本文選題：肝炎病毒　切入點(diǎn)：乙型　出處：《實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志》2015年07期

【摘要】：目的:構(gòu)建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)中國(guó)株的1.3倍基因組長(zhǎng)度的感染性克隆質(zhì)粒,觀察質(zhì)粒在人肝癌細(xì)胞株Huh7中的表達(dá),建立中國(guó)株HBV體外研究細(xì)胞模型。方法:從乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,通過(guò)重疊延伸PCR技術(shù)(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)構(gòu)建HBV 1.3倍基因組長(zhǎng)度的感染性克隆質(zhì)粒p HBV1.3(C),將感染性克隆p HBV1.3(C)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株Huh7,采用Western Blot、ELISA及Real-time PCR檢測(cè)病毒復(fù)制及表達(dá)情況以及該感染性克隆對(duì)臨床抗病毒藥物阿德福韋的敏感性。結(jié)果:構(gòu)建了中國(guó)株HBV感染性克隆p HBV1.3(C)質(zhì)粒,該質(zhì)粒能在肝癌細(xì)胞株中進(jìn)行有效復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。阿德福韋能在體外抑制該HBV感染性克隆的復(fù)制。結(jié)論:構(gòu)建的中國(guó)株HBV 1.3倍基因組感染性克隆在體外具有高水平復(fù)制能力,其轉(zhuǎn)染細(xì)胞可望成為一種新型的HBV體外感染模型。
[Abstract]:Aim: to construct an infectious plasmid of 1. 3 times genomic length of hepatitis B virus (HBV) Chinese strain, observe the expression of the plasmid in human hepatoma cell line Huh7, and establish a Chinese HBV cell model in vitro.Methods: HBV DNA was extracted from the serum of hepatitis B patients. The infectious clone plasmid of HBV 1.3 times length was constructed by overlapping extension PCR technique splicing by overlap extension PCR-SOE-PCR. The plasmid was transfected into human hepatoma cell line.Huh7, Western blottl Elisa and Real-time PCR were used to detect the replication and expression of the virus and the sensitivity of the clone to the clinical antiviral drug adefovir.Results: the Chinese HBV infectious clone pHBV1.3 (C) plasmid was constructed, and the plasmid could be effectively duplicated, transcribed and expressed in hepatoma cell line.Adefovir can inhibit the replication of HBV infection clone in vitro.Conclusion: the 1.3-fold genomic infectious clone of Chinese strain HBV has high replication ability in vitro, and the transfected cells are expected to become a new model of HBV infection in vitro.
【作者單位】： 江蘇省南通市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;南通大學(xué)病原微生物教研室;
【基金】：南通市科技局資助項(xiàng)目(編號(hào):HS2013018,HS2014062) 南通市衛(wèi)生局資助項(xiàng)目(編號(hào):W201217,WQ2014038)
【分類(lèi)號(hào)】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1730166