發(fā)布時間：2018-10-26 21:23

【摘要】：人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)是艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)的病原體,其感染導(dǎo)致機(jī)體免疫功能受損,繼而產(chǎn)生一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥。艾滋病已迅速擴(kuò)散至世界范圍，成為威脅人類健康的重大傳染病之一。目前為止尚無有效的HIV疫苗或可治愈HIV的藥物問世,這促使全球研究人員更著重于HIV感染中機(jī)體免疫系統(tǒng)保護(hù)機(jī)制的研究。近期研究發(fā)現(xiàn),在抗HIV感染中,天然免疫系統(tǒng)可能占有十分重要的地位。自然殺傷細(xì)胞(natural killer, NK)和γ T細(xì)胞作為天然免疫系統(tǒng)中重要的成員,在清除病毒感染中發(fā)揮了無可替代的作用。本研究中就這兩種細(xì)胞參與的天然免疫抗HIV方面和獲得性免疫中通過ADCC介導(dǎo)抗HIV作用分別進(jìn)行了研究。 病毒抑制實(shí)驗(yàn)(viral inhibition assay,VIA)是用于進(jìn)行細(xì)胞抗病毒能力檢測最為直接的手段。本研究建立并優(yōu)化了病毒抑制實(shí)驗(yàn)，并對NK細(xì)胞和γ T細(xì)胞抗HIV功能進(jìn)行觀察。我們采用了三種方法進(jìn)行的病毒抑制實(shí)驗(yàn)檢測，包括：流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4T細(xì)胞HIV感染百分比，，即p24胞內(nèi)染色；收集病毒上清進(jìn)行HIV-1p24蛋白ELISA檢測；收集病毒上清進(jìn)行HIV-1病毒RNA（viral RNA,vRNA）檢測。方法學(xué)比較發(fā)現(xiàn)雖然三種方法結(jié)果具有相關(guān)性，但從靈敏性和量化程度上看，p24ELISA檢測和vRNA定量檢測法優(yōu)于p24胞內(nèi)染色法。更重要的是，我們通過病毒抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NK細(xì)胞和γ T細(xì)胞均能在體外有效地抑制HIV病毒在同源CD4T細(xì)胞中的復(fù)制，且其抑制效果與效靶比有關(guān)。另外，我們還觀察到在健康人NK細(xì)胞可明顯抑制HIV復(fù)制情況下，其同源CD8T細(xì)胞卻沒有發(fā)揮顯著HIV抑制效應(yīng)。此部分研究結(jié)果直觀的展示了NK細(xì)胞和γ T細(xì)胞可通過其天然免疫特性而直接并迅速地發(fā)揮抗HIV效應(yīng)。 日益增多的研究表明了抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）對HIV/SIV感染的控制起了重要作用。雖然已有關(guān)于人體NK細(xì)胞ADCC功能與HIV疾病進(jìn)展的相關(guān)性的報(bào)道，然而關(guān)于靈長類動物模型中其自然殺傷性細(xì)胞（NK細(xì)胞）的ADCC功能卻幾乎無人進(jìn)行研究。本研究中我們證實(shí)了恒河猴NK細(xì)胞的ADCC功能在SIV/SHIV慢性感染中有明顯受損，且該受損與FcγRIIIa受體（CD16）在猴NK細(xì)胞上的表達(dá)有緊密關(guān)聯(lián)。CD32是猴體NK細(xì)胞上的另一種IgG Fc受體。CD32在感染猴體中表達(dá)上升，且CD32被阻斷后對Fc靶細(xì)胞激活的NK細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)有一定影響。Matrix metalloproteases (MMPs)是一種可改變組織或細(xì)胞表面受體的蛋白酶組。我們對MMPs進(jìn)行阻斷后，觀察到伴隨著猴NK細(xì)胞表面CD16表達(dá)的增加，感染猴體中NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC作用亦得以修復(fù)。以上發(fā)現(xiàn)促進(jìn)了關(guān)于恒河猴NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC功能的機(jī)制研究，亦使臨床前期候選疫苗在靈長類動物模型中的ADCC作用的研究更為全面，為HIV疫苗研發(fā)提供了重要的數(shù)據(jù)支持。 Vγ22T細(xì)胞（V2T細(xì)胞），作為機(jī)體免疫應(yīng)答的第一道防線中的成員，被證實(shí)在HIV感染中起了十分重要的作用。然而，幾乎沒有關(guān)于在HIV感染者體內(nèi)人體V2T細(xì)胞介導(dǎo)ADCC作用的報(bào)道。我們發(fā)現(xiàn)了與CD16-V2T細(xì)胞對磷酸類抗原激活的強(qiáng)烈應(yīng)答反應(yīng)不同，CD16+V2T細(xì)胞幾乎不參與磷酸類抗原激活免疫途徑，但V2T細(xì)胞的ADCC功能與其表面CD16的表達(dá)有密切相關(guān)性。因此，本研究中按CD16表達(dá)將V2T細(xì)胞分為兩個完全不同且功能互補(bǔ)的細(xì)胞亞群，并著重研究HIV-1感染分別對這兩個V2T細(xì)胞亞群的影響。我們觀察到HIV-1疾病進(jìn)展不僅與CD16-V2T細(xì)胞群的磷酸抗原反應(yīng)有相關(guān)性，同時與CD16+V2T細(xì)胞的ADCC功能有關(guān)。此外，CD16+和CD16-兩個功能性V2T細(xì)胞群在接受治療的HIV感染者中均得以部分恢復(fù)。值得注意的是，在HIV-1介導(dǎo)的V2T細(xì)胞數(shù)全面減少狀態(tài)下，雖然磷酸抗原刺激的CD16-V2T細(xì)胞數(shù)有明顯下降，但CD16+V2T細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC作用卻并沒有受損，且在HIV-1感染早期和慢性進(jìn)展緩慢人群中，CD16+V2T細(xì)胞在執(zhí)行ADCC功能時發(fā)生了功能趨勢的轉(zhuǎn)換，使其具殺傷功能的細(xì)胞顯著增加。此部分研究結(jié)果揭示了V2T細(xì)胞中兩個具不同激活途徑的亞群的功能特性以及HIV-1感染對這兩個亞群的不同影響,為以擴(kuò)增并激活具ADCC功能的CD16+V2T細(xì)胞作為控制HIV-1感染的靶點(diǎn)提供了有力的數(shù)據(jù)支持。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院（武漢病毒研究所）
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.91

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2296981