本文選題：弓形蟲(chóng)　切入點(diǎn)：血清陽(yáng)性率　出處：《吉林大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：弓形蟲(chóng)是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(chóng)，其宿主范圍極為廣泛，可引起人畜共患寄生蟲(chóng)病，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球約有三分之一人口感染弓形蟲(chóng)，各地流行情況從10~70%不等，并且溫暖潮濕地區(qū)的流行率較其他地區(qū)稍高。在不同地區(qū)，弓形蟲(chóng)還表現(xiàn)出明顯的遺傳多樣性，亦有報(bào)道證實(shí)在我國(guó)同樣存在高度的弓形蟲(chóng)基因多樣性，，中國(guó)人實(shí)際的弓形蟲(chóng)感染狀況遠(yuǎn)比想象中更復(fù)雜，而且弓形蟲(chóng)抗原存在多源性、期特異性、株特異性及變異性等特點(diǎn)，所以，同時(shí)結(jié)合多種敏感有效抗原進(jìn)行感染診斷及流行病學(xué)調(diào)查就顯得十分必要。目前，弓形體病的診斷主要通過(guò)檢測(cè)血清樣本中特異性IgG和IgM抗體，而絕大多數(shù)商業(yè)試劑盒所采用的都是從弓形蟲(chóng)速殖子分離得到的全蟲(chóng)可溶性抗原，由于抗原制備質(zhì)量的差異，很可能影響檢測(cè)結(jié)果的可靠性。而重組抗原具有均質(zhì)穩(wěn)定、方便易得的特點(diǎn)，有望作為一種新型診斷制劑，但其可靠性仍需要大量研究來(lái)證實(shí)。另外，弓形蟲(chóng)在免疫正常者體內(nèi)常以緩殖子的休眠狀態(tài)存在，當(dāng)宿主免疫系統(tǒng)受損時(shí)，緩殖子可轉(zhuǎn)換成迅速繁殖的速殖子，速殖子和緩殖子展現(xiàn)不同的抗原全貌，因而如果將強(qiáng)毒株抗原、弱毒株抗原、緩殖子期抗原與速殖子期抗原聯(lián)合起來(lái)用于弓形蟲(chóng)病診斷，則可以更全面、更準(zhǔn)確地反映人群弓形蟲(chóng)感染情況，并且這對(duì)尋求弓形蟲(chóng)生活史各階段的診斷抗原以及開(kāi)發(fā)研制診斷試劑和疫苗都有重要意義。 本研究首先利用基因工程技術(shù)構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，通過(guò)親和層析方法純化得到12種重組抗原，分別為SAG1-His、SRS4-His、BAG1-His、SRS8-His、SUS1-His、GRA5-His、SRS9-His、SAG3-His、MIC6-GST、SAG5D-GST、BSR4-GST和SAG5D-GST，經(jīng)SDS-PAGE和Western blot鑒定，所有蛋白質(zhì)分子量均符合預(yù)期大小且純度達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。并且可與弓形蟲(chóng)感染大鼠高免血清以及弓形蟲(chóng)感染人血清作用，表明其對(duì)血清的識(shí)別能力較強(qiáng)，其次，以純化的重組蛋白質(zhì)作為包被抗原對(duì)880份健康人血清樣本進(jìn)行間接ELISA檢測(cè)，通過(guò)對(duì)每種重組抗原單獨(dú)的血清陽(yáng)性率、來(lái)源于不同蟲(chóng)株和不同發(fā)育階段抗原的陽(yáng)性率以及檢測(cè)結(jié)果間的交叉情況進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，陽(yáng)性血清總計(jì)248例，各抗原總陽(yáng)性率28.2%；這比以往國(guó)內(nèi)外所報(bào)道的弓形蟲(chóng)感染率都高。另外，在共計(jì)248例陽(yáng)性反應(yīng)的樣本中，三類重組抗原檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果之間存在很高的一致性。顯然，這是因?yàn)槲覀兯褂玫目乖瓰閺?qiáng)毒株、弱毒株抗原聯(lián)合速殖子、緩殖子抗原，而以往流行病學(xué)調(diào)查中，大部分所使用的抗原都是來(lái)源于國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株RH株的全蟲(chóng)裂解抗原，又或者是本地分離株產(chǎn)生的抗原。盡管弓形蟲(chóng)只有一個(gè)種即剛地種，但有報(bào)道稱不同國(guó)家地區(qū)都有不同的弓形蟲(chóng)分離株，而且各分離株的生理生化特性和對(duì)宿主的免疫應(yīng)答反應(yīng)都有很大差別。目前使用的多數(shù)檢測(cè)方法所能覆蓋的范圍要比估計(jì)的小，所以采用一種更敏感更特異的免疫學(xué)方法對(duì)弓形蟲(chóng)不同蟲(chóng)株進(jìn)行檢測(cè)十分必要。 另一方面，最新研究表明Mindin是一種高度保守的分泌型細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)蛋白，在先天性免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵作用，可作為一種模式識(shí)別分子參與天然免疫，加強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)病原體的識(shí)別清除作用。它還可發(fā)揮調(diào)理素的功能，介導(dǎo)巨噬細(xì)胞對(duì)病原微生物的吞噬作用，啟動(dòng)內(nèi)源性免疫應(yīng)答抵御細(xì)菌和病毒。