發(fā)布時間：2018-08-04 22:10

【摘要】：目的通過對連續(xù)動物傳代和試管培養(yǎng)的賴型鉤端螺旋體部分致病基因表達(dá)差異性的檢測,分析賴型鉤端螺旋體特異性基因表達(dá)與毒力改變之間的聯(lián)系,了解賴型鉤端螺旋體致病過程和發(fā)病機(jī)制。方法將27只豚鼠分為3組(n=9),分別經(jīng)腹部皮下接種1mL體內(nèi)培養(yǎng)鉤體(體內(nèi)培養(yǎng)組)、體外培養(yǎng)鉤體(體外培養(yǎng)組)或鉤體培養(yǎng)基(培養(yǎng)基組),接種鉤體濃度為108/mL并處于對數(shù)生長期。在接種后15d內(nèi)觀察其發(fā)病和死亡狀況,測量其體溫體質(zhì)量變化情況,并于接種后第15d將存活豚鼠處死,測量臟器系數(shù),了解經(jīng)不同環(huán)境培養(yǎng)的鉤體的毒力情況;以賴型鉤端螺旋體標(biāo)準(zhǔn)株DNA為模板,采用PCR技術(shù)擴(kuò)增出所選特定基因作為探針,使用點樣儀進(jìn)行芯片點樣。分別提取經(jīng)豚鼠體內(nèi)連續(xù)數(shù)代培養(yǎng)的鉤端螺旋體RNA與EMJH培養(yǎng)基中培養(yǎng)的鉤端螺旋體RNA,逆轉(zhuǎn)錄后分別使用Cy5和Cy3進(jìn)行熒光標(biāo)記,并與基因芯片進(jìn)行雜交。掃描后通過分析兩種熒光強度的比值,了解賴型鉤端螺旋體相關(guān)毒力基因的差異表達(dá)情況。結(jié)果接種后,體內(nèi)培養(yǎng)組豚鼠存活率為0%,體外培養(yǎng)組豚鼠存活率為88.9%,培養(yǎng)基組豚鼠全部存活;體內(nèi)培養(yǎng)組豚鼠較其余兩組豚鼠體溫升高(P0.05)、體質(zhì)量下降(P0.05);體內(nèi)培養(yǎng)組豚鼠心、肺、腎的臟器系數(shù)較體外培養(yǎng)組及培養(yǎng)基組豚鼠更大(P0.05);解剖后,體內(nèi)培養(yǎng)組豚鼠肺部出血情況較其余兩組更為嚴(yán)重;通過基因芯片,檢測到溶血素基因以及其他與鉤體生存致病能力相關(guān)的基因呈現(xiàn)出不同程度的改變,溶血素基因LA1027、LA1029、LA4004、LA3050、LA3540、LA0327、LA0378、LA1650、LA3937、O抗原連接酶基因LA2089、鞭毛動力蛋白基因LA3576、外膜蛋白基因LA0011及Loa22基因上調(diào)。結(jié)論賴型鉤體經(jīng)連續(xù)體內(nèi)培養(yǎng)后毒力增高,鉤體毒力變化與其基因表達(dá)差異存在聯(lián)系,了解這些基因的變化意義對闡明鉤體的致病機(jī)制有重要意義。
[Abstract]:Objective to analyze the relationship between specific gene expression and virulence of Leptospira leishurus by detecting the difference of partial pathogenic gene expression of Leptospira Leptospira in continuous passage and in vitro culture. To understand the pathogenesis and pathogenesis of Leptospira leiensis. Methods 27 guinea pigs were divided into 3 groups (n = 9). 1mL was subcutaneously inoculated with Leptospira in vivo (in vivo culture group), Leptospira in vitro (in vitro culture group) or Leptospira medium (medium group). The concentration of Leptospira was 108/mL and was in logarithmic growth stage. The morbidity and mortality were observed within 15 days after inoculation, and the changes of body mass were measured. The surviving guinea pigs were killed on the 15th day after inoculation, and organ coefficients were measured to understand the virulence of Leptospira in different environments. Using the standard Leptospira leptospira strain DNA as the template, the selected specific gene was amplified by PCR as a probe. Leptospira RNA was isolated from several successive generations of Leptospira leptospira cultured in guinea pigs and cultured in EMJH medium. Cy5 and Cy3 were used to label Leptospira by reverse transcription and then hybridized with gene chip. The differential expression of virulence genes related to Leptospira leisepis was studied by analyzing the ratio of two fluorescence intensities. Results after inoculation, the survival rate of guinea pigs in vivo culture group was 0 and that in vitro group was 88.9. All the guinea pigs in the culture medium group survived, the body temperature increased (P0.05) and the body mass decreased (P0.05) in the in vivo culture group compared with the other two groups. The organ coefficient of kidney was larger than that of in vitro culture group and culture medium group (P0.05); after dissection, the pulmonary hemorrhage in vivo culture group was more serious than that in the other two groups. Hemolysin gene and other genes related to leptospirosis virulence showed different degrees of change. The hemolysin gene LA1027, LA1029, LA4004, LA3050, LA3540, LA0327, LA0378, LA1650, LA3937, LA2089, flagellin gene LA3576, outer membrane protein gene LA0011 and Loa22 gene were up-regulated. Conclusion the virulence of Leptospira is increased after continuous culture in vivo. There is a relationship between the virulence of Leptospira and the difference of its gene expression. It is important to understand the significance of the changes of these genes in elucidating the pathogenic mechanism of Leptospira.
【作者單位】： 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院感染免疫研究室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.30771908)資助
【分類號】：R514.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐曉飛,林煒鐵,馮杰龍;基因芯片在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];上海生物醫(yī)學(xué)工程;2001年04期

