本文選題：旋毛蟲 + LAMP��； 參考：《鄭州大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：旋毛蟲病(Trichinellosis)是一種較為嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病,主要因宿主生食或半生食了含有旋毛蟲幼蟲囊包的肉類引起。該病地理分布廣泛,在過去的兩個(gè)世紀(jì)里,全球許多地區(qū)有旋毛蟲病暴發(fā)流行的報(bào)道,被稱為再度肆虐的感染性疾病。旋毛蟲是組織內(nèi)寄生線蟲,目前主要采用傳統(tǒng)病原學(xué)診斷方法,但肌肉活檢及尸體膈肌壓片鏡檢的相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)較少,對(duì)各地人群旋毛蟲病患病率的評(píng)估很困難。血清學(xué)檢查雖然可行,但有諸多不足,如價(jià)格較貴、抗體檢測(cè)存在窗口期、與其他寄生蟲病易發(fā)生交叉反應(yīng)等,往往需要做更昂貴的免疫印跡實(shí)驗(yàn)。目前核酸分子檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用日趨廣泛,隨著檢測(cè)成本的降低,檢測(cè)過程更加標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化,此類技術(shù)將越來越多地應(yīng)用于寄生蟲病的早期診斷、現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查等各個(gè)方面。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated Isothermal Amplification,簡(jiǎn)稱LAMP),是日本學(xué)者Notomi發(fā)明的一種體外核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),這種技術(shù)需要特殊設(shè)計(jì)的4~6條引物來特異性識(shí)別目標(biāo)片段,在具有鏈置換活性的DNA聚合酶作用下在很短的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增靶序列,同時(shí)產(chǎn)生副產(chǎn)物焦磷酸鎂,可通過濁度的變化來直接判斷陰陽性結(jié)果。因此具有特異、快速、高效、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。本論文將LAMP技術(shù)應(yīng)用于旋毛蟲感染小鼠不同組織樣本中旋毛蟲DNA的快速檢測(cè),研發(fā)了旋毛蟲LAMP快速檢測(cè)試劑盒,使其更適宜于現(xiàn)場(chǎng)和基層醫(yī)療單位的旋毛蟲快速檢測(cè)。以前的研究表明,PCR法檢測(cè)血液中旋毛蟲DNA具有一定的早期診斷價(jià)值。而本研究過程中通過建立高、中、低3種不同劑量旋毛蟲感染小鼠模型,收集感染早期階段的肌肉、血液、糞便樣本進(jìn)行LAMP檢測(cè),驗(yàn)證了該方法的高度敏感性和特異性,特別是對(duì)于肌肉中幼蟲密度非常低時(shí),該技術(shù)更突顯其重要的檢測(cè)和診斷價(jià)值。本論文研究證明LAMP法比PCR法更敏感、快速、簡(jiǎn)便,有望在提高人及動(dòng)物旋毛蟲病的早期診斷,旋毛蟲病的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、肉類檢疫及流行病學(xué)調(diào)查等領(lǐng)域發(fā)揮更大作用。材料和方法1旋毛蟲蟲種、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、基因組DNA的提取本實(shí)驗(yàn)所用的蟲種,旋毛蟲河南豬源株(Trichinella spiralis,T1),北方旋毛蟲(T.nativa,T2)、偽旋毛蟲(T.pseudospiralis,T4)、南方旋毛蟲(納氏旋毛蟲,T.nelsoni,T7),來自國際旋毛蟲參考中心(International Trichinella Reference Centre,ITRC)本實(shí)驗(yàn)室昆明小鼠傳代保種。其他人體寄生蠕蟲標(biāo)本,包括似蚓蛔線蟲、蟯蟲、鞭蟲、十二指腸鉤口線蟲、華支睪吸蟲、布氏姜片蟲、日本血蟲、豬帶絳蟲、牛帶絳蟲、曼氏迭宮絳蟲,均由本實(shí)驗(yàn)室保存。6w齡健康雄性昆明小鼠(SPF級(jí)),體重20g~25g,購買并飼養(yǎng)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。旋毛蟲及其他樣本基因組DNA的提取采用天根公司的血液/組織/糞便基因組DNA提取試劑盒。