shù),對(duì)我國(guó)部分弓形蟲陽(yáng)性的癌癥病人進(jìn)行了弓形蟲基因型鑒定。通過RNA-Seq高通量測(cè)序、i TRAQ定量技術(shù)、生物信息學(xué)、熒光定量PCR驗(yàn)證和質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)等不同的研究手段,對(duì)家貓感染弓形蟲后其心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腦和小腸的轉(zhuǎn)錄組及蛋白組進(jìn)行了系統(tǒng)研究,鑒定出弓形蟲感染宿主后的主要組織細(xì)胞特異表達(dá)和差異表達(dá)的基因及蛋白,并預(yù)測(cè)了其功能。結(jié)果顯示:(1)本研究中的未成年人的弓形蟲陽(yáng)性率為15.13%,飼養(yǎng)貓是危險(xiǎn)因素,而具有洗手習(xí)慣則為保護(hù)因素。(2)本研究中孕婦的弓形蟲陽(yáng)性率為15.2%,低于對(duì)照組的17.3%。住址、飼養(yǎng)貓、接觸貓狗以及接觸土壤與弓形蟲感染相關(guān),為危險(xiǎn)因素。(3)本研究中精神病患者的弓形蟲陽(yáng)性率為17.30%,顯著高于對(duì)照組的12.36%(P0.05)。精神分裂癥患者的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P=0.001)。養(yǎng)貓和食用未煮熟或者生肉與弓形蟲陽(yáng)性率顯著相關(guān),為危險(xiǎn)因素。(4)本研究中癌癥病人的弓形蟲IgG抗體陽(yáng)性率為35.56%,對(duì)照組的陽(yáng)性率為17.44%,二者差異顯著(P0.05)。其中,肺癌患者的陽(yáng)性率最高(60.94%)。通過多重分析發(fā)現(xiàn),在癌癥病人中,接觸土壤和飲食未煮熟或生肉與弓形蟲陽(yáng)性率顯著相關(guān)(P0.05)。通過對(duì)ELISA檢測(cè)陽(yáng)性的癌癥病人的病變組織進(jìn)行PCR-RFLP分型,鑒定出三個(gè)弓形蟲基因型(Toxo DB#9,Toxo DB#10和Type I variant)。(5)通過RNA-Seq高通量測(cè)序、生物信息學(xué)分析、熒光定量PCR驗(yàn)證等不同手段,對(duì)家貓感染弓形蟲后主要器官的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行系統(tǒng)的研究,鑒定出弓形蟲感染宿主后的差異表達(dá)的基因,其中腦組織3個(gè),心臟118個(gè),肝臟163個(gè),脾臟23個(gè),肺臟12個(gè),小腸106個(gè)。利用GO和KEGG富集分析,篩選出與免疫過程和信號(hào)通路相關(guān)的差異基因。(6)通過i TRAQ定量技術(shù)、生物信息學(xué)分析、質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)等不同手段,對(duì)家貓感染弓形蟲后主要器官的蛋白質(zhì)組進(jìn)行系統(tǒng)的研究,鑒定出弓形蟲感染宿主后的差異表達(dá)的蛋白,其中腦組織103個(gè),心臟401個(gè),肝臟341個(gè),脾臟107個(gè),肺臟162個(gè),小腸316個(gè)。對(duì)鑒定出來的差異表達(dá)的蛋白進(jìn)行了功能注釋和通路分析;結(jié)果顯示,差異蛋白主要與新陳代謝、細(xì)胞結(jié)構(gòu)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫反應(yīng)相關(guān)。(7)通過對(duì)轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn),在轉(zhuǎn)錄組水平和蛋白質(zhì)水平均達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的差異基因總共有29個(gè),其中,心臟4個(gè),肺臟4個(gè),肝臟16個(gè),小腸5個(gè)。本研究整體上轉(zhuǎn)錄組與蛋白質(zhì)組的關(guān)聯(lián)程度比較低。本研究成功地對(duì)我國(guó)部分地區(qū)特殊人群的弓形蟲感染情況進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,并且首次成功地鑒定了我國(guó)部分地區(qū)癌癥病人弓形蟲感染的主要基因型。利用RNA-Seq技術(shù)、i TRAQ定量技術(shù)、生物信息學(xué)、熒光定量PCR驗(yàn)證和質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)等首次研究了家貓感染弓形蟲之后主要器官的轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的變化,同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析。研究結(jié)果為我國(guó)人體弓形蟲感染情況的研究以及闡明弓形蟲入侵及感染終末宿主的致病機(jī)制提供了重要數(shù)據(jù)。
【圖文】：

文庫(kù)構(gòu)建原理

TopHat2的示意圖
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R531.8;S858.293
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本文編號(hào)：2536988