發(fā)布時間：2018-04-04 02:15

  本文選題：慢性乙型肝炎　切入點(diǎn)：肝硬化　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的：文獻(xiàn)報道骨髓干細(xì)胞具有橫向分化的能力,體外誘導(dǎo)可定向分化為心肌細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞和肝樣細(xì)胞。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)骨髓干細(xì)胞可以征體內(nèi)橫向分化為肝細(xì)胞,但這種橫向分化作用并不是由骨髓干細(xì)胞直接分化為肝細(xì)胞,而是在肝組織中通過與肝細(xì)胞的融合作用來實(shí)現(xiàn)的。已有研究證明,CD34和CD133是骨髓干細(xì)胞的標(biāo)記分子。國內(nèi)學(xué)者曾將CD34陽性的臍帶血細(xì)胞誘導(dǎo)成為肝樣細(xì)胞。核苷類藥物抗乙肝病毒治療已經(jīng)使乙肝肝硬化不可逆轉(zhuǎn)的概念成為過去,大量研究證實(shí)核苷類抗病毒藥物治療能夠降低乙肝相關(guān)性肝癌發(fā)生的風(fēng)險,其誘導(dǎo)肝纖維化和肝硬化逆轉(zhuǎn),減少肝癌發(fā)生的機(jī)制尚不清楚。肝星狀細(xì)胞與纖維母細(xì)胞是肝纖維化發(fā)生的效應(yīng)細(xì)胞,肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的再生依賴于肝細(xì)胞和肝干細(xì)胞,而研究者發(fā)現(xiàn)肝癌的發(fā)生則與肝癌干細(xì)胞緊密相關(guān)。促進(jìn)干細(xì)胞向目的細(xì)胞分化已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)工作者治療肝炎肝硬化甚至于肝癌的新思路。有研究發(fā)現(xiàn)抗腫瘤細(xì)胞核苷類似物5-氮雜-2’-脫氧胞嘧啶核苷(5-AZA)可以將將大鼠肝干細(xì)胞WB細(xì)胞誘導(dǎo)為具有產(chǎn)胰島素功能的細(xì)胞,基于此研究,與5-AZA具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)的抗乙肝病毒核苷類藥物,是否具有相同的作用?本研究旨在探究抗乙型肝炎病毒核苷類藥物在治療慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化以及乙肝相關(guān)性肝癌過程中是否可以影響患者體內(nèi)的CD34陽性和CD133陽性的骨髓干細(xì)胞,為核苷類抗病毒藥物治療慢性乙型肝炎、肝硬化以及乙肝相關(guān)性肝癌發(fā)生的可能機(jī)制提供新的思路。方法：1.以相應(yīng)入組標(biāo)準(zhǔn)以及實(shí)驗需要的排除標(biāo)準(zhǔn)確立實(shí)驗研究對象：慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化以及原發(fā)性肝癌患者394例,招募健康志愿者12例,實(shí)驗分為7組： 1)慢性乙型肝炎未抗病毒治療組83例；2)慢性乙型肝炎抗病毒治療組64例；3)乙肝肝硬化未抗病毒治療組67例；4)乙肝肝硬化抗病毒治療組78例；5)原發(fā)性乙肝相關(guān)性肝癌未抗毒治療組49例；6)原發(fā)性乙肝相關(guān)性肝癌抗病毒治療組53例；7)健康志愿者。抗病毒治療組均為持續(xù)規(guī)律服用核苷類抗HBV藥物2年以上者。 2.收集患者以及健康志愿者外周血單個核細(xì)胞(PBMC),采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測其PBMC中CD34、CD133日性細(xì)胞百分比。3.提取部分慢性乙型肝炎及肝硬化的肝臟組織中的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR (Real-Time PCR)檢測慢乙肝、肝硬化患者以及健康志愿者CD34、CD133mRNA的表達(dá)。4.采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測部分慢性乙型肝炎、肝硬化以及肝癌的石蠟病理切片樣本中CD34、CD133的表達(dá)。5.分別測定并分析健康對照組、慢性乙型肝炎組、乙肝肝硬化、肝癌組的血清學(xué)標(biāo)志分子,包括：ALT、AST、ALB、HbsAg、HbeAg、HBeAb、HBVDNA以及免疫學(xué)指標(biāo)CD4、CD8的絕對值與百分比。單獨(dú)檢測肝癌患者AFP的指標(biāo)。結(jié)果：1.服用核苷類抗病毒藥物的慢乙肝、肝硬化和肝癌患者臨床肝功能指標(biāo)與未抗病毒組相比較均有不同程度的改善,慢乙肝、肝硬化、肝癌服用核苷類抗病毒治療組與未抗病毒組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)CD4、CD8細(xì)胞的絕對值和百分比沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；2.