本文選題：入蒼白桿菌 + 耐藥表型��； 參考：《廣州中醫(yī)藥大學》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景和目的：人蒼白桿菌(Ochrobactrum anthropi)屬于蒼白桿菌屬,是一種非發(fā)酵型的革蘭陰性需氧桿菌。上世紀80年代以前人們普遍一直認為其不具臨床意義,無致病性。但自1980年Appelbaum等報道道第1例人蒼白桿菌引起胰腺膿腫病例以來,人感染蒼白桿菌的報道越益增多,逐漸引起了人們重視。目前,絕大多數(shù)研究者已認為,人蒼白桿菌是一類條件病原菌,其感染往往與患者局部或全身免疫功能低下有關,如移植器官,腫瘤晚期或使用免疫抑制劑、過度勞累等,可引起敗血癥、腦膜炎、腹膜炎等疾病[2-4]。但近年國內(nèi)外也不斷有報道人蒼白桿菌可造成免疫功能正常人群發(fā)病,因此該菌已被認為是一種人類致病菌。Vaidya等通過Medline檢索了1989-2005年與人蒼白桿菌相關的122篇醫(yī)學文獻中41篇是人蒼白桿菌感染的臨床個案報道,其中15篇是免疫功能正常人感染該菌的文獻。我國目前開展類似于16S基因測序的單位為數(shù)不多,現(xiàn)臨床上多數(shù)采用Vitek2、 API鑒定細菌,但二者的對蒼白桿菌屬的鑒定只有人蒼白桿菌這唯一的結果,會錯誤地將蒼白桿菌屬的其他種鑒定為人蒼白桿菌(比如中間蒼白桿菌、解糖精假蒼白桿菌等),同時也有可能將其他生化反應與之類似的菌錯誤的鑒定為人蒼白桿菌(如玫瑰單胞菌屬),所以大部分醫(yī)院對于蒼白桿菌屬的鑒定通常只有人蒼白桿菌一個種,該鑒定方法存在一定局限性。關于人蒼白桿菌耐藥性及其耐藥機制的研究,國內(nèi)外少見有報道且研究內(nèi)容也十分籠統(tǒng)。目前對于人蒼白桿菌耐藥性的報道主要為對于亞胺培南、氨基糖苷類、喹諾酮類藥物敏感,對一、二、三代頭孢、青霉素類耐藥,對于頭孢吡肟的耐藥率存在一定的差別。但這些研究報道所納入的實驗菌株鑒定僅僅依靠Vitek2、API方法,而根據(jù)蔡婷婷[3]同學的前期實驗內(nèi)容,我們發(fā)現(xiàn)其實人蒼白桿菌、中間蒼白桿菌、解糖精假蒼白桿菌之間的耐藥特點迥然不同。因此針對人蒼白桿菌的耐藥情況,本實驗對17株經(jīng)16S rRNA基因測序鑒定為人蒼白桿菌臨床分離株進行耐藥表型、基因型和分子流行病學的研究,(1)采用Vitek2 Compact革蘭陰性菌AST-GN13藥敏鑒定微量肉湯法及聚合酶鏈反應(PCR)檢測人蒼白桿菌的耐藥表型和常見耐藥基因型,從不同層面上發(fā)現(xiàn)人蒼白桿菌的多重耐藥情況和耐藥機制;(2)采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)對這些地區(qū)人蒼白桿菌進行同源性分析,明確所感染的菌株是否同源,判斷是散在性感染還是暴發(fā)流行性感染,為預防和控制該地區(qū)醫(yī)院感染提供理論依據(jù)。方法：收集2012年2月至2013年5月從廣州,北京,湖南和廣州金域醫(yī)學檢驗中心分離保存17株非重復人蒼白桿菌臨床分離株。所有菌株經(jīng)李工廠等人采用16S rRNA基因測序鑒定人蒼白桿菌。(1)采用Vitek2 Compact革蘭陰性菌AST-GN13藥敏鑒定微量肉湯法檢測17株人蒼白桿菌對11種常見抗菌藥物的最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC):(2)采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)檢測整合子遺傳標記intI1、intI2、intI3,A類超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因GES、TEM、PER、CTX-M、VEB、SHV、CARB,頭孢菌素酶ampC、ampR、DHA-1,氨基糖苷修飾酶基因aac(6')-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、 ant(3")-Ⅰ、aph(3')-Ⅰ、aph(3')-Ⅱ、aph(3')-Ⅳ、aadA2,外排泵基因qacE△1、 mdfA、adeB以及16S rRNA甲基化酶rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、armA、npmA等相關耐藥基因；(3)采用脈沖場凝膠電泳(PFGE)對17株人蒼白桿菌進行分子分型和菌株間的同源性分析。結果：(1)17株0.anthropi對氨曲南(ATM)、 三代頭孢菌素(CAZ)和哌拉西林/他唑巴坦(TZP)耐藥率均100%；對第四代頭孢菌素(FEP)敏感株為7株(41.2%),表現(xiàn)為部分耐藥；而對高敏感性藥物有以下：阿米卡星(AMK)、慶大霉素(GM)和妥布霉素(TOB)等氨基糖苷類抗菌藥物的敏感率分別為94.1%、88.2%、94.1%；亞胺培南(IMP)、復方新諾明(SXT)敏感率分別為88.2%、94.1%；對喹諾酮類抗生素左氧氟沙星(LVLX)、環(huán)丙沙星(CIP)為100%敏感。其中編號為5652的人蒼白桿菌對阿米卡星(AMK)、慶大霉素(GM)和妥布霉素(TOB)氨基糖苷類抗生素均表現(xiàn)耐藥.