鑒于Mindin在識(shí)別病原體微生物方面的這種特殊作用，能有效地結(jié)合病原體并協(xié)助巨噬細(xì)胞將其清除，通過(guò)炎性反應(yīng)和非特異性增強(qiáng)反應(yīng)，激活免疫活性細(xì)胞，因而其有望作為一類新型免疫增強(qiáng)劑分子用于抗感染免疫和臨床研究。在本研究中，我們選取在血清IgG抗體檢測(cè)中陽(yáng)性率較高的3種重組抗原rBAG1、rSRS4和rSRS9，分別與弗氏佐劑、Mindin和PBS混合免疫接種Balb/c小鼠，通過(guò)分析不同佐劑組所誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答反應(yīng)、抗體動(dòng)態(tài)變化、淋巴細(xì)胞增殖情況及攻蟲(chóng)后小鼠的存活情況，探討其對(duì)小鼠的免疫保護(hù)效果以及Mindin作為一種新型生物源性佐劑的增強(qiáng)效果。結(jié)果顯示，與PBS對(duì)照組相比，弗氏佐劑與Mindin免疫組小鼠均產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，而且三種抗原的特異性抗體均保持較高水平，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)；抗體亞型分析顯示弗氏佐劑主要以Th1型反應(yīng)為主，而Mindin卻是誘導(dǎo)混合型Th1/Th2反應(yīng)。淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示弗氏佐劑組、Mindin佐劑組都具有較高的刺激指數(shù)和增長(zhǎng)指數(shù)。另外，三種抗原也有望作為弓形蟲(chóng)疫苗候選抗原進(jìn)行深入研究。目前，聯(lián)合疫苗在免疫預(yù)防中已成為一個(gè)十分有前景的疫苗研究方向，如若能將弓形蟲(chóng)強(qiáng)/弱毒株、速/緩殖子期的抗原聯(lián)合用于免疫保護(hù)研究，則可能對(duì)宿主產(chǎn)生更好的保護(hù)效果。
[Abstract]:Toxoplasma gondii is a kind of specific intracellular parasite , its host range is very wide , it can cause parasitic diseases of human and livestock . The infection diagnosis and epidemiological investigation of toxoplasmosis are more complicated .

In this study , the recombinant expression plasmid was constructed by using genetic engineering technique , and 12 kinds of recombinant antigens were purified by affinity chromatography . The results showed that all the molecular weights of SAG1 - His , SRS4 - His , BSR4 - His , GRA5 - His , SRS9 - His , SAG3 - His , MIC6 - GST , SRS9 - His , SAG3 - His , MIC6 - GST , SAG5D - GST , BSR4 - GST and SAG5D - GST were determined by SDS - PAGE and Western blot .
In addition , there is a high degree of consistency between the positive results of three types of recombinant antigens in a total of 248 positive reactions . It is clear that most of the antigens used are the virulent strains , the weak strain antigen , the tachyzoite and the slow zoite antigen . In the past epidemiological investigation , most of the antigens used are different from the standard virulent strains of RH strain . However , most of the antigens used in the previous epidemiological investigation have different physiological and biochemical characteristics and immune response to the host .

In this study , we have selected three recombinant antigens rB1 , rSRS4 and rSRS9 which are highly conserved and play a key role in innate immune response .
In addition , three antigens are expected to be used as vaccine candidate antigens for toxoplasmosis . In addition , three antigens are expected to be used as candidate antigens for toxoplasmosis .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R531.8

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1681132