本文選題：肝星形細(xì)胞 + 大麻素受體　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：目的：我國乙型肝炎表面抗原的攜帶者有9000萬人，占總?cè)丝诘?.18%。由乙肝發(fā)展至肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞肝癌是威脅我國人民健康的一個重要原因。肝纖維化其形態(tài)學(xué)特征是細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積�；罨母涡菭罴�(xì)胞（hepatic stellate cells，HSCs）和肌纖維母細(xì)胞產(chǎn)生過多的細(xì)胞外基質(zhì)是肝纖維化形成的中心環(huán)節(jié)。大麻素（cannabinoid）是體內(nèi)分布廣泛的脂溶性信號分子，其作用由特異性大麻素受體l（cannabinoidreceptor1，CB1）和大麻素受體2（cannabinoid receptor2，CB2）介導(dǎo)，CB1和CB2在嚙齒類動物和人類肝組織均有表達(dá)。病理狀態(tài)下如CCL4或膽汁淤積肝硬化肝組織CB1表達(dá)上調(diào)。兩者在肝臟病中的表達(dá)特性和在肝纖維化中的作用是目前研究的熱點。已知CB1在脂肪肝和非酒精性肝硬化中表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)纖維化的發(fā)生和發(fā)展。但乙型肝炎導(dǎo)致的纖維化肝組織中CB1的表達(dá)特性及與疾病的發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系罕見報道。 脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(Adipocyte FABP,A-FABP或FABP4)是目前已發(fā)現(xiàn)的9種類型脂肪酸結(jié)合蛋白之一。FABP4主要存在于脂肪細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、聯(lián)系代謝性和炎癥性反應(yīng)中起重要作用。已知肝細(xì)胞表達(dá)肝性FABP。FABP4在乙型肝炎引起的肝硬化等肝疾病中的表達(dá)及意義也尚未見報道。 本研究分為2部分：1選擇各期乙肝肝纖維化肝穿標(biāo)本80例，免疫組織化學(xué)方法檢測α-SMA、CB1、CB2和CD68在纖維化肝組織中的表達(dá)變化，定量分析HSC中CB1的表達(dá)以及與CB2的關(guān)系，旨在為乙型肝炎肝纖維化的治療提供實驗依據(jù)。2選擇乙肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞肝癌肝穿或手術(shù)切除標(biāo)本80例，免疫組織化學(xué)方法檢測FABP4、CB1和CD68在肝組織中的表達(dá)變化，定量分析FABP4的表達(dá)以及與CB1的關(guān)系。 方法： 1各期乙肝肝纖維化肝穿標(biāo)本的α-SMA、CB1、CB2、CD68的表達(dá)和細(xì)胞計數(shù) 選取慢性乙型肝炎肝纖維化肝穿標(biāo)本共80例，S1到S4期各20例。免疫組織化學(xué)法檢測纖維化肝組織中平滑肌α-肌動蛋白（α-SMA）、CD68、大麻素受體1和大麻素受體2（CB1、CB2）的表達(dá)，并對肝小葉內(nèi)各個指標(biāo)陽性細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。免疫熒光雙標(biāo)法檢測CB1和α-SMA、CB68和α-SMA的共表達(dá)。 2乙型肝炎引起的肝纖維化、肝硬化、肝細(xì)胞肝癌標(biāo)本的FABP4、CB1、CD68的分布、定位和定量分析 選取慢性乙型肝炎導(dǎo)致肝纖維化早、晚期、肝硬化期、肝細(xì)胞肝癌的肝穿或手術(shù)切除標(biāo)本共80例，肝纖維化早期和晚期各20例為肝穿標(biāo)本，肝硬化期、肝細(xì)胞肝癌各20例為手術(shù)切除標(biāo)本。免疫組織化學(xué)法檢測肝組織中脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP4）、CB1、CD68的表達(dá)，并對各個指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)行定量分析。 結(jié)果： 1各期乙肝肝纖維化組織的α-SMA、CB1、CB2和CD68表達(dá)和定量分析 1.1α-SMA的表達(dá)及定量分析：S1期匯管區(qū)小血管平滑肌表達(dá)，肝小葉內(nèi)可見單個散在細(xì)胞陽性表達(dá)。S2期除匯管區(qū)外，肝竇內(nèi)可見陽性細(xì)胞。S3期在血管平滑肌、肝竇、纖維間隔、壞死灶及小血管新生處可見陽性細(xì)胞。S4期表達(dá)形式與S3期相同。肝小葉內(nèi)陽性細(xì)胞計數(shù)顯示：S1期：13.84±5.88，S2期：21.16±11.64，S3期：26.08±11.29，S4期：39.12±17.76。與S1期比較，S2、S3、S4期陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加（P0.05），但S2、S3期比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 1.2CB1的表達(dá)及定量分析：肝竇內(nèi)、纖維間隔、匯管區(qū)內(nèi)及小葉內(nèi)新生毛細(xì)血管和炎癥壞死灶內(nèi)可見陽性細(xì)胞，炎癥壞死灶旁及匯管區(qū)旁肝細(xì)胞漿亦有表達(dá)。肝小葉內(nèi)陽性細(xì)胞計數(shù)顯示：S1期：18.00，18.00，S2期：25.00，27.00，S3期：30.00，27.00，S4期：41.00，31.25。S2、S3、S4期的陽性細(xì)胞數(shù)均明顯高于S1期（P0.05）。但S3與S4期陽性細(xì)胞數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義。 