本文選題：巨片形吸蟲 + 硫氧還蛋白過氧化物酶�。� 參考：《中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志》2015年02期

【摘要】：目的免疫篩選巨片形吸蟲成蟲c DNA表達(dá)文庫,并克隆和重組表達(dá)巨片形吸蟲硫氧還蛋白過氧化物酶(TPx),初步評(píng)價(jià)其免疫診斷價(jià)值。方法用巨片形吸蟲病患者的混合血清免疫學(xué)篩選巨片形吸蟲成蟲λZAP c DNA表達(dá)文庫,取陽性噬菌體進(jìn)行克隆、測(cè)序及序列比對(duì)分析。將TPx基因全長(zhǎng)片段和N段截短片段分別克隆至原核表達(dá)質(zhì)粒p ET28a(+)中,用組氨酸標(biāo)簽親和純化柱(Ni-NTA樹脂)純化2種重組蛋白r Fg TPx和r Fg TPx_nt(N端截短型)。以間接ELISA法,檢測(cè)27例巨片形吸蟲病患者治療前后的血清,15例日本血吸蟲病和15例華支睪吸蟲病的患者血清,32位健康人血清,評(píng)價(jià)重組蛋白的免疫診斷價(jià)值。結(jié)果克隆的巨片形吸蟲TPx基因,經(jīng)原核表達(dá)、純化并復(fù)性,獲得其可溶性重組蛋白r Fg TPx和r Fg TPx_nt,相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)分別為30 000和26 000。以重組蛋白r Fg TPx_nt為檢測(cè)抗原的ELISA檢測(cè)的敏感性為66.7%(18/27),特異性為96.8%(60/62),總符合率為87.6%(78/89),與日本血吸蟲病和華支睪吸蟲病患者血清的交叉反應(yīng)率分別為0和1/15。巨片形吸蟲病患者治療前后血清的A450值分別為0.233±0.088和0.129±0.072,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.27,P0.01)。結(jié)論篩選并克隆了巨片形吸蟲TPx抗原基因,實(shí)現(xiàn)原核表達(dá),并證明該重組蛋白作為人體巨片形吸蟲病的免疫診斷抗原具有較好的診斷意義,亦有可能具有早期診斷和療效考核價(jià)值。
[Abstract]:Objective to screen the c DNA expression library of adults of paragonimiasis monocytogenes and to clone and recombine the expression of thioredoxin peroxidase (TPxX) of paragonimiasis megacephala, and to evaluate its immunological diagnostic value. Methods Immunology was used to screen 位 ZAP c DNA expression library of adult adults of paragonimiasis macrophylla. The positive phage was cloned, sequenced and sequenced. The full length and N fragment of TPX gene were cloned into prokaryotic expression plasmid pET28a (), and two recombinant proteins, rFg TPx and rFg TPxntttttttttir, were purified by affinity purification column (Ni-NTA resin) with histidine label. The sera of 27 patients with paragonimiasis japonicum and 15 patients with clonorchiasis sinensis before and after treatment were detected by indirect Elisa. The serum samples of 32 healthy people were collected from 15 patients with clonorchiasis sinensis and 15 patients with clonorchiasis sinensis. The immunological diagnostic value of recombinant protein was evaluated. Results the recombinant protein rFg TPx and rFg TPxntwere obtained by prokaryotic expression, purification and renaturation. The relative molecular weight of TPx gene was 30 000 and 26 000, respectively. The sensitivity of Elisa using recombinant protein rFg TPxNT as antigen was 66.7 / 27, the specificity was 96.860 / 62 / 62, the total coincidence rate was 87.6% / 89 / 89, and the cross reaction rates with serum of schistosomiasis japonicum and clonorchiasis sinensis were 0 and 1 / 15, respectively. The serum A450 levels were 0.233 鹵0.088 and 0.129 鹵0.072 in patients with paragonimiasis before and after treatment, respectively. The difference was statistically significant. Conclusion the TPx antigen gene was screened and cloned to realize prokaryotic expression, and the recombinant protein was proved to be a good diagnostic antigen for human paragonimiasis macrophylla. May also have the early diagnosis and the curative effect appraisal value.
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室世界衛(wèi)生組織瘧疾血吸蟲病和絲蟲病合作中心;大理州血吸蟲病防治研究所;賓川縣血吸蟲病防治站;
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)(No.2012ZX10004-220)~~
【分類號(hào)】：R532.2

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本文編號(hào)：2049651