慢乙肝、肝硬化服用核昔類抗病毒治療組和未抗病毒組患者的PBMC兩組間CD34存在統(tǒng)計學(xué)意義的差異,且服藥組CD34的表達(dá)大于未服藥組(P0.05,P0.01),肝癌組中的結(jié)果與之相反,服藥組CD34的表達(dá)要低于未服藥組(P0.01);慢性乙型肝炎服用核苷類抗病毒治療組和未抗病毒組問CD133未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)意義的差異(P0.05),肝硬化以及肝癌服用核苷類抗病毒治療組CD133的表達(dá)明顯低于未抗病毒組(P0.01)。經(jīng)過ANONA分析,健康對照組與HBV感染的患者CD34和CD133的表達(dá)有明顯差異(P0.001)。3.熒光定量PCR顯示,慢性乙型肝炎未抗病毒組CD34mRNA的相對表達(dá)量明顯低于服用核苷類抗病毒治療組(P0.01),肝硬化服用核苷類藥物抗病毒治療組與未抗病毒組相比,CD34mRNA的表達(dá)量明顯升高(P0.01)。4.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,慢性乙型肝炎以及肝硬化服用核苷類抗病毒治療組CD34指數(shù)均比未服用抗病毒藥物的組CD34指數(shù)高(P0.05,P0.01),而肝癌服用抗病毒組的CD34指數(shù)降低(P0.01),服用核苷類抗病毒藥物的肝硬化患者CD133陽性率呈現(xiàn)出一種下降的趨勢(P0.05),肝癌則呈現(xiàn)明顯的下降(P0.01),慢乙肝組肝臟組織中CD133的表達(dá)沒有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)的意義(P0.05)。結(jié)論：1.與健康志愿者相比,慢性乙型肝炎病毒相關(guān)性疾病患者外周血CD34以及CD133陽性細(xì)胞的表達(dá)明顯升高,表明肝臟組織炎癥及肝細(xì)胞的壞死與修復(fù)過程中骨髓干細(xì)胞被動員,產(chǎn)生和釋放增加。2.核苷類抗乙型肝炎病毒藥物能夠促進(jìn)慢性乙型肝炎以及肝硬化患者體內(nèi)骨髓干細(xì)胞產(chǎn)生及向外周血釋放。3.由服用核苷類抗HBV治療組與未服用核苷類抗HBV治療組之間CD4、CD8水平無顯著性差異,表明在機(jī)體的免疫功能相似的情況下,核苷類抗病毒藥物通過抑制病毒和對肝干細(xì)胞的影響,促進(jìn)肝功能的恢復(fù)。4.CD34陽性的細(xì)胞與肝功能修復(fù)相關(guān),而CD133的表達(dá)則與肝癌的發(fā)生相關(guān)。5.CD34陽性的細(xì)胞可能促進(jìn)肝臟內(nèi)血管的生成,參與肝細(xì)胞的再生。6.服用核苷類抗病毒藥物治療的HBV相關(guān)性肝癌發(fā)病危險降低,可能與核苷類抗病毒藥物降低肝癌干細(xì)胞標(biāo)記CD133的表達(dá)有關(guān)。7.核苷類抗病毒藥物可能通過抑制肝癌干細(xì)胞的發(fā)生從而間接下調(diào)了肝癌腫瘤組織內(nèi)血管的生成。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : The study shows that bone marrow stem cells can be differentiated into liver cells in vitro . It has been shown that CD34 and CD133 are the marker molecules of bone marrow stem cells .
( 2 ) 64 patients with chronic hepatitis B virus ;
3 ) 67 patients with hepatitis B cirrhosis without antiviral treatment ;
4 ) 78 cases of hepatitis B cirrhosis antiviral treatment group ;
5 ) 49 cases of primary hepatitis B - related liver cancer ;
6 ) 53 cases of primary hepatitis B related liver cancer antiviral treatment group ;
The expression of CD34 and CD133 mRNA in patients with chronic hepatitis B , liver cirrhosis and liver cirrhosis were measured by flow cytometry .
Results : Compared with healthy volunteers , the expression of CD34 and CD133 in patients with chronic hepatitis B and cirrhosis were significantly lower than those in the untreated group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.2;R512.62;R735.7

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1707925