1.3CB2的表達(dá)及定量分析：CB2陽性細(xì)胞主要表達(dá)于肝竇、纖維間隔、匯管區(qū)及炎癥壞死灶，各期表達(dá)形式相似。但隨纖維化分期的增高陽性細(xì)胞逐漸增多。肝小葉內(nèi)陽性細(xì)胞計數(shù)顯示：S1期：18.00，9.00，S2期：30.00，15.00，S3期：34.50，36.50，S4期：44.00，19.25。與S1期比較，S3、S4期陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多（P0.05)，S3期與S4期差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 1.4CD68的陽性表達(dá)及定量分析：S1、S2期陽性細(xì)胞位于肝竇和匯管區(qū)，S3期陽性細(xì)胞增多，分布于肝竇、匯管區(qū)、壞死灶區(qū)等。S4期表達(dá)形式與S3期基本相同。肝小葉內(nèi)陽性細(xì)胞計數(shù)顯示：S1期：13.00，13.25，S2期：14.50，21.00，S3期：35.50，18.50，S4期：30.00，15.50。S1期與S3、S4期比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05)。S1期與S2期之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。S3期與S4期差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 1.5α-SMA與CB1相關(guān)性分析：CB1和α-SMA都隨乙肝纖維化程度增加而增加，相關(guān)分析兩者的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.880，P0.05）。 1.6免疫熒光雙標(biāo) CB1和α-SMA免疫熒光雙標(biāo):肝小葉內(nèi)所有α-SMA陽性細(xì)胞均表達(dá)CB1，但CB1陽性細(xì)胞更多。 CD68和α-SMA的免疫熒光雙標(biāo)：二者在肝小葉內(nèi)均有陽性表達(dá)，但沒有共表達(dá)。 2乙型肝炎引起的肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞肝癌活檢標(biāo)本的FABP4、CB1、CD68的表達(dá)和定量分析 2.1FABP4的表達(dá)及定量分析：正常肝臟中FABP4僅在匯管區(qū)小血管內(nèi)皮有少許表達(dá)；肝纖維化主要在匯管區(qū)小動脈、肝小葉內(nèi)炎癥壞死再生區(qū)或小葉周邊的小血管中表達(dá)；肝癌癌巢間質(zhì)中少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞呈陽性表達(dá)。肝小葉內(nèi)及癌巢內(nèi)陽性表達(dá)IOD值分別為：正常肝：938.53,1629.23纖維化早期：1484.45，4513.56，纖維化晚期：2721.36，5396.19，硬化期：11872.68，15844.55，，HCC：1472.87，4788.79。與正常肝臟比較，肝纖維化和肝硬化FABP4陽性表達(dá)明顯增多（P0.05)，肝癌與肝纖維化早期差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 2.2CB1的表達(dá)及定量分析：肝竇內(nèi)、纖維間隔、匯管區(qū)內(nèi)及小葉內(nèi)新生毛細(xì)血管和炎癥壞死灶內(nèi)可見陽性細(xì)胞，炎癥壞死灶旁及匯管區(qū)旁肝細(xì)胞漿亦有表達(dá)；肝癌癌巢邊緣間質(zhì)內(nèi)少量細(xì)胞胞漿表達(dá)。肝小葉內(nèi)及癌巢內(nèi)陽性細(xì)胞計數(shù)分別為纖維化早期：18.00，18.25，纖維化晚期：38.00，30.00，硬化期：33.30，15.75，HCC：9.00，8.25。與纖維化早期比較其他幾個病變表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05)，肝纖維化晚期和肝硬化期陽性細(xì)胞數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義。 2.3CD68的陽性表達(dá)及定量分析：肝纖維化早期陽性細(xì)胞位于肝竇和匯管區(qū)，肝纖維化晚期和肝硬化期陽性細(xì)胞增多，分布于肝竇、匯管區(qū)、壞死灶區(qū)等；肝癌中主要在癌巢間間質(zhì)小血管旁和癌細(xì)胞間散在表達(dá)。肝小葉內(nèi)及癌巢內(nèi)陽性細(xì)胞計數(shù)分別為:纖維化早期：14.00，17.00，纖維化晚期：30.00，17.75，硬化期：42.00，10.05，HCC：20.00，16.00與纖維化早期比較其他病變陽性細(xì)胞數(shù)多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： 1乙肝纖維化肝穿標(biāo)本免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，肝小葉內(nèi)活化肝星狀細(xì)胞（α-SMA陽性表達(dá)）和CB1陽性細(xì)胞隨肝纖維化程度的增加而表達(dá)增多，免疫熒光雙標(biāo)證實活化肝星狀細(xì)胞表達(dá)CB1，這一結(jié)果說明肝星狀細(xì)胞的CB1在乙肝肝纖維化的形成和發(fā)展中起作用。 2首次報道CB2在乙肝纖維化組織中的表達(dá)增加，并隨肝纖維化分期的增加而增加，其意義及與CB1消長是待進(jìn)一步研究的課題。 3FABP4在乙肝纖維化、肝硬化組織中小血管和部分毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，定量結(jié)果證實隨肝纖維化程度增加而增加，即肝硬化期表達(dá)最多。肝細(xì)胞肝癌中FABP4在僅少量毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)；定量結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌組織中FABP4的表達(dá)較肝纖維化晚期和肝硬化期有意義減少。說明內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中起著重要作用。
