本文選題：多色流式細(xì)胞術(shù) + T細(xì)胞亞群　； 參考：《揚(yáng)州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：結(jié)核病仍然是嚴(yán)重威脅人類健康的全球性疾病,伴隨著耐藥菌株的出現(xiàn)和快速傳播,以及卡介苗預(yù)防保護(hù)能力有限,使得結(jié)核病一直保持著較高的發(fā)病率,全球發(fā)病形勢(shì)仍然嚴(yán)峻。我國是結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一,結(jié)核病始終威脅著公眾的健康安全,加強(qiáng)對(duì)結(jié)核病全身免疫的探索,能夠深入了解結(jié)核病發(fā)生發(fā)展的免疫機(jī)制,加快推動(dòng)結(jié)核病的研究與治療手段的發(fā)展。流式細(xì)胞術(shù)具有快速、精準(zhǔn)、多細(xì)胞因子檢測(cè)等特點(diǎn),隨著流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展,系統(tǒng)研究結(jié)核病患者的免疫狀態(tài)成為了可能。本研究基于流式細(xì)胞術(shù),成功建立了一套精準(zhǔn)分析T細(xì)胞亞群的復(fù)雜多色流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)方案,并以其為基礎(chǔ)系統(tǒng)分析了結(jié)核病患者T淋巴細(xì)胞亞群的變化特征。1基于多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞亞群方法的建立根據(jù)研究要求,確定T細(xì)胞亞群染色需要的表面分子種類,經(jīng)過摸索與測(cè)試,調(diào)整熒光抗體的熒光搭配與用量,再經(jīng)不斷優(yōu)化方案,最終建立了一套染色效果好,結(jié)果穩(wěn)定的T細(xì)胞亞群表面分子染色實(shí)驗(yàn)方案,通過該方案可以清楚的區(qū)分結(jié)核病患者外周血中αβT細(xì)胞(CD3+TCRαβ+)、γδT 細(xì)胞(CD3+TCRαβ-)、CD4+T 細(xì)胞(CD3+TCRαβ+CD4+CD8-)、CD8+T 細(xì)胞(CD3+TCRαβ+CD8+CD4-)、Th 細(xì)胞(CD3+TCRαβ+CD4+CD8-CD127+CD25-/low)、Treg細(xì)胞(CD3+TCRαβ+CD4+CD8-CD127-CD25+)等多種細(xì)胞亞群,并且能區(qū)分中央記憶T細(xì)胞(CCR7+CD45RA-Tcm)和效應(yīng)記憶T細(xì)胞(CCR7-CD45RA-Tem)兩種功能亞群。2結(jié)核病患者外周血中T細(xì)胞亞群研究按照成功建立的多色流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)方案,對(duì)40例臨床確診的結(jié)核病患者與26例非感染對(duì)照樣本進(jìn)行了T細(xì)胞亞群變化的研究。結(jié)果顯示,結(jié)核病患者組與對(duì)照組相比,T細(xì)胞總數(shù)、αβT細(xì)胞、黏膜相關(guān)恒定T細(xì)胞(MAIT)、Vδ1+γδT細(xì)胞、輔助性T細(xì)胞(Th)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)等細(xì)胞群的數(shù)量無明顯差異;γδT細(xì)胞、Vδ2+γδT細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞等細(xì)胞群的數(shù)量顯著下降,而CD4+T細(xì)胞亞群數(shù)量顯著增多;中央記憶T細(xì)胞(Tcm)、效應(yīng)記憶T細(xì)胞(Tem)亞群無顯著差異。以上結(jié)果顯示,結(jié)核病患者的T細(xì)胞亞群發(fā)生了廣泛的變化,多種細(xì)胞參與了結(jié)核免疫應(yīng)答。本研究促進(jìn)了結(jié)核病全身免疫的研究,加深了對(duì)結(jié)核病免疫應(yīng)答的認(rèn)識(shí)。3結(jié)核病追蹤樣本T細(xì)胞亞群研究對(duì)結(jié)核病患者進(jìn)行6個(gè)月追蹤研究,共有12個(gè)患者完成了完整的追蹤。追蹤研究結(jié)果顯示,這些患者接受治療后健康狀況均持續(xù)得到改善,T細(xì)胞總數(shù)持續(xù)減少,但無顯著差異;γδT細(xì)胞數(shù)量0-3個(gè)月間增加,3個(gè)月后有所降低,但整體水平仍然高于初發(fā)水平;αβT細(xì)胞數(shù)量0-3個(gè)月間減少,3-6個(gè)月間小幅增多,同時(shí),其CD4+T、CD8+T細(xì)胞亞群數(shù)量變化趨勢(shì)與之相同。Treg細(xì)胞亞群數(shù)量在0-3個(gè)月間持續(xù)升高,3-6個(gè)月間略有降低。CD4+T細(xì)胞的主要功能亞群為Tcm,在治療后其百分比持續(xù)降低;CD8+T細(xì)胞的主要功能亞群為Tem,治療后其百分比持續(xù)升高。對(duì)結(jié)核病抗原特異性IFN-γ+T細(xì)胞以及IFN-γ+TNF-α+多功能T細(xì)胞亞群的研究發(fā)現(xiàn),這些特異性T細(xì)胞的數(shù)量在患者接受治療后持續(xù)減少,提示與患者的健康狀況有緊密的聯(lián)系,這將有利于加深對(duì)結(jié)核病免疫應(yīng)答變化的理解,有助于探尋新型結(jié)核病診斷指標(biāo)與愈后評(píng)價(jià)指標(biāo)。
[Abstract]:T lymphocyte subsets in peripheral blood of tuberculosis patients were studied by flow cytometry . The results showed that the number of CD4 + T cells continued to decrease from 0 to 3 months and the percentage of CD8 + T cells was decreased after 3 months .
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R52

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本文編號(hào)：2025145