【摘要】：血吸蟲病(Schistosomiasis)是一種嚴(yán)重危害人類健康、影響社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的人畜共患寄生蟲病,在全球76個(gè)國(guó)家和地區(qū)廣泛流行。長(zhǎng)期以來(lái),人們一直在尋找一種能夠有效控制并消滅血吸蟲的方法,但某些地區(qū)的地理環(huán)境或經(jīng)濟(jì)條件限制了大規(guī)模滅螺工作或傳染源控制工作的開展,所以就目前而言,藥物治療血吸蟲病的仍將會(huì)是控制血吸蟲病的主要手段。目前,全球范圍內(nèi)控制血吸蟲病流行的手段是降低發(fā)病率,化學(xué)藥物吡喹酮(praziquantel,PZQ)因其出色的療效和廣泛的適應(yīng)性被WHO指定為廣譜抗血吸蟲、蠕蟲藥,使其成為抗血吸蟲病藥物的首選。但在吡喹酮長(zhǎng)期大范圍使用過(guò)程中,日本血吸蟲及曼氏血吸蟲潛在的耐藥性風(fēng)險(xiǎn)也越來(lái)越引起人們的重視。因此,作為技術(shù)儲(chǔ)備,尋找吡喹酮之后的備選抗血吸蟲病新藥已迫在眉睫。白頭翁(Pulsatilla chinensis(Bge.)Regel)為多年生草本植物,其干燥根具有清熱解毒、涼血止痢、抗腫瘤、抗炎、抗病原微生物,抗寄生蟲等作用。臨床上常用于阿米巴痢疾、細(xì)菌性痢疾和婦科炎癥等疾病的治療。白頭翁總皂苷對(duì)日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)蟲卵、毛蚴、尾蚴均有一定的殺滅作用,并且能降低日本血吸蟲糖原和蛋白質(zhì)的含量對(duì)其代謝相關(guān)酶類也有一定的抑制作用。本課題通過(guò)研究白頭翁皂苷提取物的單體Hederacolchiside A(HSA)對(duì)體內(nèi)發(fā)育不同階段日本血吸蟲和曼氏血吸蟲(S.mansoni)的作用、對(duì)日本血吸蟲成蟲表皮及新陳代謝的影響及對(duì)感染日本血吸蟲、曼氏血吸蟲小鼠免疫調(diào)節(jié)的影響,為HSA成為抗血吸蟲新藥提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)首先對(duì)感染55±5條日本血吸蟲尾蚴的ICR小鼠在其感染后的1d、7d、14d、21d、28d、35d分別給予不同藥物治療。具體如下,腹腔注射8 mg/kg HSA或6 mg/kg HSA連續(xù)5天;一次口服300 mg/kg PZQ或300 mg/kg青蒿琥酯(artesunate,ART)。于感染后7周檢測(cè)不同藥物對(duì)不同發(fā)育階段日本血吸蟲的影響。不同劑量的HSA在不同感染時(shí)期給藥對(duì)體內(nèi)日本血吸蟲均有一定的殺傷作用,在感染后1d、7d給予8 mg/kg HSA治療,日本血吸蟲減蟲率分別為97.2%及92.9%,減雌率分別為94.7%及89.5%,減卵率分別為99.3%及98.7%,效果均優(yōu)于同時(shí)期的陽(yáng)性對(duì)照PZQ及ART給藥組。其余時(shí)期HSA給藥組的藥效雖不及陽(yáng)性對(duì)照組PZQ或ART,但HSA給藥后小鼠體內(nèi)日本血吸蟲總蟲數(shù)、雌蟲數(shù)及肝臟蟲卵量比未給藥對(duì)照組顯著減少。接著對(duì)感染45±5條曼氏血吸蟲尾蚴的ICR小鼠在其感染后的1d、7d、21d、42d、49d給予不同藥物治療,具體如下,腹腔注射8 mg/kg HSA連續(xù)5天;一次口服300 mg/kg PZQ或300 mg/kg ART。于感染后8周檢測(cè)不同藥物對(duì)不同發(fā)育階段曼氏血吸蟲的影響。8 mg/kg HSA在不同感染時(shí)期給藥對(duì)體內(nèi)曼氏血吸蟲均有一定的殺傷作用,在感染后1d、7d給予8mg/kg HSA治療,曼氏血吸蟲的減蟲率分別為88.6%及80.7%,減雌率分別為92.9%及85.0%,減卵率分別為98.6%及95.3%,效果均優(yōu)于同時(shí)期的陽(yáng)性對(duì)照PZQ及ART給藥組。其余時(shí)期HSA給藥后小鼠體內(nèi)曼氏血吸蟲總蟲數(shù)、雌蟲數(shù)及肝臟蟲卵量相較于未給藥對(duì)照組顯著減少。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HSA對(duì)體內(nèi)發(fā)育不同階段的日本血吸蟲及曼氏血吸蟲均具有殺傷作用,感染后1d及7d給藥組療效優(yōu)于PZQ及ART,有望成為抗日本血吸蟲及曼氏血吸蟲的候選藥物。