[Abstract]:Objective: there are 90 million carriers of HBsAg carriers in China, which account for the development of 7.18%. from hepatitis B to liver fibrosis in the total population. Liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma are an important cause for the health of the people in China. The morphological characteristics of liver fibrosis are overdeposition of extracellular matrix. The activated hepatic stellate cells (hepatic stellate) are the morphological features of liver fibrosis. Cells, HSCs) and myofibroblast production of excessive extracellular matrix is the central link in the formation of liver fibrosis. Cannabinoid is a widely distributed fat soluble signal molecule, which is mediated by specific l receptor (cannabinoidreceptor1, CB1) and cannabin receptor 2 (cannabinoid receptor2, CB2), CB1 and CB2 in meshing. The expression of CB1 in liver tissues such as CCL4 or cholestasis liver cirrhosis is up regulated in the pathological state. The expression characteristics of both in liver disease and the role in liver fibrosis are the hot spots of current research. The expression of CB1 is known to be up-regulated in fatty liver and nonalcoholic cirrhosis to promote the development and development of fibrosis. However, the expression of CB1 in liver fibrosis caused by hepatitis B and its relationship with the occurrence and development of the disease are rarely reported.
Fatty acid binding protein (Adipocyte FABP, A-FABP or FABP4) is one of the 9 types of fatty acid binding proteins found at present..FABP4 is found mainly in adipocytes and macrophages. It plays an important role in regulating lipid metabolism, metabolism and inflammatory response. Hepatocytes are known to express hepatic FABP.FABP4 in hepatitis B. The expression and significance of liver cirrhosis and other liver diseases have not been reported.
This study is divided into 2 parts: 1 select 80 cases of liver fibrosis of liver fibrosis in each period, and detect the expression of alpha -SMA, CB1, CB2 and CD68 in the fibrosis liver tissue by immunohistochemistry. The quantitative analysis of the expression of CB1 in HSC and the relationship with CB2, the purpose is to provide experimental basis for the choice of hepatitis B Fiber for the treatment of hepatitis B liver fibrosis. 80 cases of hepatic or surgical resection of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma were performed. The expression of FABP4, CB1 and CD68 in the liver tissues was detected by immunohistochemistry. The expression of FABP4 and the relationship with CB1 were quantitatively analyzed.
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本文編號：1877067