2 LAMP引物設(shè)計(jì)及最佳引物篩選靶基因?yàn)镹CBI Gen Bank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)上公開的旋毛蟲1.6kb重復(fù)DNA序列(Gen Bank:X06625.1),將其Blast(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov)特異性比對(duì)。選用Primer Explorer V4設(shè)計(jì)軟件(EIKEN CHEMICAL CO.,LTD,Tochigi,Japan)設(shè)計(jì)引物(http://primerexplorer.jp/e/),共設(shè)計(jì)出16套引物,以旋毛蟲的基因組DNA為模板,在相同的條件下進(jìn)行LAMP擴(kuò)增,篩選最佳引物。3 LAMP法檢測(cè)旋毛蟲特異性評(píng)價(jià)以旋毛蟲(T1)、鄉(xiāng)土旋毛蟲(T2)、偽旋毛蟲(T4)、納氏旋毛蟲(T7)基因組DNA作為陽性對(duì)照,雙蒸水為陰性對(duì)照,其他10種人體寄生蟲(似蚓蛔線蟲、鞭蟲、蟯蟲、十二指腸鉤口線蟲、布氏姜片蟲、華支睪吸蟲、日本血吸蟲、豬帶絳蟲、牛帶絳蟲、曼氏迭宮絳蟲)的基因組DNA為特異性對(duì)照進(jìn)行LAMP反應(yīng),用實(shí)時(shí)濁度儀和鈣黃綠素顏色反應(yīng)兩種方法檢測(cè)結(jié)果。4 LAMP法檢測(cè)旋毛蟲核酸濃度的敏感性及與PCR法的比較為驗(yàn)證篩選出的最佳引物的敏感性,并與PCR法的敏感性相比較,提取100條旋毛蟲肌肉幼蟲基因組DNA,經(jīng)核酸定量后以10倍梯度進(jìn)行稀釋,DNA的濃度范圍為3,620 ng/μl至3.62 fg/μl,每個(gè)LAMP反應(yīng)中加入2μl的DNA模板,LAMP法進(jìn)行敏感性評(píng)價(jià)。同時(shí)以TS2F3和TS2B3為引物,以相同濃度的旋毛蟲DNA為模板,PCR法進(jìn)行敏感性評(píng)價(jià)。5 LAMP法檢測(cè)單條旋毛蟲幼蟲的敏感性及與PCR法的比較提取10條旋毛蟲肌幼蟲基因組DNA,定容于1ml的PBS溶液中,以10倍梯度稀釋,使?jié)舛确秶喈?dāng)于每1ml PBS溶液中含10~0.00001條幼蟲DNA,每個(gè)LAMP反應(yīng)中加入2μl的DNA模板。用LAMP法和PCR法進(jìn)行敏感性評(píng)價(jià)。6旋毛蟲不同模擬樣本核酸提取方法的比較評(píng)價(jià)DNA提取試劑盒和Chelex法提取旋毛蟲肌肉、血液、糞便模擬樣本基因組DNA的效果。分別將1條旋毛蟲肌幼蟲加入50μl健康小鼠血液,200mg健康小鼠糞便,250mg健康小鼠肌肉組織,分別用天根公司的血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒和Chelex裂解液提取基因組DNA進(jìn)行LAMP檢測(cè),評(píng)價(jià)兩種方法提取的單條旋毛蟲DNA模板的擴(kuò)增效率。7評(píng)價(jià)封閉劑對(duì)LAMP反應(yīng)和鈣黃綠素顯色效果的影響檢測(cè)封閉劑是否影響LAMP反應(yīng)及鈣黃綠素的顯色效果,將熔點(diǎn)為42℃的精煉固態(tài)石蠟融化后導(dǎo)入模具,制成直徑與反應(yīng)管相同的柱狀固態(tài)石蠟塊,設(shè)計(jì)6組對(duì)照實(shí)驗(yàn)比較添加或不添加石蠟及鈣黃綠素對(duì)LAMP反應(yīng)的影響。8 LAMP試劑盒檢測(cè)小鼠肌肉中旋毛蟲DNA(1)將10條旋毛蟲肌幼蟲加入1g健康小鼠肌肉組織,充分研磨后提取基因組DNA,以10倍梯度進(jìn)行稀釋,使?jié)舛确秶喈?dāng)于每1g肌肉組織中含10~0.00001條幼蟲,每個(gè)反應(yīng)加入2μl的DNA模板,用LAMP法和PCR法評(píng)價(jià)肌肉模擬樣本的敏感性。(2)6w齡健康雄性昆明小鼠18只,隨機(jī)分成3組,每組6只,用灌胃法感染旋毛蟲。組Ⅰ:陰性對(duì)照組;組Ⅱ:每只小鼠感染10條肌幼蟲;組Ⅲ:每只小鼠感染50條肌幼蟲;LAMP法檢測(cè)感染后第20d的小鼠肌肉樣本。9 LAMP試劑盒檢測(cè)小鼠血液中旋毛蟲DNA6w齡健康雄性昆明小鼠15只,隨機(jī)分成3組,每組5只,用灌胃法感染旋毛蟲。每組小鼠分別感染10條、100條、300條肌肉幼蟲,建立低、中、高度感染小鼠動(dòng)物模型。感染后第1d~20d每天采集每只小鼠尾靜脈血50μl,每天5個(gè)血液樣本,共300個(gè)樣本提取基因組DNA進(jìn)行LAMP檢測(cè)。10 LAMP試劑盒檢測(cè)小鼠糞便中旋毛蟲DNA6w齡健康雄性昆明小鼠15只,隨機(jī)分成3組,每組5只,用灌胃法感染旋毛蟲。每組小鼠分別感染10條、100條、300條肌幼蟲,感染后第1d~20d每組小鼠每天采集糞便樣本,分成4份樣本,共240個(gè)樣本提取基因組DNA進(jìn)行LAMP檢測(cè)。