本文選題：旋毛蟲(chóng) + microRNA　； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景與目的旋毛蟲(chóng)病是一種呈全球性分布的食源性人獸共患寄生蟲(chóng)病,主要因生食或半生食含有旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)囊包的豬肉及其它肉制品所致。目前,旋毛蟲(chóng)病在俄羅斯及東歐國(guó)家、墨西哥、智利、阿根廷和泰國(guó)等地仍嚴(yán)重流行。我國(guó)云南、西藏、四川、廣西、湖北、河南、山西、北京、遼寧、吉林、黑龍江等地先后爆發(fā)數(shù)百起旋毛蟲(chóng)病,估計(jì)目前全國(guó)感染人數(shù)超過(guò)2000萬(wàn)。人感染旋毛蟲(chóng)后可能出現(xiàn)的癥狀主要有惡心,嘔吐,乏力,低熱,腹痛,腹瀉或便秘等,嚴(yán)重患者可伴有持續(xù)性高熱,眼瞼和面部水腫,全身性肌痛,心肌炎,肺炎或腦炎等。microRNA(miRNA)是一類長(zhǎng)約19~24 nt的內(nèi)源性非編碼RNA,通過(guò)與靶mRNA的特異性結(jié)合,可導(dǎo)致其降解或翻譯抑制。miRNA在多種寄生蟲(chóng)不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)具有特異性,如血吸蟲(chóng)的sja-mi R-1、sja-miR-7-5p與幼蟲(chóng)性成熟有關(guān),sja-miR-36-3p與童蟲(chóng)的初期發(fā)育相關(guān);分析顯示一些miRNA還參與了與發(fā)病機(jī)理相關(guān)的信號(hào)通路,如廣州管圓線蟲(chóng)的miR-146a-5p、miR-132a-3p可能參與了廣州管圓線蟲(chóng)感染引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥的相關(guān)基因調(diào)控�，F(xiàn)今與旋毛蟲(chóng)相關(guān)的miRNA研究較少,且主要關(guān)注生理狀態(tài)下與旋毛蟲(chóng)的發(fā)育及成熟相關(guān)的miRNA,而與致病相關(guān)的關(guān)鍵miRNA尚罕見(jiàn)報(bào)道。本研究擬采用Solexa高通量測(cè)序技術(shù)篩選旋毛蟲(chóng)侵入宿主腸上皮細(xì)胞后差異表達(dá)的miRNA,并通過(guò)生物信息學(xué)分析對(duì)目標(biāo)miRNA可能作用的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)并驗(yàn)證,探討miRNA在旋毛蟲(chóng)侵入宿主腸上皮細(xì)胞過(guò)程中的作用及其分子調(diào)控機(jī)制,為旋毛蟲(chóng)病的防治與新型預(yù)防性分子靶標(biāo)的篩選提供思路。針對(duì)以上實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),本課題擬進(jìn)行如下研究:(1)從旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)和腸道感染性幼蟲(chóng)中提取RNA并進(jìn)行高通量測(cè)序,real time PCR對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。(2)選取目標(biāo)miRNA,通過(guò)RNAhybrid、TargetScan等軟件預(yù)測(cè)其可能的靶基因,并通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)驗(yàn)證目標(biāo)miRNA與其可能靶基因的作用關(guān)系,real time PCR檢測(cè)目標(biāo)miRNA與其靶基因在侵襲前后的表達(dá)情況,為揭示miRNA及其靶基因在旋毛蟲(chóng)侵入宿主腸上皮細(xì)胞中的調(diào)控作用提供依據(jù)。方法1采用人工消化法收集旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng),并用激活的肌幼蟲(chóng)與人回盲腸癌細(xì)胞HCT-8共孵育后收集旋毛蟲(chóng)腸道感染性幼蟲(chóng),提取兩組樣品的蟲(chóng)體RNA用于高通量測(cè)序,real time PCR檢測(cè)隨機(jī)選取的部分miRNA的表達(dá)情況,以驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果。2選取目標(biāo)miRNA,通過(guò)RNAhybrid、TargetScan、MiRanda、PicTar等預(yù)測(cè)其可能的靶基因,合成野生型與突變型基因片段并連接PGL3-CMV-LUC-MCS載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒,與miRNA mimics共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,檢測(cè)報(bào)告基因表達(dá)情況,從而驗(yàn)證目標(biāo)miRNA與其靶基因的作用關(guān)系。并采用real time PCR定量檢測(cè)目標(biāo)miRNA及其靶基因在侵襲前后的蟲(chóng)體中的表達(dá)水平。結(jié)果1高通量測(cè)序結(jié)果顯示,旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)侵襲宿主腸上皮細(xì)胞后,有3431個(gè)保守的miRNAs發(fā)生差異表達(dá),其中1466個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào),1965個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。此外還預(yù)測(cè)到78個(gè)新的miRNAs。從測(cè)序結(jié)果中隨機(jī)選取了18個(gè)miRNAs,采用real time PCR檢測(cè)其表達(dá)水平,結(jié)果與測(cè)序數(shù)據(jù)一致。2綜合分析其表達(dá)情況、基因序列、生物學(xué)活性預(yù)測(cè)、調(diào)控靶基因的相關(guān)功能、以及miRNA與其靶基因結(jié)合的最小自由能(MFE),本研究選定Tsp-let-7及其4個(gè)可能的靶基因(Tsp_06966,Tsp_07700,Tsp_07369,Tsp_14768),采用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)情況,結(jié)果顯示Tsp_06966,Tsp_07700是Tsp-let-7調(diào)控的潛在靶基因。另通過(guò)real time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在腸道感染性幼蟲(chóng)中Tsp-let-7表達(dá)水平明顯降低,而Tsp_06966,Tsp_07700表達(dá)升高,提示Tsp-let-7可能通過(guò)負(fù)向調(diào)控Tsp_06966,Tsp_07700的表達(dá),從而參與旋毛蟲(chóng)侵襲宿主腸上皮細(xì)胞的病理過(guò)程。結(jié)論1旋毛蟲(chóng)侵襲宿主腸上皮細(xì)胞后存在差異表達(dá)的miRNA。2 Tsp_06966和Tsp_07700是Tsp-let-7直接作用的靶基因。3 Tsp-let-7可能通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)Tsp_06966,Tsp_07700的表達(dá),參與旋毛蟲(chóng)侵襲宿主腸上皮細(xì)胞的調(diào)控。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE To study the role of miRNA in the development of intestinal epithelial cells and its molecular mechanism , and to explore the role of miRNA in the process of invasion of host intestinal epithelial cells and its molecular control mechanism . The sequencing results were verified by real time PCR . The expression of target miRNA and its target gene in intestinal epithelial cells were determined by means of real time PCR . The results showed that the expression of target miRNA and its target gene were regulated by real time PCR . Conclusion The expression of Tsp _ 06966 and Tsp _ 07700 may be mediated by Tsp _ 06966 and Tsp _ 07700 . Tsp - let - 7 may regulate the expression of Tsp _ 06966 and Tsp _ 07700 .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R532.14

