本文選題：中國漢族人群 + CHC　； 參考：《華中科技大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：目的 1、通過觀察中國漢族人群中CHC患者和健康人之間KIR基因、HLA-C基因的頻率變化,深入探討中國漢族人群中KIR基因、HLA-C基因與CHC病程的相關(guān)性; 2、通過觀察中國漢族人群中CHC患者經(jīng)規(guī)范化治療后不同反應(yīng)者的KIR基因HLA-C基因的頻率變化,尋找對CHC治療反應(yīng)有影響力的基因； 3、經(jīng)薈萃分析(Meta-analysis)對pubmed上多個CHC治療效果研究資料進(jìn)行分析和概括,并結(jié)合本次研究結(jié)果對KIR2DL2對CHC治療反應(yīng)的影響； 4、通過調(diào)節(jié)KIR2DL2基因的表達(dá),觀察其對NK細(xì)胞功能影響的特點(diǎn),分析KIR2DL2影響CHC治療反應(yīng)的可能機(jī)制,為CHC治療以及預(yù)后判斷提供可能途徑和新的治療靶點(diǎn)。 方法 1.入選中國漢族人群中CHC病例通過生化指標(biāo)檢測ALT, ELISA檢測HCV抗體,Realtime-PCR定量檢測HCV RNA。ELISA檢測排除入選病例HAV、HBV、HDV、 HEV、HIV、病毒感染。 2.通過飽和鹽析的方法從研究對象的抗凝血中提取DNA,采用序列特異性引物擴(kuò)增技術(shù)(PCR—Sequence Specific Primer, PCR-SSP)對樣本進(jìn)行KIR和HLA-C分型,讀取結(jié)果后計(jì)算基因頻率,并統(tǒng)計(jì)分析比較中國漢族人群CHC患者和健康對照者之間的差異。 3.中國漢族人群中CHC患者接受規(guī)范化治療,即聚乙二醇干擾素-α(1.5微克/公斤體重/周)和利巴韋林(0.9g/天)。所有患者進(jìn)行至少6個月治療后按照與以前報(bào)道的病毒學(xué)標(biāo)準(zhǔn)分為兩個治療結(jié)果：持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(sustained virological responders,SVR)和無應(yīng)答(nonresponders, NR),提取研究對象DNA,采用PCR-SSP對樣本進(jìn)行KIR和HLA-C分型,統(tǒng)計(jì)分析比較SVR和NR之間的差異。 4.引入配對分析方法,將KIR2DL1與HLA-C2、KIR2DL2與HLA-C1配對,統(tǒng)計(jì)配對頻率,比較中國漢族人群CHC患者和健康對照者之間、SVR和NR之間的差異。 5.在pubmed數(shù)據(jù)庫(1995.11-2013.4)中,以‘'KIR2DL2"和“HCV”為關(guān)鍵詞搜索文獻(xiàn),并按照需要英文書寫、與國際標(biāo)準(zhǔn)相同的CHC診斷標(biāo)準(zhǔn)和治療方法及結(jié)果判斷、PCR-SSP檢測KIR基因并含有KIR2DL2頻率數(shù)據(jù),患者除HCV感染外無其他疾病等篩選條件,選出合適的文獻(xiàn)用于Meta分析,確定文獻(xiàn)異質(zhì)性、發(fā)表偏倚,選擇固定效應(yīng)模型計(jì)算總體風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)。 6.使用經(jīng)5-Aza-dc處理后的NK92細(xì)胞,該細(xì)胞表面可高表達(dá)KIR2DL2分子,觀察不同抗體濃度抗體封閉KIR2DL2受體后,NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷活性。 7. SPSS17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 1.基因分型結(jié)果表明：KIR2DL2、KIR2DS3計(jì)算的OR值均大于1,提示在CHC患者中這兩種基因的頻率高于健康對照組,這可能是CHC發(fā)生的危險(xiǎn)因素；同時,HLA-Cw*06, HLA-Cw*15, KIR2DS4計(jì)算的OR值小于1,提示在CHC患者中這些基因的頻率低于健康對照組,這些基因的存在可能可以抑制CHC的發(fā)生。 2.在SVR與NR患者的分型結(jié)果中,我們可以看到KIR2DL2和HLA-Cw*03計(jì)算的OR值仍然大于1,提示在治療效果較差的CHC患者(NR)中KIR2DL2基因的頻率高于SVR組,攜帶有該基因的CHC患者的治療反應(yīng)要弱。 3. KIR/HLA-C配對分析顯示,KIR2DL2+HLA-C group1配對OR值大于1,同時該組合在NR患者中的頻率要高于SVR,提示在CHC中這種組合的存在可能有利于CHC的發(fā)生以及不利于CHC的治療；KIR2DL1+HLA-C group2配對OR值小于1,提示這種組合的存在可能對抑制CHC的發(fā)生有一定作用。 4. Meta分析結(jié)果同樣提示KIR2DL2對CHC治療的負(fù)面影響。 5.經(jīng)5-Aza-dc處理后的NK92細(xì)胞,該細(xì)胞表面可高表達(dá)KIR2DL2分子,在使用抗體濃度20μg/ml封閉KIR2DL2受體后,NK細(xì)胞對K562細(xì)胞的殺傷活性明顯增強(qiáng)。 結(jié)論 1.KIR2DL2可以抑制NK細(xì)胞活性； 2. KIR2DL2和它的受體HLA-C groupl可能有利于中國漢族人群中CHC的發(fā)生以及對PeglFN-a與利巴韋林聯(lián)合治療的反應(yīng)不佳； 3. KIR2DS3在中國漢族人群CHC患者中的頻率高于健康對照組,這可能是中國漢族人群中CHC發(fā)生的危險(xiǎn)因素； 4. HLA-Cw*06, HLA-Cw*15, KIR2DS4CHC患者中的頻率低于健康對照組,這些基因的存在可能可以抑制CHC的發(fā)生。 本研究的創(chuàng)新點(diǎn) 1.