本文選題：H3N2 + 流感病毒�。� 參考：《山東大學》2017年碩士論文

【摘要】：[背景]流行性感冒病毒共分為甲、乙、丙、丁型,其中季節(jié)性H3N2亞型流感在人群中普遍流行。HA蛋白和NA蛋白是H3N2流感病毒表面主要的兩種抗原,經(jīng)常頻繁地發(fā)生變異,對發(fā)生流感感染和造成流行具有重要意義,其中HA蛋白的遺傳變異進化發(fā)生得最頻繁。HA蛋白的抗原位點、受體結(jié)合部位及關(guān)鍵的糖基化位點如果發(fā)生氨基酸替換,病毒的致病性和感染的宿主種類就會相應(yīng)發(fā)生改變。NA蛋白又作為藥物治療的重要靶點,酶活性中心的關(guān)鍵位點發(fā)生變異會導致耐藥性。因此研究H3N2亞型流感病毒的HA基因和NA基因在流感流行中的基因進化規(guī)律和分子變異特點具有重要意義。[目的]了解2014年4月至2015年3月山東省流感病毒病原學監(jiān)測的描述性流行病學分布情況,以及在H3N2亞型流感病毒的流行過程中HA基因和NA基因的分子流行病學分布特點,為預(yù)測流感發(fā)展趨勢及預(yù)防控制流行提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。[方法]本研究首先對山東省流感監(jiān)測數(shù)據(jù)庫進行流感病毒病原學監(jiān)測情況的基本描述,然后選擇山東省疾病預(yù)防控制中心流感實驗室于2014年4月至2015年3月期間分離保存的H3N2亞型流感毒株102株,并對其進行復蘇,最后共95株H3N2亞型流感病毒毒株進行RT-PCR擴增和基因測序。利用DN AStar軟件的EditSeq模塊編輯序列及MegAlign模塊分析同源性;多序列比對采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis 5.0(MEGA 5.0)軟件的ClustalW程序;系統(tǒng)發(fā)生樹的構(gòu)建使用MEGA 5.0軟件Neighbor-Joining(NJ)法。[結(jié)果]1.山東省于2014年4月至2015年3月共收集了21276份流感樣病例鼻咽拭子標本,描述分析發(fā)現(xiàn)2014年10月至2015年3月為流感流行高峰期,感染人群主要為0～15歲人群,以5歲以下比例最高;共分離出2371株流感病毒細胞株,其中A(H3N2)流感病毒占比例最高(1665株),并且2014年11至2015年1月是H3N2亞型流感的流行高峰期。2.山東省所分離的H3N2亞型流感病毒的HA和NA基因序列的同源性分析結(jié)果分別為98.0～100%和97.7～100%。HA基因系統(tǒng)發(fā)生樹分析顯示,大多數(shù)山東省分離的H3N2流感病毒的HA基因聚集成一簇,與A/Switzerland/9715293/2013(H3N2)的親緣關(guān)系最近,與A/Texas/50/2012(H3N2)的親緣關(guān)系較遠。NA基因系統(tǒng)發(fā)生樹分析提示,大多數(shù)山東省分離的H3N2流感病毒NA基因聚集分布在一個大分支,與 A/Switzerland/9715293/2013(H3N2)的遺傳距離最短,與 A/Texas/50/2012(H3N2)的遺傳距離最長,均未發(fā)現(xiàn)明顯的地域和時間特征。3.HA蛋白共52個位點發(fā)生氨基酸替換,其中抗原決定簇(HA1蛋白)位點發(fā)生了 17個,裂解位點序列并沒有發(fā)生變異,丟失糖基化位點NES134-136和NSS156-158,同時新增糖基化位點NYT170-172。NA蛋白有51個位點發(fā)生氨基酸替換,酶活性中心位點118(D-N)、371(V-I)發(fā)生變異,催化位點156(V-I)、425(T-N)發(fā)生變異,5個抗原位點發(fā)生變異,丟失糖基化位點NWS77-79和NDS320 322,同時新增糖基化位點NIT84-86和NAS236-238。[結(jié)論]1.2014年4月至2015年3月山東省流感病毒流行的優(yōu)勢毒株是H3N2亞型流感病毒,其流行高峰時間為冬春季(2014年11月、2014年12月、2015年1月)。2.2014年4月至2015年3月山東省分離的H3N2亞型流感流行株的HA基因和NA基因的同源性較高,但與當年疫苗株的遺傳距離稍遠,與下一年的疫苗株遺傳距離較近;HA蛋白和NA蛋白均有部分抗原決定位點出現(xiàn)氨基酸替換現(xiàn)象,HA基因普遍可能發(fā)生了抗原性漂移,WHO推薦的2014～2015年疫苗株對H3N2亞型流感病毒保護效果可能較差,而2015～2016年的疫苗株可能對其具有一定保護效果。3.部分H3N2亞型分離毒株的HA基因和NA基因的糖基化位點也發(fā)生了變異,不同功能的基因片段發(fā)生糖基化位點的變異可能產(chǎn)生不同的影響。4.所有毒株的NA蛋白的酶活性中心的NA抑制劑抑制位點未發(fā)現(xiàn)變異,所以推測病毒均對奧司他韋敏感。
[Abstract]:[background] influenza viruses are divided into a, B, C, and B, among which seasonal H3N2 subtype influenza pandemic.HA and NA are the main two antigens on the surface of the H3N2 influenza virus, often frequent variation, which is of great significance for the occurrence of influenza infection and epidemic, in which the genetic variation and evolution of the HA protein are evolved. The antigen site of the most frequent.HA protein, the receptor binding site and the key glycosylation site if the amino acid substitution occurs, the virus pathogenicity and the host species of the infection will change the.NA protein as an important target for the drug treatment. It is of great significance to investigate the gene evolution and molecular variation of the H3N2 subtype influenza virus HA gene and NA gene in influenza epidemic. [Objective] to understand the descriptive epidemiological distribution of influenza virus pathogens in Shandong province from April 2014 to March 2015, and the HA gene and N in the epidemic process of H3N2 subtype influenza virus. The distribution characteristics of the molecular epidemiology of A gene provide basic theoretical basis for predicting the trend of influenza development and prevention and control. [Methods] the basic description of influenza virus pathogen monitoring in Shandong province was first described in this study, and then the Influenza Laboratory in Shandong province was selected in April 2014. During the period of March 