本文選題：日月貝多糖 + 血吸蟲(chóng)　； 參考：《皖南醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：目的:初步分析日月貝多糖的結(jié)構(gòu)并探討其聯(lián)用吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)肝纖維化形成的干預(yù)及其機(jī)制。方法:1.日月貝多糖(APS)粗提物經(jīng)DEAE分離得到其主要組分APS1,再經(jīng)S-400對(duì)其進(jìn)行純化,得到高純度的APS1-1組分。2.采用PMP柱前衍生法檢測(cè)APS1-1的單糖組成,凝膠排阻法分析其分子量。3.50只雌性BALB/c小鼠(6～8周齡)隨機(jī)分成五組,每組10只;APS組(A組):以APS200mg/(kg·d)(溶于1mL生理鹽水中)的劑量灌胃8w;吡喹酮組(B組):先給予吡喹酮500mg/(kg·d)(溶于1mL生理鹽水中)的劑量灌胃2d,再給予1mL生理鹽水灌胃8w;APS+吡喹酮組(C組):給予吡喹酮500mg/(kg·d)的劑量灌胃2d,再給予APS200mg/(kg·d)灌胃8w;生理鹽水組(D組):給予1mL生理鹽水灌胃8w;正常對(duì)照組(E組)。A～D組給藥前先以日本血吸蟲(chóng)尾蚴30±2條/只經(jīng)腹部皮膚攻擊感染小鼠8周;E組小鼠不感染血吸蟲(chóng)尾蚴,作為健康對(duì)照組。4.灌胃8周后處死小鼠,收集血清,用ELISA法檢測(cè)血清白介素(interleukine,IL)-12、干擾素(interferon,IFN)-γ、IL-5、IL-13、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和透明質(zhì)酸酶(Hyaluronidase,HA)含量;取肝組織,HE染色觀察其纖維化程度,免疫組化觀察肝組織中Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型膠原蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.PMP柱前衍生法檢測(cè)結(jié)果表明,APS1-1主要由葡萄糖組成,其摩爾比重約為64.5%,此外,還含有少量甘露糖、半乳糖和氨基葡萄糖;凝膠排阻法分析結(jié)果表明,APS1-1的分子量為11.7kDa。2.HE染色結(jié)果表明,E組肝組織細(xì)胞形態(tài)正常且結(jié)構(gòu)完整;血吸蟲(chóng)感染后,D組的肝組織出現(xiàn)大量的肉芽腫和蟲(chóng)卵結(jié)節(jié),肝細(xì)胞受擠壓并破壞嚴(yán)重,且纖維化程度高度增生(3級(jí));分別給予APS(A組)或吡喹酮(B組)后,肝組織中的蟲(chóng)卵結(jié)節(jié)數(shù)量減少,且纖維化程度為2級(jí);而APS+吡喹酮聯(lián)合用藥后(C組),與D組相比,小鼠肝組織纖維化程度明顯減輕(P0.05)。3.ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清的細(xì)胞因子結(jié)果表明:對(duì)于IL-12,E組血清IL-12水平為156.00±34.09pg/mL,D組血清IL-12水平為115.76±11.3pg/mL,A組血清IL-12水平為234.55±21.57 pg/mL,B組血清IL-12水平為243.66±18.69 pg/mL,C組血清IL-12水平為289.04±20.10pg/mL。與D組相比,A、B和C組的IL-12水平明顯升高(P0.01);而C組IL-12水平也顯著高于A組和B組(P0.01)。對(duì)于IFN-γ,E組血清IFN-γ水平為8.28±3.41 pg/mL,D組血清IFN-γ水平為21.87±7.48pg/mL,A組血清IFN-γ水平為60.40±11.45pg/mL,B組血清IFN-γ水平為55.08±11.21pg/mL,C組血清IFN-γ水平為66.21±11.57pg/mL。與D組相比,A、B和C組的IFN-γ水平明顯升高(P0.01);而C組IFN-γ水平也顯著高于B組(P0.05)。對(duì)于IL-5,D組血清IL-5水平為82.28±12.37pg/mL,A組血清IL-5水平為34.66±9.98 pg/mL,B組血清IL-5水平為33.05±8.23 pg/mL,C組血清IL-5水平為229.63±8.60pg/mL。與D組相比,A、B和C組的IL-5水平明顯降低(P0.01)。對(duì)于IL-13,E組血清IL-13水平為20.57 ±4.11 ng/L,D組血清IL-13水平為94.27± 9.76 ng/L,A組血清IL-13水平為61.88 ± 5.47 ng/L,B組血清IL-13水平為75.22 ±8.73 ng/L,C組血清IL-13水平為55.27±10.51 ng/L。與D組相比,A、B和C組的IL-13水平明顯降低(P0.01);而C組IL-13水平也顯著低于B組(P0.01)。