2 陸祖宏,何農(nóng)躍,趙雨杰,孫嘯;基因芯片的研究和應(yīng)用[J];首都醫(yī)藥;2001年06期

3 李基文;21世紀(jì)基因芯片在醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的展望[J];中國公共衛(wèi)生;2002年07期

4 府偉靈,黃慶;基因芯片在臨床疾病診斷中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊;2002年01期

5 章軍建,劉煜敏;基因芯片在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;2002年01期

6 裴軍;用基因芯片尋找差異表達(dá)基因[J];上海針灸雜志;2002年01期

7 朱平;PCR基因芯片[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2002年05期

8 丁曉蓉;韓景獻(xiàn);;基因芯片與腦衰老的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊);2004年04期

9 王璐;基因芯片技術(shù)研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學(xué)動物防制;2005年01期

10 陸玉;劉天佳;楊錦波;;基因芯片的結(jié)構(gòu)與應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;2006年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 申琦;石偉民;梅楨;;基因芯片數(shù)據(jù)解析算法研究[A];第十屆全國計算(機(jī))化學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

2 周魯衛(wèi);;基因芯片研究開發(fā)的基礎(chǔ)[A];2000上海科技論壇BIO-X研討會暨中德醫(yī)學(xué)生物物理和上海流變學(xué)研討會論文集[C];2000年

3 劉麗玲;王秀榮;陳化蘭;;基因芯片的研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2003年

4 郝麟;朱平;于曉梅;張大成;歐陽建華;趙新生;;PCR基因芯片上熒光PCR反應(yīng)的研究[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

5 敖琳;高利宏;胡冉;劉晉yN;周艷虹;楊錄軍;楊夢蘇;曾志雄;方志俊;曹佳;;毒理基因芯片的研制及初步應(yīng)用[A];中國毒理學(xué)會第二屆全國中青年學(xué)者科技論壇會議論文集[C];2007年

6 尚世強;;基因芯片[A];2008年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

7 劉全海;;基因芯片和新藥研制[A];中國藥理學(xué)會第九屆制藥工業(yè)藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2000年

8 白志軍;舒文杰;謝紅衛(wèi);伯曉晨;林汝仙;王升啟;;微生物檢測基因芯片探針的遺傳優(yōu)化設(shè)計[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

9 王虹崢;英子;;基因芯片技術(shù)與中藥現(xiàn)代化[A];全面建設(shè)小康社會：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會論文集（上）[C];2003年

10 顧劍;彭少華;;臨床微生物基因芯片診斷技術(shù)[A];湖北省暨武漢市微生物學(xué)會分析微生物專業(yè)委員會第十屆第五次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 平安證券綜合研究所 馬超 高利;基因芯片：方寸之間天地寬[N];中國證券報;2000年

2 記者 季洪光;基因芯片可望大規(guī)模臨床應(yīng)用[N];科技日報;2003年

3 ;基因芯片——新世紀(jì)醫(yī)學(xué)的“寵兒”[N];市場報;2001年

4 周向東;基因芯片：神奇的醫(yī)生[N];中國醫(yī)藥報;2001年

5 匯正財經(jīng);G星湖 主升浪在即[N];證券時報;2006年

6 李躍輝;云南基因芯片診斷技術(shù)取得重大突破[N];中國知識產(chǎn)權(quán)報;2007年

7 全景;星湖科技向基因芯片公司投巨資[N];中國企業(yè)報;2000年

8 ;基因醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè) 江蘇高新技術(shù)領(lǐng)域的重中之重[N];科技日報;2000年

9 本報記者孔德芳王淑芬;站在基因芯片研究最前沿[N];科技日報;2002年

10 趙亞萍;家畜基因芯片在美問世[N];科技日報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳清華;基因芯片載體的表面化學(xué)處理及核酸固定技術(shù)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 王川;基因芯片數(shù)據(jù)管理及數(shù)據(jù)挖掘[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2004年

3 劉全俊;三類新型集成化的基因芯片及其相關(guān)儀器的研制[D];東南大學(xué);2006年

4 徐曉靜;新發(fā)腸道致病菌檢測基因芯片的研制及初步應(yīng)用[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

5 曹三杰;雞新城疫、雞傳染性支氣管炎基因芯片的構(gòu)建及其檢測技術(shù)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

6 吳飛珍;基因芯片數(shù)據(jù)的聚類功能評價算法和判別分析算法研究[D];上海大學(xué);2009年

7 呂雪松;基因芯片數(shù)據(jù)處理方法及在乳腺癌數(shù)據(jù)中的應(yīng)用[D];清華大學(xué);2006年

8 王廣云;腫瘤基因芯片表達(dá)數(shù)據(jù)分析相關(guān)問題研究[D];國防科學(xué)技術(shù)大學(xué);2009年

9 邵麗;藥物毒理基因組信息學(xué)的若干問題研究[D];浙江大學(xué);2011年

10 徐兆華;基因芯片數(shù)據(jù)統(tǒng)合分析方法的若干拓展[D];浙江大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 謝松e，

本文編號：2165325