本文選題：折疊引物 + 多重PCR�。� 參考：《中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志》2015年03期

【摘要】：目的建立一種可同時檢測4種瘧原蟲單一及混合感染的單管單輪多重PCR技術(shù)。方法在快速巢式PCR的基礎(chǔ)上,設(shè)計折疊引物,優(yōu)化PCR反應(yīng)試劑的主要組分濃度及各條引物的退火溫度,建立折疊引物多重PCR法(FP-PCR)。利用優(yōu)化后的FP-PCR法,對間日瘧原蟲(Plasmodium vivax)、惡性瘧原蟲(P.falciparum)、卵形瘧原蟲(P.ovale,包括wallikeri亞種)和三日瘧原蟲(P.malariae)的單一及混合瘧原蟲DNA模板進行檢測,分析該方法的敏感性和特異性。結(jié)果在7次重復(fù)實驗中,4種瘧原蟲單一感染檢出的最低濃度均接近1個/μl血。此外,在檢測2~4種原蟲以高、低密度相差100倍的模擬混合感染的濾紙血樣中,FP-PCR法正確檢出每個組合的所有蟲種的成功率為68%(57/84)。在10份健康人濾紙血樣中,FP-PCR法除產(chǎn)生少量二聚體外無任何擴增條帶。結(jié)論 FP-PCR法僅需單管單輪擴增即可同時檢測4種人瘧原蟲單一或混合感染,為瘧疾的監(jiān)測和篩查提供了簡便、可靠的診斷方法。
[Abstract]:Objective to establish a single tube multiplex PCR technique for simultaneous detection of single and mixed infection of four Plasmodium species. Methods on the basis of fast nested PCR, the folding primers were designed, the main component concentration of PCR reaction reagent and annealing temperature of each primer were optimized, and the multiplex PCR method of folding primers was established. The single and mixed DNA templates of Plasmodium vivaxum, P. falciparumum, P.ovaleincluding wallikeri subspecies of Plasmodium vivaxi, P. falciparum, P.ovale and P. malariae were detected by optimized FP-PCR method. The sensitivity and specificity of the method were analyzed. Results in the 7 repeated experiments, the lowest concentration detected by single infection of four Plasmodium species was close to 1 / 渭 l blood. In addition, FP-PCR was used to detect four protozoa species with a high and low density difference of 100 times to simulate the mixed infection in filter paper blood samples. The success rate of detecting all species of each combination by FP-PCR was 68 / 57 / 84. There were no amplified bands except a small amount of dimer produced by FP-PCR in 10 healthy human filter paper blood samples. Conclusion the method of FP-PCR can be used to detect the single or mixed infection of four Plasmodium falciparum at the same time, which provides a simple and reliable diagnostic method for malaria surveillance and screening.
【作者單位】： 貴州省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：貴州省衛(wèi)生計生委科學(xué)技術(shù)基金(No.gzwjkj2014-1-001)~~
【分類號】：R531.3;R440

【參考文獻】

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本文編號：1936430