本文選題：結(jié)核分枝桿菌 + 結(jié)核病　； 參考：《北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所》2017年碩士論文

【摘要】：結(jié)核分枝桿菌是一種胞內(nèi)感染菌,故在體液免疫應(yīng)答過程中產(chǎn)生的抗體對它的免疫作用較弱,而對細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌無作用,因此天然免疫在結(jié)核分枝桿菌的感染過程中起到非常重要的作用。自噬作為天然免疫應(yīng)答中非常重要的一部分,參與眾多先天免疫信號(hào)的調(diào)控。自噬是低氧、營養(yǎng)缺乏、細(xì)胞器老化等各種原因?qū)е碌募?xì)胞的應(yīng)激反應(yīng),自噬不僅能降解細(xì)胞內(nèi)老化的細(xì)胞器和蛋白質(zhì),還能清除細(xì)胞內(nèi)感染的細(xì)菌和病毒。自噬相關(guān)蛋白(autophagy related protein,ATG)之間互相協(xié)同,引起自噬體形成過程中的細(xì)胞膜變化,當(dāng)抗原提呈細(xì)胞一旦吞噬了結(jié)核分枝桿菌由單層膜結(jié)構(gòu)組成的吞噬囊泡在瞬間就會(huì)被LC3蛋白修飾,自噬蛋白相互激活修飾最終成熟為自噬小體,自噬小體與溶酶體互相融合形成自噬溶酶體,將吞噬的結(jié)核分枝桿菌降解。細(xì)胞的自噬除了對病原體具有直接的殺傷作用,而且自噬在抗原提成中發(fā)揮不可替代的作用,自噬作用可以促進(jìn)位于自噬體表面的MHC-ΙΙ分子與病原微生物的抗原表位結(jié)合,并提呈給CD4+T細(xì)胞,自噬同時(shí)可以通過MHC-Ι將抗原提呈給CD8+T細(xì)胞。本研究收集了初治肺結(jié)核病患者和健康志愿者共24人,使用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測了初治結(jié)核病患者(病例組)和健康志愿者(對照組)之間的自噬基因的水平,本研究發(fā)現(xiàn),對照組mTOR基因表達(dá)水平是病例組的(2.76±1.56)倍;對照組Rheb基因表達(dá)水平是病例組的(1.85±0.91)倍,可見初治結(jié)核病患者中這兩種基因表達(dá)下調(diào),可在一定程度上促進(jìn)自噬水平,抵抗M.tb感染。除此之外,研究發(fā)現(xiàn)對照組BECN1基因表達(dá)水平是病例組的(2.23±1.52)倍,說明初治肺結(jié)核患者可以通過下調(diào)BECN1基因的表達(dá)從而抑制自噬的發(fā)生,通過這一基因水平的變化可以得出BECN1通路和mTOR通路對自噬的調(diào)節(jié)是不一致的,甚至有可能是相反的調(diào)節(jié)。本研究同時(shí)檢測了使用H37Rv感染THP-1細(xì)胞后自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7、ATG12和Rheb在感染后30min、90min、4h、10h和24h的表達(dá)水平,研究發(fā)現(xiàn)ATG5、ATG7和ATG12在THP-1細(xì)胞感染H37Rv后30min后即表達(dá)上調(diào),ATG5和ATG7基因在感染10h左右達(dá)到了基因表達(dá)的最高峰,自噬的調(diào)節(jié)基因Rheb表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)早期并沒有顯著的升高或者下降,在感染的時(shí)間段內(nèi)(30min到24h),自噬的基因Rheb表達(dá)水平與感染前相比變化在2倍以內(nèi),故可以認(rèn)為在體外實(shí)驗(yàn)中在H37Rv感染早期,Rheb基因沒有明顯變化;使用二甲雙胍干預(yù)后的THP-1細(xì)胞在感染了BCG菌株后,自噬相關(guān)基因Rheb的表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)組(使用二甲雙胍干預(yù))和對照組(不使用二甲雙胍干預(yù))并沒有顯著的變化,而自噬相關(guān)基因mTOR在感染30min時(shí)有顯著的表達(dá)下調(diào),故二甲雙胍可能在THP-1細(xì)胞在感染了BCG菌株早期抑制了自噬基因mTOR表達(dá);除此之外,使用活細(xì)胞工作站觀察使用BCG菌株感染后含有二甲雙胍和不含有二甲雙胍藥物的細(xì)胞中mRFP-GFP-LC3B的含量,發(fā)現(xiàn)二甲雙胍還可以促進(jìn)自噬小體和溶酶體的融合,促進(jìn)了THP-1細(xì)胞對BCG菌株的自噬。
[Abstract]:Mycobacterium tuberculosis is a kind of intracellular infection bacteria, so the antibody produced in the humoral immune response to it is weak, but it does not affect the Mycobacterium tuberculosis in the cell. Therefore, the natural immunity plays a very important role in the infection process of Mycobacterium tuberculosis. Autophagy is very important in the natural immune response. Part one participates in the regulation of numerous innate immune signals. Autophagy is the stress response of cells, such as hypoxia, nutritional deficiency, organelle aging and so on. Autophagy can not only degrade intracellular organelles and proteins, but also remove intracellular infection bacteria and diseases. Autophagy related protein (autophagy related protein, ATG) The cell membrane changes in the process of the formation of autophagosomes. Once the antigen presenting cells have phagocytic phagocytic vesicles composed of single layer membrane structure, the phagocytic vesicles of Mycobacterium tuberculosis are instantly modified