目前,在高加索人群中有關(guān)于KIR與CHC相關(guān)性的報(bào)道,但在中國漢族人群中未見相關(guān)報(bào)道,本研究主要通過PCR-SSP檢測中國漢族人群CHC患者中KIR頻率與疾病以及治療的相關(guān)性。 2.通過研究結(jié)果及Meta分析,首次提出在中國漢族人群中KIR2DL2為CHC發(fā)生以及治療的負(fù)面因子。 本研究的意義 1.通過研究,發(fā)現(xiàn)在中國漢族人群中KIR2DL2的存在具有較強(qiáng)的NK細(xì)胞抑制能力,使得KIR2DL2的存在可能不利于HCV的清除,導(dǎo)致HCV感染規(guī)范化治療效果差,進(jìn)而有利于HCV持續(xù)性感染發(fā)生。 2. K1R2DL2可成為一種HCV治療效果預(yù)判指標(biāo),也是中國漢族人群中CHC發(fā)生流行病學(xué)危險(xiǎn)因素,在后期研究中,KIR2DL2可成為免疫治療CHC的重要靶點(diǎn)。
[Abstract]:objective
1, by observing the frequency changes of the KIR gene and HLA-C gene between CHC patients and healthy people in Chinese Han population, the correlation between the KIR gene, HLA-C gene and the course of CHC in the Chinese Han population was investigated.
2, by observing the changes in the frequency of the KIR gene HLA-C gene of the CHC patients in the Chinese Han population after the standardized treatment of the KIR gene, the genes that have influence on the response to the treatment of CHC were found.
3, Meta-analysis was used to analyze and summarize the results of multiple CHC therapy on PubMed, and the effect of this study on the response of KIR2DL2 to CHC treatment.
4, through the regulation of the expression of KIR2DL2 gene, the characteristics of its effect on the function of NK cells were observed, and the possible mechanisms of the effect of KIR2DL2 on the response of CHC therapy were analyzed. The possible pathways and new therapeutic targets for the treatment of CHC and the prognosis of the treatment were provided.
Method
In 1. Chinese Han population, CHC cases were detected by biochemical indexes, ALT, ELISA and HCV were detected by ELISA. HCV RNA.ELISA detection was used to detect HAV, HBV, HDV, HEV, HIV, and virus infection by Realtime-PCR quantitative detection of HCV RNA.ELISA.
2. DNA was extracted from the anticoagulant of the subjects by the method of saturated salting out, and the sequence specific primer amplification (PCR Sequence Specific Primer, PCR-SSP) was used for the KIR and HLA-C typing of the samples. After reading the results, the gene frequency was calculated, and the differences between the Chinese Han population CHC patients and the healthy controls were compared and analyzed.
In 3. Chinese Han population, CHC patients received standardized treatment, namely peginterferon - alpha (1.5 microgram / kilogram weight / week) and Leigh Bhave Lin (0.9g/ days). All patients were divided into two treatments according to the previously reported virology criteria after at least 6 months of treatment: sustained virological responders, SVR And nonresponders (NR), DNA was extracted. PCR-SSP was used to classify KIR and HLA-C samples, and the differences between SVR and NR were analyzed statistically.
