【摘要】：目的 1、研究慢性HBV感染患者不同時期NK細(xì)胞功能的變化，以及與ALT水平、病毒載量的關(guān)系。 2、橫向分析慢性HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者，不同血清總膽紅素水平下NK細(xì)胞功能狀態(tài)的差異，以及與ALT水平、病毒載量的關(guān)系。 3、比較患者在治療過程中，NK細(xì)胞頻率及功能變化。 方法 1、63例慢性HBV感染者分為（1）HBV-相關(guān)的慢加急性肝衰竭患者18例，應(yīng)用核苷類似物抗病毒綜合治療，在治療過程中，87次抽取外周血，根據(jù)血清總膽紅素分為3組即Tbil≥10ULN（正常上限值）（例次=59）、5ULN＜Tbil＜10ULN（例次=17）、Tbil＜5ULN（例次=11），（2）慢性HBV感染后處于免疫活化期患者30例，未行抗病毒治療，（3）感染后處于免疫耐受期患者15例。健康對照32例，排除其他病毒及急性HBV感染，，無其他肝炎病史。取外周肝素鈉抗凝血5ml備檢。 2、時間分辨熒光免疫定量技術(shù)（TRFIA）定量檢測乙肝病毒標(biāo)志物五項指標(biāo)即乙肝表面抗原及抗體(HBsAg和HBsAb)；e抗原及e抗體(HBeAg和HBeAb)；核心抗體(HBcAb)。應(yīng)用Realtime-PCR定量檢測HBV-DNA水平。雅培全自動生化儀檢測肝功能九項指標(biāo)。 3、采用EZ-Sep人淋巴細(xì)胞分離管分離出外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）。 4、流式細(xì)胞術(shù)檢測NK細(xì)胞頻率、亞型、NK細(xì)胞表面受體（活化性受體/抑制性受體）表達(dá)水平， 5、細(xì)胞內(nèi)因子染色后檢測NK細(xì)胞分泌γ-干擾素、腫瘤壞死因子-α等細(xì)胞因子的水平。 6、細(xì)胞內(nèi)因子染色后檢測NK細(xì)胞分泌顆粒酶B、穿孔素，分析NK細(xì)胞細(xì)胞毒活性。 7、FlowjoSoftware對流式圖進(jìn)行處理，SPSS20.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，p值0.05認(rèn)為有顯著差異性。 結(jié)果 1、慢性HBV感染不同時期NK細(xì)胞頻率及功能分析（1）與健康對照組相比，慢性HBV感染不同時期PBMC中NK細(xì)胞頻率均顯著降低(P0.05)，NK細(xì)胞亞型CD56dim頻率均低于健康對照組(P0.001)，而NK細(xì)胞亞型CD56bright頻率均高于健康對照組(P0.001)。各組之間比較，慢加急性肝衰竭患者NK細(xì)胞頻率低于IA組、IT組(P0.05)。 （2）與健康對照組相比，IA組NK細(xì)胞活化性受體NKp46顯著升高(P0.05)，IT組表達(dá)NKp46、NKp30均也升高(P0.05)，而IA組抑制性受體NKG2A表達(dá)下降(P0.05)，IT組則無明顯差異；ACLF組表達(dá)活化性受體和抑制性受體水平較健康對照均無明顯差異；各組間比較也無明顯差異。 （3）與健康對照相比，慢性HBV感染患者NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ均較低(P0.001)，細(xì)胞因子TNF-α與健康對照相比無明顯差別；各組間比較IFN-γ分泌量均無明顯差異，IA、IT組分泌TNF-α水平較ACLF組高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 （4）與健康對照相比，慢性HBV感染患者NK細(xì)胞分泌顆粒酶B水平均較低，其中IA組和ACLF組與健康對照相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，穿孔素分泌水平均高于健康對照組(P0.01)。各組間相比顯示，IA組、IT組分泌顆粒酶B水平明顯高于ACLF組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，而穿孔素各組之間比較并無明顯差異。 