為了進(jìn)一步探討HSA對(duì)于血吸蟲病引起的炎癥反應(yīng)及蟲卵肉芽腫病變有無(wú)療效,我們對(duì)感染日本血吸蟲或曼氏血吸蟲后不同時(shí)期給予HSA、PZQ或ART治療,分別于7或8周檢測(cè)小鼠體重、脾重及脾重/體重、小鼠體內(nèi)的免疫球蛋白(Ig G)及細(xì)胞因子(tumor necrosis factor(TNF)-α、interleukin(IL)-4、IL-17a)的表達(dá)水平、小鼠肝臟蟲卵肉芽腫形態(tài)及大小和對(duì)小鼠肝臟早期纖維化的影響。結(jié)果顯示,在日本血吸蟲感染21d前給予不同劑量HSA治療能明顯提高小鼠的體重,顯著下調(diào)小鼠的脾重/體重,并能明顯降低TNF-α及IL-17a表達(dá)水平。日本血吸蟲感染后35d前給予低劑量HSA治療,均能明顯下調(diào)IL-4的表達(dá),并且在其感染日本血吸蟲的7d、14d、21d低劑量給藥組小鼠免疫球蛋白Ig G表達(dá)下調(diào)明顯。HSA能顯著提高曼氏血吸蟲感染49d前小鼠的體重,顯著下調(diào)小鼠的脾重/體重。曼氏血吸蟲感染21d前給予HSA治療能明顯降低IL-4的表達(dá),在感染后1d、7d、21d、42d給予HSA治療能明顯下調(diào)TNF-α的表達(dá),在感染后1d、7d、21d、49d給予HSA治療能明顯抑制IL-17a的表達(dá),但在曼氏血吸蟲感染后期的42d及49d對(duì)小鼠進(jìn)行HSA治療,才能明顯降低免疫球蛋白Ig G表達(dá)。曼氏血吸蟲感染與日本血吸蟲感染后HSA給藥組小鼠情況類似,在早期給予HSA治療對(duì)于肉芽腫的治療效果明顯,隨著兩種血吸蟲發(fā)育的進(jìn)程,給藥時(shí)間越晚小鼠肝臟病變程度越嚴(yán)重。給予不同劑量HSA治療,均能顯著的降低所有感染階段小鼠肝臟蟲卵肉芽腫的平均直徑。感染日本血吸蟲或曼氏血吸蟲7d前給予HSA治療小鼠肝臟細(xì)胞排列規(guī)則,形態(tài)正常,極少有蟲卵沉積,淋巴細(xì)胞侵潤(rùn)現(xiàn)象極不明顯,形態(tài)上與正常肝臟組織極為相似。并且在感染7d前給予HSA治療小鼠肝臟中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)、Ⅰ型膠原(collagen TypeⅠ)極少量表達(dá)。綜合上述結(jié)果我們發(fā)現(xiàn),在感染日本血吸蟲或曼氏血吸蟲早期給予HSA治療,感染7-8周后能顯著下調(diào)小鼠的免疫反應(yīng),減少肝臟肉芽腫的形成,提示了HSA有希望成為預(yù)防及輔助治療血吸蟲病藥物。最后檢測(cè)HSA對(duì)體外培養(yǎng)日本血吸蟲成蟲的作用,利用掃描電子顯微鏡進(jìn)行掃描觀察血吸蟲表皮的形態(tài)變化,并感染日本血吸蟲42d利用8 mg/kg HSA腹腔注射24h后檢測(cè)蟲體的糖原(glycogen),蛋白(protein),酸性磷酸酶(Acid phosphatase,ACP),堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)的變化,來(lái)初步探討HSA對(duì)日本血吸蟲的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)蟲體對(duì)藥物的敏感性呈濃度依賴及時(shí)間依賴性,HSA對(duì)成蟲的100%致死濃度12h為0.5μg/ml。陽(yáng)性對(duì)照PZQ組12h成蟲100%致死濃度則需要30μg/ml。HSA在相同的作用時(shí)間成蟲100%致死濃度比陽(yáng)性對(duì)照組更低。HSA孵育4h的日本血吸蟲雌、雄蟲體表海綿樣結(jié)構(gòu)排列混亂,皮層褶脊腫脹融合形成裂痕,感覺乳突上的纖毛消失,感覺乳突塌陷,部分表皮潰爛皮下組織暴露。并且在HSA對(duì)用下,日本血吸蟲體內(nèi)糖原、蛋白、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶及超氧化物歧化酶比未經(jīng)處理的對(duì)照組顯著下調(diào)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明HSA作用于日本血吸蟲可能對(duì)其新陳代謝及抗氧化能力有一定的影響,進(jìn)而通過(guò)宿主的免疫防御,最終殺滅蟲體。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R532.21

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本文編號(hào)：2366560