本文選題：丙型肝炎病毒 + 復(fù)制子��； 參考：《中國病毒病雜志》2016年01期

【摘要】：目的檢測丙型肝炎病毒(HCV)復(fù)制子細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體HCV RNA的穩(wěn)定性和表達(dá)水平,并研究干擾素α抑制HCV復(fù)制過程中,外泌體HCV RNA水平與胞內(nèi)病毒復(fù)制水平的相關(guān)性。方法建立G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的HCV復(fù)制子細(xì)胞模型HCV-Con I-Rep,比較超速離心和沉淀法對HCV RNA陽性外泌體的分離效果;實時定量PCR法檢測培養(yǎng)上清的HCV RNA水平并評價其對表面活性劑NP-40和RNase A的敏感性;不同劑量干擾素α(0、0.4、2、10、50、250IU/ml)處理72h或100IU/ml干擾素α處理不同時間(0、6、12、24、48、72h),分別檢測上清和胞內(nèi)HCV RNA水平,并評價兩者的相關(guān)性。結(jié)果成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)的HCV復(fù)制子細(xì)胞模型;PEG沉淀較超速離心法能夠更高效地分離外泌體;HCV復(fù)制子細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體中含有較高水平(~106 IU/ml)的HCV RNA,但在表面活性劑的存在下,可因外泌體脂質(zhì)膜破壞而被RNase A降解;干擾素α處理過程中,胞內(nèi)HCV RNA和上清中外泌體HCV RNA水平均顯著降低;Spearman相關(guān)性分析提示,胞內(nèi)HCV RNA和上清中外泌體HCV RNA在不同劑量干擾素處理組和不同處理時間組的水平均具有顯著相關(guān)性(r=0.9690,P0.01和r=0.7069,P=0.001)。結(jié)論 HCV亞基因組復(fù)制子細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體HCV RNA水平可作為更方便檢測的指標(biāo),反映胞內(nèi)病毒復(fù)制水平的變化。
[Abstract]:Objective to detect the stability and expression level of HCV RNA in the culture of hepatitis C virus (HCV) replicator cells, and to study the correlation between the HCV RNA level of exosome and the replication level of intracellular virus during the inhibition of HCV replication by interferon 偽.Methods G418 was established to screen stable HCV replicator cell model HCV-Con I-Rep. to compare the effect of ultracentrifugation and precipitation on the isolation of HCV RNA positive exosomes.The level of HCV RNA in culture supernatant was measured by real-time PCR and its sensitivity to surfactant NP-40 and RNase A was evaluated.The correlation between them was evaluated.Results the stable expression of HCV replicator cell model was successfully constructed. Compared with ultracentrifugation, HCV precipitation was more efficient in the isolation of HCV RNAs from the exocrine of the exocrine cell culture supernatant, but in the presence of surfactant.During the treatment of interferon 偽, the levels of HCV RNA and HCV RNA in the supernatant decreased significantly.The levels of intracellular HCV RNA and supernatant HCV RNA were significantly correlated with those of different doses of interferon treatment group and different treatment time groups (P0.01 and 0.7069 P0. 01).Conclusion the level of HCV RNA in the supernatant of HCV subgenomic replicator cell culture can be used as a more convenient index for detection and reflect the changes of the replication level of intracellular virus.
【作者單位】： 北京大學(xué)人民醫(yī)院北京大學(xué)肝病研究所丙型肝炎和肝病免疫治療北京市重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81572043) 國家科技重大專項(2012ZX10002003)
【分類號】：R512.63

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本文編號：1762282