(2)17株人蒼白桿菌中,整合子遺傳標記物檢出率為intI1(5.9%,1株)、intI3(5.9%,1株)；β-內(nèi)酰胺酶基因檢出率為ampC(100%,17株)、ampR(100%,17株),氨基糖苷修飾酶基因檢出率為aac(6")-Ⅰ(5.9%,1株)、ant(3")-Ⅰ(5.9%,1株)、aadA2(5.9%,1株)及外排泵基因qacE△1(5.9%,1株)；而DHA-1、int12、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、aph(3')-Ⅵ、aph(3')-Ⅰ、aph(3')-Ⅱ、 rmtA、rmtD、armA、rmtB、rmtC、npmA、adeB、mdfA、TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、 CARB等基因無陽性檢出,其中人蒼白桿菌(編號為5652)除ampC、ampR外,還檢測出攜帶多種抗生素耐藥基因,包括整合子基因intI1、intI3與氨基糖苷修飾酶基因aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、aadA2及外排泵基因qacE△1。(3)17株人蒼白桿菌的脈沖場凝膠電泳圖譜可劃分成11個基因型(A-K),其中A型4株、B型3株、C型2株、D—K型各1株；經(jīng)過對A型至K型各型中的菌株來源進行查證,發(fā)現(xiàn)各菌株來源于不同醫(yī)院的不同時期,且檢測菌株數(shù)量有限,PFGE結果未能說明人蒼白桿菌構成地區(qū)性暴發(fā)流行。結論：這些地區(qū)17株人蒼白桿菌均具有較高的耐藥率,而且與耐藥基因的表達情況有較好的相關性。產(chǎn)生頭孢菌素酶(AmpC酶)可能是本研究17株人蒼白桿菌對頭孢菌素類抗生素耐藥的最主要原因；除了整合子遺傳標記intI1、intI3外,編號為5652的人蒼白桿菌株還擴增出多種類型的耐藥基因,包括氨基糖苷修飾酶基因aac(6')-Ⅰ、ant(3")-I、aadA2及外排泵基因qacE△1一系列耐藥基因,與其藥敏表型結果相符。經(jīng)Blast比對分析,這些耐藥基因序列與銅綠假單胞菌、肺克等耐藥菌的同型耐藥基因呈高度同源,這說明人蒼白桿菌除了本身攜帶的耐藥基因的誘導表達外,還有可能通過整合外環(huán)境中其它細菌的耐藥基因從而介導細菌耐藥,也表明細菌的耐藥機制日趨復雜。17株人蒼白桿菌的脈沖場凝膠電泳結果未能說明本地區(qū)發(fā)生暴發(fā)性流行,但由于人蒼白桿菌的帶有多重耐藥特征,因此需積極配合醫(yī)院感染管理部門進行耐藥性監(jiān)測,防止醫(yī)院感染和暴發(fā)流行。
[Abstract]:The research background and purpose : Ochrobactrum anthropi belongs to the genus Streptomyces and is a non - fermented Gram - negative aerobic bacterium . ( 1 ) The resistance phenotype and drug - resistant mechanism of human pale - bacilli were detected by the method of AST - GN13 and PCR . The isolates were analyzed by pulsed - field gel electrophoresis ( PFGE ) . ( 1 ) The minimal inhibitory concentration ( MIC ) of 17 strains of human pale bacilli to 11 kinds of common antibacterial drugs was determined by the method of AST - GN13 . The minimal inhibitory concentration ( MIC ) was determined by polymerase chain reaction ( PCR ) .
( 3 ) By using PFGE , 17 strains were analyzed by molecular typing and homology analysis between strains . Results : ( 1 ) The resistance rates of 17 strains were 100 % .
7 strains ( 41.2 % ) of the fourth generation cephalosporin ( FEP ) strain were resistant to partial resistance .
The sensitive rates of AMK , GM and TOB were 94.1 % , 88.2 % and 94.1 % , respectively .
Imipenem ( IMP ) and compound sulfamethoxazole ( SXT ) were 88.2 % and 94.1 % , respectively .
( 2 ) The detection rate of integrated subgenetic markers was intI1 ( 5.9 % , 1 strain ) and intI3 ( 5.9 % , 1 strain ) .
The detection rate of 尾 - lactamase gene was ampC ( 100 % , 17 strains ) , ampR ( 100 % , 17 strains ) , the detection rate of amino - glycoside - modified enzyme gene was 3 - ( 6 " ) - 鈪，

本文編號：1781619