4.ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清的酶含量結(jié)果表明:對(duì)于SOD,E組血清SOD水平為6.82±2.52ng/mL,D組血清SOD水平為7.13±2.16ng/mL,A組血清SOD水平為9.70±2.50ng/mL,B組血清SOD水平為8.53±2.67ng/mL,C組血清SOD水平為13.15±3.39ng/mL。與D組相比,C組的SOD水平明顯升高(P0.01);而C組SOD水平也顯著高于A組(P0.05)和B組(P0.01)。對(duì)于HA,E組血清HA水平為835.36±130.48 pg/mL,D組血清HA水平為1796.80±356.71pg/mL,A組血清HA水平為1347.2±134.67pg/mL,B組血清HA水平為1148.41±170.11pg/mL,C組血清HA水平為953.11±68.73pg/mL。與D組相比,A、B和C組的HA水平明顯降低(P0.01);而C組HA水平也顯著低于A組(P0.01)和B組(P0.05)。5.免疫組化檢測(cè)Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ型膠原蛋白表達(dá)的結(jié)果表明,對(duì)于Ⅰ型膠原蛋白,E組肝組織中未見(jiàn)表達(dá),D組肝組織中Ⅰ型膠原表達(dá)明顯增多,而A組和B組肝組織中的Ⅰ型膠原表達(dá)顯著低于D組(P0.01),但經(jīng)APS聯(lián)用吡喹酮聯(lián)合給藥后,Ⅰ型膠原表達(dá)明顯比A組、B組和D組減少(P0.01)。Ⅱ和Ⅳ型膠原蛋白的表達(dá)趨勢(shì)與Ⅰ型膠原表達(dá)相似。結(jié)論:PMP柱前衍生法檢測(cè)出APS1-1主要由葡萄糖組成,凝膠排阻法分析其分子質(zhì)量為11.7kDa。APS聯(lián)用吡喹酮組IL-12和IFN-γ水平明顯高于對(duì)照組,APS聯(lián)用吡喹酮組IL-5和IL-13水平明顯低于對(duì)照組,APS聯(lián)用吡喹酮組TH2型免疫反應(yīng)明顯偏向于TH1型免疫反應(yīng);Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)情況,APS組和吡喹酮組肝組織中的Ⅰ型膠原表達(dá)顯著低于對(duì)照組,但經(jīng)APS聯(lián)用吡喹酮給藥后,Ⅰ型膠原表達(dá)明顯比APS組、吡喹酮組和對(duì)照組減少,Ⅱ和Ⅳ型膠原蛋白的表達(dá)趨勢(shì)與Ⅰ型膠原表達(dá)相似。說(shuō)明APS聯(lián)用吡喹酮對(duì)血吸蟲(chóng)誘導(dǎo)的慢性肝纖維化具有明顯的抑制作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the structure of polysaccharide in rats and to explore its mechanism and its mechanism . Methods : 1 . The crude extract of APS was divided into five groups by DEAE - separation , then it was purified to obtain high - purity APS1 - 1 . The levels of IL - 12 in group A , B and C were significantly higher than those in group D ( P < 0.01 ) . The levels of IL - 12 in group A , B and C were significantly higher than those in group D ( P < 0.01 ) . The levels of IL - 12 in group A , B and C were significantly higher than those in group D ( P < 0.01 ) . Compared with group D , the levels of serum SOD in group A , group B and group C were significantly lower than those in group A ( P0.01 ) . The levels of serum SOD in group A , group B and group C were significantly lower than those in group A ( P0.01 ) .

【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R532.21;R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1762074