11統(tǒng)計(jì)分析使用軟件SPSS 17.0對(duì)血液、糞便樣本的LAMP檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析,檢驗(yàn)水平為α=0.05。結(jié)果1最佳引物篩選通過對(duì)靶序列Blast比對(duì),旋毛蟲1.6kb DNA重復(fù)序列具有很好的特異性,根據(jù)該序列共設(shè)計(jì)了16套引物,在相同的條件下進(jìn)行LAMP擴(kuò)增,15套可以擴(kuò)增出靶基因,尤其添加了環(huán)引物后擴(kuò)增效率提高了1/3,其中TS2套引物最先發(fā)生LAMP反應(yīng),且擴(kuò)增效率最高,作為最佳引物進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。2特異性實(shí)驗(yàn)只有陽性對(duì)照組旋毛蟲(T1)、鄉(xiāng)土旋毛蟲(T2)、偽旋毛蟲(T4)、納氏旋毛蟲(T7)的基因組DNA作為模板時(shí)發(fā)生LAMP擴(kuò)增,而陰性對(duì)照組其他10余種人體寄生蠕蟲的基因組DNA和水作為模板時(shí)均沒有發(fā)生擴(kuò)增。實(shí)時(shí)濁度儀和鈣黃綠素顏色反應(yīng)兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致,實(shí)驗(yàn)說明TS2套引物具有很好的屬特異性。3 LAMP法檢測(cè)旋毛蟲核酸濃度的敏感性及與PCR法的比較LAMP法可檢測(cè)到DNA的最低濃度為362 fg/μl,以TS2F3和TS2B3為引物,PCR反應(yīng)產(chǎn)物是225bp大小的擴(kuò)增條帶,經(jīng)測(cè)序?yàn)槟康钠�。PCR法檢測(cè)到的最低濃度為3.62 pg/μl,因此LAMP法比PCR法的敏感性高出10倍以上。4 LAMP法檢測(cè)單條旋毛蟲的敏感性及與PCR法的比較LAMP法檢測(cè)單條旋毛蟲肌幼蟲的靈敏性為0.001條/ml,PCR法的靈敏性為0.01條/ml,驗(yàn)證了LAMP法比PCR法敏感性高出10倍以上結(jié)論。5旋毛蟲樣本不同核酸提取方法的比較用天根公司的血液/組織/糞便基因組DNA提取試劑盒和Chelex裂解液提取含1條幼蟲的血液、糞便、肌肉模擬樣本DNA,經(jīng)LAMP檢測(cè)均為陽性,兩種方法提取的DNA模板的擴(kuò)增效率差異不顯著。6評(píng)價(jià)封閉劑的影響加封閉劑組與不加封閉劑組的LAMP檢出時(shí)間不變,顯示封閉劑不抑制LAMP擴(kuò)增效率;加鈣黃綠素組的封閉劑對(duì)LAMP檢出時(shí)間不變,顯示封閉劑不抑制添加了鈣黃綠素的LAMP擴(kuò)增效率。7 LAMP試劑盒檢測(cè)小鼠肌肉中旋毛蟲DNA(1)LAMP法檢測(cè)每克肌肉組織含10條幼蟲的DNA,最低可檢測(cè)到0.01條/g,PCR法為0.1條/g,可見LAMP法比PCR法的敏感性高出10倍以上。(2)分別感染10條、50條肌幼蟲組第20d的小鼠肌肉樣本,2組LAMP檢測(cè)均為陽性結(jié)果,檢出率為100%(6/6),未感染組小鼠肌肉樣本均為陰性結(jié)果。8 LAMP試劑盒檢測(cè)小鼠血液中旋毛蟲DNA(1)為LAMP檢測(cè)小鼠輕度感染(10條幼蟲)組1d~20dpi的血液樣本,每天5份樣本,共100份樣本,最早于第9dpi的樣本中檢測(cè)到旋毛蟲特異DNA,第9d、10d、13d、18d~20dpi每天的陽性率為20%(1/5);第15d、17dpi每天的陽性率為40%(2/5)。(2)LAMP檢測(cè)小鼠中度感染(100條幼蟲)組1d~20dpi的血液樣本,每天5份樣本,共100份樣本,最早于第1dpi的樣本中檢測(cè)到旋毛蟲特異DNA,第1d、3d、11d、12d、15dpi每天的陽性率為20%(1/5);第7d、8d、10d、17d、19d、20dpi每天的陽性率為40%(2/5)。(3)LAMP檢測(cè)小鼠重度感染(300條幼蟲)組1d~20dpi的血液樣本,每天5份樣本,共100份樣本,最早于第3dpi的樣本中檢測(cè)到旋毛蟲特異DNA,第4d、5d、9d、13d、14d、16d、20dpi每天的陽性率為20%(1/5),第3dpi的陽性率為40%(2/5),第8d、10d、11d、19dpi的陽性率為60%(3/5),第15dpi的陽性率為80%(4/5)。(4)3組不同感染度小鼠LAMP陽性率間的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=4.899,P=0.086),LAMP檢測(cè)血液樣本的陽性率與感染程度沒有相關(guān)性。