發(fā)布時間：2018-04-09 09:12

  本文選題：人類免疫缺陷病毒　切入點(diǎn)：病毒儲存庫　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：艾滋病,又稱獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS),是人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的危害極大的感染性疾病。截止目前,全球仍有3900萬HIV感染者,占全球人口的5.4‰,是現(xiàn)代歷史上最嚴(yán)重的傳染性疾病之一。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)是目前對抗HIV感染的主要武器,能有效降低HIV感染者的病毒載量,延緩艾滋病發(fā)生,延長感染者壽命。但HAART不能使感染者免疫功能完全恢復(fù)正常,也不能徹底清除機(jī)體內(nèi)HIV病毒,停藥后病毒載量迅速反彈。研究表明,病毒控制人群的反彈病毒來自宿主體內(nèi)重新激活的病毒潛伏感染細(xì)胞�？蒲腥藛T早已證實(shí)了HIV潛伏感染細(xì)胞的存在；而且現(xiàn)有高效HAART治療也不能完全清除體內(nèi)HIV潛伏感染細(xì)胞。因此,HIV潛伏感染細(xì)胞被認(rèn)為是HIV感染治愈的主要障礙。為實(shí)現(xiàn)HIV感染的治愈,科研人員探索了多種HIV潛伏感染細(xì)胞的清除策略,如模擬“密西西比嬰兒”的早期治療策略,模擬“柏林病人”的骨髓移植策略,直接靶向病毒潛伏感染細(xì)胞的激活與清除策略以及增強(qiáng)機(jī)體抗病毒免疫的免疫抑制策略等,但上述策略的臨床效果及適用性均不夠理想；提示仍需要對病毒潛伏感染細(xì)胞及其影響因素進(jìn)行深入的研究,特別是尚未突破的幾個關(guān)鍵科學(xué)問題：一、艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞的體內(nèi)分布；二、抑制艾滋病毒反彈的關(guān)鍵因素。針對這兩關(guān)鍵科學(xué)問題,本研究通過基于流式細(xì)胞術(shù)的病毒潛伏感染細(xì)胞檢測策略的建立,檢測艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞的體內(nèi)分布；同時,探尋艾滋病毒自然抑制模型中病毒有效控制的關(guān)鍵因素,深入研究艾滋病毒儲存庫分布和抑制的關(guān)鍵機(jī)制,為HIV感染的治療策略研發(fā)提供研究思路與理論依據(jù)。第一部分艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞的體內(nèi)分布研究清除艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞的首要任務(wù)是確定該細(xì)胞在體內(nèi)分布情況。鑒于艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞生物學(xué)上的特殊性,本研究首先建立了一種新型的艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞的檢測策略。通過比較SIV p27/gp41抗體細(xì)胞表面染色和SmartFlare技術(shù)在艾滋病毒復(fù)制陰性細(xì)胞分選中的優(yōu)劣,比較CD3/CD28免疫磁珠、LPS與PHA在免疫細(xì)胞激活的差別,比較SIV p27抗體細(xì)胞內(nèi)染色法和FlowRNA技術(shù)在病毒潛伏感染細(xì)胞分析中的優(yōu)缺點(diǎn)；分別選擇SmartFlare技術(shù)、CD3/CD28免疫磁珠/LPS和FlowRNA技術(shù)用于后續(xù)研究,同時優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,建立基于流式細(xì)胞術(shù)的艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞檢測策略(FlowVLIC).比較發(fā)現(xiàn)該檢測策略檢測的病毒潛伏感染細(xì)胞規(guī)模位于QVOA法和前病毒DNA-PCR法的檢測結(jié)果之間,更符合艾滋病毒儲存庫的理論規(guī)模。之后,本研究使用該檢測策略檢了RT-SHIV恒河猴病毒抑制模型病毒潛伏感染細(xì)胞的組織、細(xì)胞分布,發(fā)現(xiàn)其病毒潛伏感染細(xì)胞主要分布于淋巴組織、腸道黏膜等部位,細(xì)胞類型以記憶性CD4+細(xì)胞為主。進(jìn)一步,本研究還分析了不同部位、不同細(xì)胞來源潛伏病毒env、rt基因序列,發(fā)現(xiàn)潛伏病毒的整合位點(diǎn)與細(xì)胞類型存在一定的相關(guān)性,需進(jìn)行更深入的機(jī)制研究。本研究首次初步確定了艾滋病毒潛伏感染細(xì)胞在非人靈長類動物模型體內(nèi)的組織、細(xì)胞分布。第二部分艾滋病毒自然抑制的關(guān)鍵因素研究為達(dá)到HIV功能性治愈,即在不施以抗病毒治療的前提下,機(jī)體也能有效的控制機(jī)體內(nèi)的病毒復(fù)制,探尋病毒抑制的關(guān)鍵因素至關(guān)重要。本實(shí)驗(yàn)室前期使用SIV、SHIV病毒小劑量多次黏膜接種恒河猴,可高效誘導(dǎo)病毒自然抑制現(xiàn)象,類似于臨床的精英控制者,但其原因未知。本研究首先通過猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)病毒小劑量多次直腸接種恒河猴建立病毒自然抑制模型,同時設(shè)立正常對照組,然后從細(xì)胞免疫、體液免疫和固有免疫等多個角度探尋病毒抑制的免疫機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)病毒抑制動物的細(xì)胞免疫和體液免疫未見明顯升高,甚至低于正常對照組；但兩組動物固有免疫反應(yīng)存在明顯的差異,病毒抑制組高于正常對照組,提示固有免疫反應(yīng)在病毒自然抑制現(xiàn)象中發(fā)揮一定的作用。此外,本研究還探尋了病毒靶細(xì)胞和固有抗病毒因子在該現(xiàn)象中發(fā)揮的作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組動物不同組織的靶細(xì)胞數(shù)量和固有抗病毒因子表達(dá)和變異上沒有明顯差異。最后,本研究從感染病毒角度進(jìn)行了探索,通過SGA方法獲得了模型感染的奠基者(T/F)病毒,分析T/F病毒數(shù)量和適應(yīng)性,發(fā)現(xiàn)病毒抑制動物的T/F病毒數(shù)量顯著少于正常對照動物,而且感染病毒適應(yīng)性也明顯弱于正常對照動物�；谏鲜鼋Y(jié)果,提示機(jī)體的固有免疫反應(yīng)和感染病毒特性在艾滋病毒自然抑制方面具有重要影響,后續(xù)在HIV感染治愈策略研究中需要考慮這些因素。綜上所述,本研究通過建立基于流式細(xì)胞術(shù)的病毒潛伏感染細(xì)胞檢測策略,確定了恒河猴模型體內(nèi)的病毒潛伏感染細(xì)胞分布：建立的檢測方法也可用于后續(xù)HIV感染治療策略的有效性評價中；此外,本研究從細(xì)胞免疫、體液免疫、固有免疫、病毒靶細(xì)胞及病毒適應(yīng)性等角度探尋艾滋病毒自然抑制模型體內(nèi)病毒有效控制的關(guān)鍵因素。本研究深入探尋了病毒儲存細(xì)胞體內(nèi)分布、病毒反彈抑制的機(jī)制,為研發(fā)HIV感染的治療策略提供研究思路與理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R512.91

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本文編號：1725781