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3 ;Comparasion of Inhibitory Effects on Survivin Gene Expression in Prostate Cancer by Vector-based microRNA and siRNA[A];2008年全國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要[C];2008年

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5 Yangchao Chen;;Small molecule modulators of microRNA-34a with anti-cancer activities[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2013年

6 金希;厲有名;;單純性脂變與非酒精性脂肪性肝炎間差異microRNA表達(dá)譜研究[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

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6 醫(yī)學(xué)博士 科學(xué)松鼠會(huì)成員 致樺;美麗的干擾[N];中國(guó)經(jīng)營(yíng)報(bào);2010年

7 紀(jì)光偉;2006,最出彩的是基因[N];健康報(bào);2006年

8 張?zhí)锟?基因編輯器被寄予厚望[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2014年

9 莊新茂;豬旋毛蟲(chóng)病的預(yù)防[N];中國(guó)畜牧報(bào);2005年

10 李澆紅;預(yù)防豬旋毛蟲(chóng)病[N];湖北科技報(bào);2003年

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1 崔洪亮;microRNA的腫瘤表達(dá)研究及協(xié)同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析[D];中南大學(xué);2014年

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3 李虔楨;microRNA相關(guān)基因遺傳多態(tài)性與冠心病臨床關(guān)聯(lián)及預(yù)后研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2016735