輕度感染小鼠不同天數(shù)間的LAMP檢測(cè)陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=20.000,P=0.395);中度感染小鼠不同天數(shù)間的LAMP陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=23.459,P=0.218);高度感染小鼠不同天數(shù)間的LAMP陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=31.393,P=0.037)。當(dāng)輕度感染時(shí)LAMP檢測(cè)陽性率與檢測(cè)時(shí)間沒有相關(guān)性,當(dāng)重度感染時(shí)LAMP檢測(cè)陽性率與檢測(cè)時(shí)間有一定的相關(guān)性,第8d~15dpi檢出率較高。9 LAMP試劑盒檢測(cè)小鼠糞便中旋毛蟲DNA(1)LAMP檢測(cè)小鼠輕度感染組(10條幼蟲)第1d~20dpi的糞便樣本,每天4個(gè)樣本,共80份樣本,最早于第6dpi的樣本中檢測(cè)到旋毛蟲特異DNA,分別在第6~11d、13~19dpi的糞便樣本中檢測(cè)出陽性樣本;其中第6~10d、13~15d、17dpi每天的陽性率為25%(1/4),第11d、18d、19dpi每天的陽性率為50%(2/4)。(2)LAMP檢測(cè)小鼠中度感染(100條幼蟲)組1d~20dpi的糞便樣本,每天4個(gè)樣本,共80個(gè)樣本,最早于第2dpi的樣本中檢測(cè)到旋毛蟲特異DNA,分別在第2、4、5、7d、9~20dpi的糞便樣本中檢測(cè)出陽性樣本;其中第2d、4d、9d、11d、19d、20dpi每天的陽性率為25%(1/4),第10d、14d、18dpi每天的陽性率為50%(2/4),第5d、7d、12d、13d、15~17dpi每天的陽性率為75%(3/4)。(3)LAMP檢測(cè)小鼠重度感染(300條幼蟲)組1d~20dpi的糞便樣本,每天4個(gè)樣本,共80個(gè)樣本,最早于第2dpi的樣本中檢測(cè)到旋毛蟲特異DNA,分別在第2~20dpi的糞便樣本中檢測(cè)出陽性樣本;其中第2d、3d、6d、9d、18dpi每天的陽性率為25%(1/4),第5d、14d、19dpi每天的陽性率為50%(2/4),第4d、7d、8d、10d、13d、15d、16d、20dpi每天的陽性率為75%(3/4),第11d、12d、17dpi每天的陽性率為100%(4/4)。(4)3組小鼠LAMP陽性率間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=14.823,P=0.001),陽性率與感染劑量有相關(guān)性(rs=0.500,P0.001),陽性率隨感染劑量的增加而升高(F=20.492,P0.001)。輕度感染組不同天數(shù)間的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=15.761,P=0.673);中度感染組不同天數(shù)間的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=27.389,P=0.096);重度感染組不同天數(shù)間的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(c(17)=27.389,P=0.096)�？梢钥闯鯨AMP檢測(cè)糞便樣本的陽性率與感染后檢測(cè)時(shí)間沒有相關(guān)性。結(jié)論1.本論文發(fā)明的旋毛蟲LAMP快速檢測(cè)試劑盒,可在60min內(nèi)完成反應(yīng)。具有良好的敏感性和特異性。有望應(yīng)用于旋毛蟲病的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、肉類檢疫及流行病學(xué)調(diào)查等領(lǐng)域。2.應(yīng)用該試劑盒,對(duì)不同劑量旋毛蟲感染小鼠早期階段的肌肉、血液、糞便樣本進(jìn)行檢測(cè),可以在低劑量感染小鼠的早期各種來源的樣本中檢測(cè)到旋毛蟲DNA,具有較高的檢出率。3.LAMP試劑盒檢測(cè)旋毛蟲小鼠血液樣本的陽性率與感染程度沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。當(dāng)輕度感染時(shí)陽性率與檢測(cè)時(shí)間沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)性,當(dāng)重度感染時(shí)陽性率與檢測(cè)時(shí)間有相關(guān)性,第8d~15dpi檢出率較高。4.LAMP試劑盒檢測(cè)旋毛蟲小鼠糞便樣本的陽性率與感染程度有相關(guān)性,陽性率隨感染劑量的增加而升高,與感染后檢測(cè)時(shí)間沒有發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R532.14;R440