2、HBV-相關(guān)ACLF患者Tbil不同水平下NK細(xì)胞頻率及其功能變化 （1）與健康對照相比，慢加急性肝衰竭患者NK細(xì)胞頻率及CD56dimNK細(xì)胞頻率均降低(P0.05)，而CD56brightNK細(xì)胞亞群頻率均較健康對照高(P0.05)，但不同Tbil水平之間NK細(xì)胞頻率和NK細(xì)胞亞群頻率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。 （2）與健康對照相比，ACLF患者NK細(xì)胞活化性受體NKp30表達(dá)水平升高(P0.05)，NKp46表達(dá)水平較高，但無統(tǒng)計學(xué)意義，活化性受體NKG2D和抑制性受體NKG2A與健康對照均無明顯差異。不同Tbil水平下各組間比較活化性受體與抑制性受體均無明顯差異。 （3）與健康對照相比，ACLF患者NK細(xì)胞分泌IFN-γ均顯著較低(P0.001)，TNF-α分泌量無明顯差別；不同Tbil水平比較IFN-γ、TNF-α均無明顯差別。 （4）與健康對照相比，ACLF患者NK細(xì)胞分泌顆粒酶B水平均較低(P0.01)，NK細(xì)胞分泌穿孔素水平較高(P0.05)；不同Tbil水平比較顯示第2組分泌顆粒酶B明顯高于第3組(P0.05)，而穿孔素不同Tbil水平之間無統(tǒng)計學(xué)差異。 3、慢性HBV患者NK細(xì)胞功能與ALT水平及病毒載量的相關(guān)分析 慢性HBV感染者ALT水平與NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α呈負(fù)相關(guān)，而NK細(xì)胞功能與病毒載量之間無明顯相關(guān)性。ACLF患者NK細(xì)胞頻率、分泌細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α與ALT水平均無明顯相關(guān)性；HBV相關(guān)的慢加急性肝衰竭患者NK細(xì)胞頻率與病毒載量無明顯相關(guān)性，NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α水平與病毒載量呈負(fù)相關(guān)。 4、HBV相關(guān)ACLF患者治療過程中NK細(xì)胞頻率及功能變化 在Tbil下降過程中NK細(xì)胞頻率及分泌細(xì)胞因子IFN-γ呈上升趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；分泌細(xì)胞因子TNF-α未見明顯趨勢。NK細(xì)胞細(xì)胞毒活性中分泌穿孔素呈下降趨勢，無統(tǒng)計學(xué)差異；而顆粒酶B表現(xiàn)不明顯。 結(jié)論 1、慢性HBV感染不同時期NK細(xì)胞功能活性與健康對照相比均受到不同程度抑制，而ACLF患者受到抑制程度較CHB患者高。 2、慢性HBV感染者NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α均與ALT水平呈負(fù)相關(guān)，NK細(xì)胞功能與病毒載量之間相關(guān)性不明顯。HBV相關(guān)ACLF患者NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α均與HBV-DNA水平呈負(fù)相關(guān)，與ALT水平無明顯相關(guān)性。 3、動態(tài)觀察ACLF患者，發(fā)現(xiàn)隨病情恢復(fù)NK細(xì)胞頻率及分泌因子IFN-γ有升高趨勢，而細(xì)胞毒活性呈現(xiàn)下降趨勢。 本課題的創(chuàng)新點 1、比較系統(tǒng)地研究了乙型肝炎病毒感染免疫耐受期、免疫活化期及免疫加重期NK細(xì)胞功能差異。 2、從橫向及縱向動態(tài)監(jiān)測ACLF患者治療過程中NK細(xì)胞功能的變化，以及與治療的關(guān)系。 本課題研究的意義 通過分析慢性乙型肝炎患者不同時期及動態(tài)觀察ACLF患者治療過程中NK細(xì)胞功能活性狀態(tài)，從宿主的天然免疫方面研究免疫反應(yīng)在ACLF中發(fā)揮的作用，對進(jìn)一步認(rèn)識乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2011年01期

2 李媛;王久君;高珊;劉娜;郝友華;丁紅暉;楊東亮;趙西平;;HBV感染者自然殺傷細(xì)胞活性分析[J];肝臟;2011年04期

本文編號：2383032