2015, 102 strains of H3N2 subtype influenza strain were separated and recovered. In the end, 95 strains of H3N2 subtype influenza virus strains were amplified and sequenced by RT-PCR. The EditSeq module editing sequence and MegAlign module of DN AStar software were used to analyze the homology, and Molecular Evolutionary Genetics Ana was used in the multi sequence column ratio. ClustalW program of lysis 5 (MEGA 5) software; construction of phylogenetic tree using MEGA 5 software Neighbor-Joining (NJ). [results]1. Shandong province collected 21276 cases of influenza like nasopharyngeal swab specimens from April 2014 to March 2015, describing the peak of influenza epidemic from October 2014 to March 2015 and the main infection population The highest proportion of 0~15 year olds under 5 years old, 2371 strains of influenza virus cells were isolated, among which A (H3N2) influenza virus accounted for the highest proportion (1665 strains), and from 11 to January 2015 2014 was the homology analysis of HA and NA gene sequences of H3N2 subtype of H3N2 subtype virus isolated from.2. Shandong province. The analysis of 98 ~ 100% and 97.7 ~ 100%.HA gene phylogenetic tree showed that most of the HA genes isolated from the H3N2 influenza virus in Shandong province were integrated into one cluster, closest to A/Switzerland/9715293/2013 (H3N2), and the relative relationship with A/Texas/50/2012 (H3N2) was far away from the genetic tree analysis of the.NA gene system, most of the Shandong Province The isolated H3N2 influenza virus NA gene is distributed in a large branch, with the shortest genetic distance to A/Switzerland/9715293/2013 (H3N2), the longest genetic distance from A/Texas/50/2012 (H3N2), and no obvious geographical and temporal characteristics of the 52 loci of the.3.HA protein. The antigen determinant (HA1 protein) site occurs. 17, there was no variation in the sequence of lysis sites, the loss of glycosylation sites NES134-136 and NSS156-158, and the new glycosylation site NYT170-172.NA protein had 51 amino acid substitutions, the enzyme activity center site 118 (D-N), 371 (V-I) mutation, the catalytic site 156 (V-I), 425 (T-N) mutation, 5 in situ variation, The loss of glycosylation sites NWS77-79 and NDS320 322, and the addition of glycosylation sites NIT84-86 and NAS236-238.[concluded that the dominant strain of influenza virus epidemic in Shandong province from April to March 2015]1.2014 was H3N2 subtype influenza virus. Its peak time was winter and spring (November 2014, December 2014, January 2015).2.2014 April to 3 months of 2015. The HA and NA genes of H3N2 subtype influenza strains isolated from East Province have high homology, but the genetic distance from the vaccine strain is a little far away, and the genetic distance of the vaccine strain is close to the next year. The HA protein and NA protein all have amino acid replacement at some antigen determination points, and the HA gene may have the antigenicity drift, WHO recommends. The protective effect of the 2014~2015 year vaccine strain on the H3N2 subtype influenza virus may be poor, and the 2015~2016 year vaccine strain may have some protective effect on it, the HA gene and the glycosylation site of the NA gene are also mutated, and the mutation of the glycosylation site of the different functional base fragments may produce the mutation. There was no variation in the inhibitory sites of the NA inhibitors of the NA active protein of all.4. strains, so we speculated that the virus was sensitive to oseltamivir Wei Min.
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R511.7;R181.3

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本文編號：2094410