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3 閆潔;英兩無罪公民起訴要求銷毀DNA記錄[N];新華每日電訊;2008年

4 何德功;日本制成診斷魚病的“DNA書”[N];農(nóng)民日?qǐng)?bào);2004年

5 本報(bào)記者 張巍巍;DNA樣本也能作假[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

6 周斌偉　鄒巍;蘇州警方應(yīng)用DNA技術(shù)一年偵破案件1887起[N];人民公安報(bào);2011年

7 本報(bào)記者 楊天笑;揭秘“神探”DNA[N];蘇州日?qǐng)?bào);2011年

8 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室教授 李福洋;破除法老DNA的咒語[N];東方早報(bào);2011年

9 常麗君;DNA電路可檢測(cè)導(dǎo)致疾病的基因損傷[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

10 常麗君;效率和質(zhì)量：“DNA制造業(yè)”兩大障礙被攻克[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 唐陽;基于質(zhì)譜技術(shù)的基因組DNA甲基化及其氧化衍生物分析[D];武漢大學(xué);2014年

2 池晴佳;DNA動(dòng)力學(xué)與彈性性質(zhì)研究[D];重慶大學(xué);2015年

3 胡璐璐;哺乳動(dòng)物DNA去甲基化過程關(guān)鍵酶TET2的三維結(jié)構(gòu)與P暬蒲芯縖D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 馬寅洲;基于滾環(huán)擴(kuò)增的DNA自組裝技術(shù)的研究[D];南京大學(xué);2014年

5 黃學(xué)鋒;精子DNA碎片的臨床意義：臨床和實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 隋江東;APE1促進(jìn)DNA-PKcs介導(dǎo)hnRNPA1磷酸化及其在有絲分裂期端粒保護(hù)中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 劉松柏;結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1在DNA復(fù)制及細(xì)胞周期過程中的功能性研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 王璐;哺乳動(dòng)物中親本DNA甲基化的重編程與繼承[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

9 齊文靖;染色質(zhì)改構(gòu)蛋白BRG1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2015年

10 龍湍;水稻T-DNA插入突變?nèi)后w側(cè)翼序列的分離分析和OsaTRZ2的克隆與功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董洪奎;面向可視化納米操作的DNA運(yùn)動(dòng)學(xué)建模及誤差實(shí)時(shí)校正方法[D];沈陽理工大學(xué);2014年

2 聞金燕;水溶性羧基和吡啶基咔咯大環(huán)與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

3 江懌雨;水溶性羧酸卟啉及其配合物與DNA和人血清蛋白的相互作用[D];華南理工大學(xué);2015年

4 高志森;比較外周游離循環(huán)腫瘤DNA與癌胚抗原監(jiān)測(cè)非小細(xì)胞肺癌根治術(shù)前后腫瘤負(fù)荷變化的初步研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 丁浩;血漿循環(huán)DNA完整性及多基因甲基化對(duì)肺癌診斷價(jià)值的研究[D];河北大學(xué);2015年

6 王鵬;基于碳點(diǎn)@氧化石墨烯復(fù)合材料DNA生物傳感器的構(gòu)建及用于PML/RARα基因檢測(cè)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李海青;轉(zhuǎn)堿篷和鹽角草總DNA的耐鹽紫花苜蓿的選育[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

8 李婷婷;小鼠DNA模式識(shí)別重要受體的分子結(jié)構(gòu)特征及其功能研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 劉瑞斯;抗癌藥物奧沙利鉑與DNA相互作用的原子力顯微鏡觀察研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

10 熊忠;芳香二肽與一價(jià)金屬離子間相互作用及DNA切割活性的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1951064