發(fā)布時(shí)間：2018-04-30 03:40

  本文選題：人類免疫缺陷病毒 + Gag蛋白　； 參考：《蠶業(yè)科學(xué)》2015年01期

【摘要】：人類免疫缺陷病毒(HIV)是導(dǎo)致艾滋病的主要病原之一,HIV病毒的核心結(jié)構(gòu)蛋白Gag有自我裝配功能,并能激發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫,是理想的HIV疫苗靶抗原。將Gag基因克隆至質(zhì)粒p Bac PAK8中構(gòu)建重組質(zhì)粒,并與線性化的家蠶桿狀病毒基因組DNA共轉(zhuǎn)染Bm N細(xì)胞,得到重組家蠶桿狀病毒Bm NPV-Gag。將該重組病毒感染Bm N細(xì)胞和家蠶5齡幼蟲,SDS-PAGE、Western blotting檢測顯示在重組病毒感染的Bm N細(xì)胞和家蠶5齡幼蟲血淋巴中均有與Gag蛋白大小(55 k D)相符的特異性條帶出現(xiàn),證明重組Gag蛋白成功表達(dá)。用ELISA法測定重組病毒感染后不同時(shí)間目的蛋白質(zhì)的表達(dá)變化:Bm N細(xì)胞中的Gag蛋白含量在感染后的第4天達(dá)到最大值6.995 pg/個(gè),在感染第5天后出現(xiàn)下降趨勢;5齡幼蟲血淋巴中的Gag蛋白含量在感染后的第7天最高,為790.1 ng/m L。重組Gag蛋白在家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的成功表達(dá),為艾滋病疫苗的研究探索了新的途徑。
[Abstract]:Human immunodeficiency virus (HIV) is one of the main pathogens leading to AIDS. Gag, the core structural protein of HIV, has the function of self-assembly and can stimulate humoral and cellular immunity. It is an ideal target antigen of HIV vaccine. The Gag gene was cloned into the plasmid p Bac PAK8 to construct the recombinant plasmid and co-transfected with the linearized genomic DNA of Bombyx mori baculovirus into BmN cells to obtain the recombinant baculovirus BmNPV-Gag. The results of SDS-PAGEG blotting analysis of BMN cells infected with recombinant virus and silkworm 5th instar larvae showed that there were specific bands consistent with the size of Gag protein in hemolymph of Bm N cells infected by recombinant virus and silkworm larvae at 5th instar. It was proved that the recombinant Gag protein was successfully expressed. ELISA assay was used to determine the changes of protein expression at different times after infection of recombinant virus. The content of Gag protein in the cell line reached a maximum of 6.995 pg/ on the 4th day after infection. The Gag protein content in the hemolymph of the 5th instar larvae was the highest at the 7th day after infection, which was 790.1 ng/m L. The successful expression of recombinant Gag protein in Bombyx mori baculovirus expression system provides a new approach for the study of AIDS vaccine.
【作者單位】： 浙江理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)研究所 浙江省家蠶生物反應(yīng)器和生物醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：大學(xué)生科技創(chuàng)新項(xiàng)目(No.2014R406041,2013R406018) 浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.Y3110354) 國家高技術(shù)發(fā)展計(jì)劃“863”項(xiàng)目(No.2012ZX09102301-009,2011AA100-603) 浙江省高校生物學(xué)重中之重(一級(jí))學(xué)科項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R512.91

【參考文獻(xiàn)】

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