【摘要】：目的研究抑制素(PHB)對HCV復(fù)制的影響。方法全長基因組HCV RNA體外轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞系Huh7.5,構(gòu)建HCV全基因組細(xì)胞模型,分別收集24、48、72、96 h培養(yǎng)上清液檢測HCV拷貝數(shù);間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測HCV核心蛋白的表達(dá);透射電鏡觀察HCV感染細(xì)胞Huh 7.5-HCV的超微結(jié)構(gòu)改變,鑒定HCV全基因組細(xì)胞模型。采用實(shí)時定量PCR、Western Blotting方法研究PHB在Huh 7.5-HCV細(xì)胞中的表達(dá)情況。應(yīng)用RNA干擾技術(shù)檢測PHB對HCV RNA的復(fù)制情況。兩組間比較采用t檢驗(yàn)。結(jié)果鑒定結(jié)果顯示,成功構(gòu)建HCV全基因組細(xì)胞模型。HCV RNA轉(zhuǎn)染Huh7.5細(xì)胞24和48 h后,PHB mRNA表達(dá)水平分別是13.41±1.35和16.45±1.76,與對照組(1.01±0.57和1.01±0.87)相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為29.540、31.361,P值均0.01);PHB蛋白表達(dá)水平亦顯著高于對照組(P值均0.01)。PHB的RNA干擾質(zhì)粒(shRNA-PHB)轉(zhuǎn)染Huh7.5-HCV細(xì)胞24和48h后,HCV RNA的水平分別為64.32±5.49和84.45±7.06,顯著高于對照組(shRNA-control組,10.52±1.57和16.34±2.97,t值分別為29.538、25.908,P值均0.01)。結(jié)論 Huh7.5-HCV細(xì)胞中PHB表達(dá)的升高可能與HCV RNA的感染有關(guān),PHB蛋白對HCV RNA復(fù)制有一定的抑制作用。
[Abstract]:Objective To study the effect of inhibin (PHB) on the replication of HCV. Methods The whole-length genomic HCV RNA was transfected into human liver cancer cell line Huh7.5, and the whole genome cell model of HCV was constructed,24,48,72 and 96 hours of culture supernatant were collected to test the copy number of HCV. The indirect immunofluorescence assay was used to detect the expression of HCV core protein. The ultrastructure of HCV-infected cells Huh 7.5-HCV was observed by transmission electron microscope, and the whole-genome cell model of HCV was identified. The expression of PHB in Huh 7.5-HCV cells was studied by real-time quantitative PCR and Western Blotting. The replication of HCV RNA was detected by RNA interference technique. A t-test was used between the two groups. Results The results showed that the whole genome model of HCV was successfully constructed. The expression of PHB mRNA was 13.41-1.35 and 16.45-1.76, respectively, compared with the control group (1.01, 0.57 and 1.01-0.87), and the expression of PHB was significantly higher than that in the control group (P <0.01). After 24 and 48 h, the level of HCV RNA was 64.32, 5.49 and 84.45-7.06, which was significantly higher than that in control group (shRNA-control group, 10.52-1.57 and 16.34-2.97, t-value was 29.538, 25.908, P <0.01). Conclusion The increase of PHB expression in Huh7.5-HCV cells may be related to the infection of HCV RNA, and PHB protein can inhibit the replication of HCV RNA.
【作者單位】： 西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院感染科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81170393)
【分類號】：R512.63

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本文編號：2444889