4. paired analysis was introduced to match the KIR2DL1 with HLA-C2, KIR2DL2 and HLA-C1, to compare the paired frequencies, and to compare the differences between the CHC patients and the healthy controls in the Han population of the Chinese Han population, and between the SVR and the NR.
5. in the PubMed database (1995.11-2013.4), "'KIR2DL2" and "HCV" for the search of the literature, and in English written in need, the same as the international standard CHC diagnostic criteria and treatment methods and results, PCR-SSP detection of the KIR gene and the KIR2DL2 frequency data, patients with the exception of HCV infection without other diseases and other screening conditions, selected. Appropriate literature is used for Meta analysis, identifying literature heterogeneity, publishing bias, and choosing fixed effect models to calculate the overall risk coefficient.
6. the NK92 cells treated by 5-Aza-dc were used to express the KIR2DL2 molecules on the surface of the cells, and the killing activity of NK cells to K562 cells was observed after the antibody concentration of the antibody was closed to the KIR2DL2 receptor.
7. SPSS17.0 statistical analysis of the data.
Result
The results of 1. genotyping showed that the OR values calculated by KIR2DL2 and KIR2DS3 were all greater than 1, suggesting that the frequency of these two genes in CHC patients was higher than that in the healthy control group. This may be a risk factor for the occurrence of CHC; at the same time, the OR values of HLA-Cw*06, HLA-Cw*15 and KIR2DS4 were less than 1, suggesting that the frequencies of these genes in CHC patients were lower than those in the healthy control group. The presence of these genes may inhibit the occurrence of CHC.
2. in the typing results of patients with SVR and NR, we can see that the OR value calculated by KIR2DL2 and HLA-Cw*03 is still greater than 1, suggesting that the frequency of KIR2DL2 gene in CHC patients with poor therapeutic effect (NR) is higher than that of the SVR group, and the therapeutic response of the CHC patients with this gene is weak.
3. KIR/HLA-C pairing analysis showed that the KIR2DL2+HLA-C group1 paired OR value was greater than 1, and the frequency of this combination in NR patients was higher than SVR, suggesting that the presence of this combination in CHC may be beneficial to the occurrence of CHC and not to the treatment of CHC; KIR2DL1+HLA-C group2 pairing OR value is less than 1, suggesting that the presence of this combination may inhibit the existence of this combination. There is a certain effect on the occurrence of it.
4. the results of Meta analysis also indicated the negative effects of KIR2DL2 on CHC treatment.
5. NK92 cells treated by 5-Aza-dc could express the KIR2DL2 molecules on the surface of the cells. After using the antibody concentration 20 g/ml to seal the KIR2DL2 receptor, the cytotoxicity of NK cells to K562 cells was significantly enhanced.
conclusion
1.KIR2DL2 can inhibit the activity of NK cells.
2. KIR2DL2 and its receptor HLA-C Groupl may be beneficial to the occurrence of CHC in Chinese Han population and the poor response to combined treatment of PeglFN-a and Leigh Bhave Lin.
3. the frequency of KIR2DS3 in CHC patients in Chinese Han population was higher than that in healthy controls. This may be a risk factor for CHC in Chinese Han population.
The frequency of 4. HLA-Cw*06, HLA-Cw*15 and KIR2DS4CHC patients was lower than that of healthy controls. The presence of these genes may inhibit the occurrence of CHC.
The innovation of this study
1. currently, there is a report on the correlation between KIR and CHC in the Caucasus, but there is no related report in the Chinese Han population. This study mainly uses PCR-SSP to detect the correlation between the frequency of KIR and the disease and the treatment of the KIR in the Chinese Han population of the Han population.
2. through the results of the study and Meta analysis, it is the first time to suggest that KIR2DL2 is a negative factor in CHC occurrence and treatment in Chinese Han population.
The significance of this study
1. through the study, it is found that the existence of KIR2DL2 in Chinese Han population has strong NK cell inhibition ability, which makes the existence of KIR2DL2 detrimental to the clearance of HCV, which leads to the poor therapeutic effect of HCV infection, and thus is beneficial to the persistent infection of HCV.
2. K1R2DL2 can be a prejudging index for the effect of HCV treatment, and it is also an epidemiological risk factor for the occurrence of CHC in Chinese Han population. In the later study, KIR2DL2 can become an important target for the immunotherapy of CHC.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R512.63

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本文編號：1920705