by LC3 protein. Autophagic proteins interact with each other to mature into autophagic bodies, and autophagosomes and lysosomes are fused to form autophagy. The lysosome degrades the phagocytic Mycobacterium tuberculosis. Autophagy has a direct killing effect on the pathogen, and autophagy plays an irreplaceable role in the antigen preparation. Autophagy can promote the combination of the MHC- molecules on the surface of the autophagosome and the epitopes of the pathogenic microorganism, and present it to CD4+T cells and autophagy. At the same time, the antigen can be presented to CD8+T cells by MHC-. This study collected 24 patients with pulmonary tuberculosis and healthy volunteers. The level of autophagy gene was detected by real-time quantitative PCR. This study found that the mTOR gene expressed water in the control group. The level of the case group was (2.76 + 1.56) times, and the expression level of Rheb gene in the control group was (1.85 + 0.91) times that of the case group. It was found that the expression of these two genes was downregulated in the patients with primary TB, which could promote autophagy to a certain extent and resist M.tb infection. In addition, the study found that the expression level of BECN1 gene in the control group was (2.23 + 1.52) times that of the case group. It is suggested that the primary treatment of tuberculosis patients can inhibit the occurrence of autophagy by downregulating the expression of the BECN1 gene. Through the change of this gene level, the regulation of autophagy between the BECN1 pathway and the mTOR pathway is inconsistent, and may even be the opposite regulation. This study also detected the autophagy associated with the use of H37Rv infected THP-1 cells. The expression level of 30min, 90min, 4h, 10h and 24h after infection of the gene ATG5, ATG7, ATG12 and Rheb was found to be up and up after the infection of ATG5, ATG7 and ATG12. In the period of infection (30min to 24h), the expression level of autophagy gene Rheb is less than 2 times compared with that before infection. Therefore, it can be considered that in the early stage of H37Rv infection, the Rheb gene did not change obviously. The THP-1 cells using metformin after the infection of the BCG strain, the autophagy related gene Rhe. There was no significant change in the expression level of B in the experimental group (using metformin intervention) and the control group (without the use of metformin intervention), but the autophagy related gene mTOR decreased significantly in 30min infection, so metformin may inhibit the expression of autophagy gene mTOR in the early stage of the infection of the BCG strain of the BCG strain; in addition, The content of mRFP-GFP-LC3B in cells containing metformin and no metformin containing metformin after infection with BCG strain was observed with a live cell workstation. It was found that metformin also promoted the fusion of autophagosomes and lysosomes, and promoted autophagy of THP-1 cells to BCG.

【學(xué)位授予單位】：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R52

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本文編號(hào)：1784905