本文選題：腸道病毒型(EV-D) + 中和試驗(yàn)��； 參考：《病毒學(xué)報(bào)》2017年05期

【摘要】：針對(duì)腸道病毒68型(EV-D68)建立一種新型快速、高效的中和試驗(yàn)方法,并初步評(píng)價(jià)其在EV-D68流行病學(xué)研究中的應(yīng)用價(jià)值。以滅活EV-D68病毒免疫Balb/c小鼠,利用雜交瘤技術(shù)制備其單克隆抗體;篩選反應(yīng)性好、特異性強(qiáng)的抗EV-D68單克隆抗體作為檢測(cè)抗體,基于酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)技術(shù)(ELISPOT)建立EV-D68高效中和試驗(yàn)方法;進(jìn)一步比較該方法與傳統(tǒng)中和試驗(yàn)方法 Nt-CPE的一致性,并使用該方法對(duì)臨床血清樣本進(jìn)行檢測(cè)。共獲得10株分泌抗EV-D68單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,選取一株性能最優(yōu)的15C5進(jìn)行生產(chǎn)純化,鑒定其為IgG3亞型;以15C5為檢測(cè)抗體,建立了快速檢測(cè)EV-D68中和抗體的Nt-ELISPOT方法;與Nt-CPE方法比較,Nt-ELISPOT方法將檢測(cè)時(shí)間由5~7d縮短至1d以內(nèi),并且兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致性良好;應(yīng)用所建立的Nt-ELISPOT方法對(duì)廈門地區(qū)146份人群血清樣本進(jìn)行檢測(cè),顯示血清樣本EV-D68中和抗體陽性率為98.6%(144/146),提示廈門地區(qū)可能存在過EV-D68的流行。本研究基于ELISPOT建立的新型EV-D68中和試驗(yàn)方法快速可靠,適合通量檢測(cè),可以應(yīng)用于EV-D68中和抗體水平的血清學(xué)調(diào)查,為EV-D68感染的防控工作提供幫助。
[Abstract]:A new rapid and efficient neutralization test for enterovirus 68 (EV-D68) was established and its application value in epidemiological study of EV-D68 was preliminarily evaluated. Balb/c mice were immunized with inactivated EV-D68 virus, and their monoclonal antibodies were prepared by hybridoma technique. The high efficiency neutralization test method of EV-D68 was established based on Elisa dot assay (Elisa), and the consistency of this method with the traditional neutralization test method (Nt-CPE) was compared, and the clinical serum samples were detected by this method. Ten hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies against EV-D68 were obtained, and a 15C5 with the best performance was selected for production and purification, which was identified as IgG3 subtype, and a Nt-ELISPOT method for rapid detection of neutralizing antibodies of EV-D68 was established with 15C5 as antibody. Compared with Nt-CPE method, Nt-Elispot method shortened the detection time from 5 days to less than 1 day, and the results of the two methods were in good agreement, and the established Nt-ELISPOT method was used to detect 146 human serum samples in Xiamen area. The results showed that the positive rate of EV-D68 neutralizing antibody in serum samples was 98.6% 14.4% 146G, which suggested that there might be an epidemic of EV-D68 in Xiamen area. The new EV-D68 neutralization test method based on ELISPOT is fast and reliable and suitable for flux detection. It can be applied to the serological investigation of EV-D68 neutralizing antibody level and provide help for the prevention and control of EV-D68 infection.
【作者單位】： 國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;分子疫苗學(xué)和分子診斷學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;廈門市疾病預(yù)防與控制中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):31670933),題目:手足口病腸道病毒跨血清型廣譜中和抗體的表位結(jié)構(gòu)與作用機(jī)制研究;國家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):81601762),題目:人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD59在水痘-帶狀皰疹病毒免疫逃逸中的作用研究 福建省自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):2015J05073),題目:柯薩奇病毒A16型(CA16)廣譜中和表位的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)~~
【分類號(hào)】：R446.6;R512.5

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本文編號(hào)：1895504