本文選題：結(jié)核分枝桿菌　切入點：高分辨率熔解曲線(HRM)　出處：《中國人獸共患病學(xué)報》2017年05期

【摘要】：目的評價高分辨率熔解曲線分析技術(shù)(high-resolution melting curve,HRM)檢測結(jié)核分枝桿菌異煙肼耐藥性的應(yīng)用價值。方法 1)通過傳統(tǒng)比例法藥敏實驗對本實驗室保存的49株結(jié)核分枝桿菌進行異煙肼耐藥性分析。2)進一步對該結(jié)核分枝桿菌進行異煙肼耐藥相關(guān)基因KatG基因和inhA基因進行異煙肼耐藥決定區(qū)測序分析,篩查突變位點。3)根據(jù)篩查到的突變位點設(shè)計高分辨率熔解曲線分析所用的特異性引物,對異煙肼耐藥基因耐藥決定區(qū)進行高分辨率熔解曲線分析檢測DNA突變,評估用高分辨率熔解曲線分析技術(shù)對結(jié)核分枝桿菌異煙肼耐藥性檢測的效率。結(jié)果 1)比例法藥敏結(jié)果顯示,49株實驗菌株中20株為異煙肼耐藥株,29株為異煙肼敏感株。2)測序分析結(jié)果顯示:(1)KatG基因出現(xiàn)了4種突變形式,分別是234單位點突變;234、315雙位點突變;234、463雙位點突變;234、315、463三位點聯(lián)合突變。(2)inhA基因檢測到3種突變,即-8位、-15位、-152位。3)(1)對耐藥株的基因突變進行分析發(fā)現(xiàn):20株異煙肼耐藥株中11株存在KatG基因第315位密碼子的突變、占異煙肼耐藥株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位堿基、-8(1株)位堿基、-152(1株)位堿基的突變,共占異煙肼耐藥株的30%;2株同時存在基因KatG315密碼子和inhA-15位堿基的突變,占異煙肼耐藥株的10%;1株均未檢測到KatG基因和inhA基因的突變,占異煙肼耐藥株的5%。通過基因突變檢測結(jié)核分枝桿菌異煙肼耐藥性的敏感性為95%、特異性為100%。(2)用高分辨率溶解曲線檢測實驗菌株耐藥基因突變的結(jié)果顯示,18株存在基因突變,24株不存在基因突變,檢測的靈敏度為94.7%、特異性為80%。(3)以高分辨率熔解曲線檢測到突變?yōu)槟退幍呐袛鄻藴?檢出19株為耐藥株,24株為敏感株。以比例法藥敏結(jié)果為參照,檢測的靈敏度為95%、特異性為82.76%。結(jié)論高分辨率溶解曲線用于結(jié)核分枝桿菌對異煙肼耐藥性的檢測具有較好的靈敏度,耗時短,在異煙肼耐藥結(jié)核病的快速診斷方面具有一定的應(yīng)用價值。
[Abstract]:Objective to evaluate the value of high-resolution melting curved-HRM in the detection of isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis. Methods 1) 49 strains of Mycobacterium tuberculosis preserved in our laboratory were tested by traditional proportional susceptibility assay. Further analysis of isoniazid resistance-related gene KatG gene and inhA gene was carried out by isoniazid resistance analysis. 2) the sequence analysis of isoniazid resistance determining region was carried out for Mycobacterium tuberculosis. Screening mutation locus. 3) according to the specific primers designed for high resolution fusion curve analysis, the DNA mutation was detected by high resolution melting curve analysis of isoniazid resistance gene. To evaluate the efficiency of high resolution fusion curve analysis in the detection of isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis. Results 1) the results of proportional drug sensitivity analysis showed that 20 of 49 experimental strains were isoniazid resistant and 29 were isoniazid. The sequence analysis of the susceptible strain. 2) showed that there were four mutations in the KatG gene. The 234315 double locus mutation and 234315463 triple locus combined mutation of 234315463 were identified as 234315463 and 234315463 / 234315463 / 234315463 / 234315463 / 234315463 / 234315463 respectively. The gene mutation of resistant strains was analyzed. It was found that 11 of 20 isoniazid resistant strains had codon 315 mutation of KatG gene. Among the isoniazid resistant strains, there were mutations of inhA codon and inhA-15 codon in 55 / 6 strains of isoniazid resistant strains (1 strain) and 1 strain (1 strain) at the base of 1 strain). In total, 30g / 2 strains of isoniazid resistance strains had mutations in the codon of KatG315 and the mutation of the inhA-15 site base at the same time, and there was no mutation in the nucleotide sequence of KatG315 codon and inhA-15 locus in the 6 strains of isoniazid resistance. No mutation of KatG gene or inhA gene was detected in 10 strains of isoniazid resistant strain. The sensitivity and specificity of detection of isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis by gene mutation were 95 and 100% respectively. There was no gene mutation in 24 strains. The sensitivity of detection was 94.7 and the specificity was 80%.) according to the criteria of high resolution melting curve to detect mutation as drug resistance, 19 strains were identified as resistant strains and 24 strains as sensitive strains, and the results were compared with the results of proportional method. The sensitivity of detection is 95 and the specificity is 82.76.Conclusion the high resolution dissolution curve has good sensitivity and short time for the detection of isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis. It has certain application value in fast diagnosis of isoniazid-resistant tuberculosis.
【作者單位】： 石河子大學(xué)動物科技學(xué)院;石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：“十二五”國家科技重大專項(No.2013ZX10003003-002) 國家自然科學(xué)基金項目(No.31060333)~~
【分類號】：R440;R52

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7 劉e，

本文編號：1670120