本文選題：流感病毒H1N1　切入點(diǎn)：雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)　出處：《黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：極具感染性的流感病毒,尤其是甲型流感病毒,會(huì)引發(fā)全球范圍內(nèi)流感大規(guī)模爆發(fā),造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,長(zhǎng)期威脅人類與動(dòng)物健康安全。因此快速、準(zhǔn)確地對(duì)流感病毒檢測(cè)是防控流感疫情的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)流感病毒快速、方便的檢測(cè),我們建立了三種流感病毒H1N1的可視化檢測(cè)方法。本研究基于雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Hybridization Chain Reaction,HCR)核酸擴(kuò)增技術(shù)結(jié)合膠體金核酸試紙條信號(hào)輸出方式,實(shí)現(xiàn)對(duì)流感病毒H1N1簡(jiǎn)便、快速的可視化檢測(cè)。具體如下:1利用HCR信號(hào)放大技術(shù)結(jié)合膠體金核酸試紙條,建立對(duì)流感病毒H1N1可視化檢測(cè)方法。針對(duì)H1N1的特異性核酸片段設(shè)計(jì)了標(biāo)記6-羧基熒光素(FAM)的抓取探針CP與檢測(cè)探針DP,當(dāng)有H1N1 RNA存在時(shí),會(huì)形成標(biāo)記生物素(Biotin)的HCR產(chǎn)物與標(biāo)記FAM-CP的核酸復(fù)合產(chǎn)物,結(jié)合試紙條加樣檢測(cè),會(huì)被檢測(cè)線上的anti-FAM抓住,并通過鏈霉親和素(SA)與生物素(Biotin)之間的特異性親和力,將包被鏈霉親和素(SA)的紅色膠體金粒子(Au NPs)固定到檢測(cè)線上,顯示出紅色條帶,實(shí)現(xiàn)對(duì)H1N1的可視化檢測(cè),可達(dá)到2.96 p M的檢測(cè)限。2分子信標(biāo)(Molecular beacons,MBs)核酸探針技術(shù)與HCR信號(hào)放大技術(shù)結(jié)合,實(shí)現(xiàn)信號(hào)雙重放大。當(dāng)存在檢測(cè)靶標(biāo)H1N1 RNA時(shí),H1N1 RNA會(huì)與MBs結(jié)合,使MBs構(gòu)象發(fā)生改變,進(jìn)而引發(fā)兩段輔助探針Helper A、Helper B與MBs雜交,形成新的DNA雙鏈,將靶標(biāo)H1N1替換下來,H1N1 RNA循環(huán)結(jié)合其他MBs,實(shí)現(xiàn)信號(hào)一重放大。暴露出的MBs莖部設(shè)計(jì)有與檢測(cè)探針DP的互補(bǔ)序列,能夠與標(biāo)記Biotin的HCR產(chǎn)物有效結(jié)合,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)信號(hào)的再次放大。結(jié)合試紙條傳感器實(shí)現(xiàn)流感病毒H1N1的可視化檢測(cè),可達(dá)到21.9 f M的檢測(cè)限。3將雙鏈特異性核酸酶(DSN)與HCR信號(hào)放大技術(shù)相結(jié)合,設(shè)計(jì)了同時(shí)標(biāo)記生物素(Biotin)與6-羧基熒光素(FAM)的抓取探針CP,當(dāng)存在H1N1 RNA時(shí),CP與H1N1 RNA形成雜交雙鏈,由于DSN酶的特性,酶切DNA-RNA雜合雙鏈中的互補(bǔ)DNA,RNA可以循環(huán)利用,結(jié)合其他CP,實(shí)現(xiàn)信號(hào)一重放大。由CP釋放出的DNA短鏈與標(biāo)記Biotin的H1、H2引發(fā)HCR反應(yīng),實(shí)現(xiàn)信號(hào)雙重放大。結(jié)合試紙條傳感器實(shí)現(xiàn)流感病毒H1N1的可視化檢測(cè),可達(dá)到3.12 f M的檢測(cè)限。綜上所述,本研究建立的三種對(duì)流感病毒H1N1的可視化檢測(cè)方法,能夠?qū)崿F(xiàn)方便、快速的靶標(biāo)檢測(cè),節(jié)省檢測(cè)時(shí)間與成本,對(duì)流感病毒的基層大規(guī)模篩檢與疫情防控具有應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:Highly infectious influenza viruses, especially influenza A viruses, can cause large-scale outbreaks of influenza worldwide, causing huge economic losses and long-term threats to human and animal health and safety. Accurate detection of influenza viruses is a key link in the prevention and control of influenza outbreaks. In order to achieve rapid and convenient detection of influenza viruses, We have established three visual detection methods for influenza virus H1N1. This study is based on hybrid chain reaction (hybridization Chain reaction) nucleic acid amplification technique combined with the method of colloidal gold nucleic acid test strip signal output to realize a simple and convenient method for influenza virus H1N1. Rapid visual detection. Specific as follows: 1 using HCR signal amplification technology combined with colloidal gold nucleic acid test paper, A visual detection method for influenza virus H1N1 was established. The grab probe CP and the detection probe DPDP RNA were designed for the specific nucleic acid fragment of H1N1. When there was H1N1 RNA, the grab probe CP and the detection probe were designed. The HCR product labeled biotinin and the nucleic acid compound product labeled FAM-CP, combined with the test strip to add sample detection, will be caught by the anti-FAM on the detection line, and the specific affinity between the HCR product and biotinin can be obtained by using streptavidin) and biotinin. The red colloidal gold particle (au NPs) coated with streptavidin (SAA) was immobilized on the detection line, and the red band was displayed to realize the visual detection of H1N1. The detection limit of 2.96 pm can be achieved by combining the molecular beaconsm nucleic acid probe technique with the HCR signal amplification technique to realize the double amplification of the signal. When the detection target H1N1 RNA exists, the H 1 N 1 RNA will combine with the MBs, and the conformation of MBs will change. Then the two-segment auxiliary probe Helper Agna Helper B was hybridized with MBs to form a new double strand of DNA. The target H1N1 was replaced by the H1N1 RNA cycle and combined with other MBs to realize signal amplification. The exposed stem of MBs was designed with complementary sequence to detect the probe DP. It can effectively combine with the HCR products labeled with Biotin, and then realize the signal re-amplification. In combination with the test strip sensor, the visual detection of influenza virus H1N1 can be realized. The detection limit of 21.9 FM can be reached by combining double-strand specific nuclease (DSNs) with HCR signal amplification technique. A grab probe, CP-labeled biotinin) and 6-carboxyfluorescein (FAM), was designed. When there was H1N1 RNA, CP and H1N1 RNA formed hybrid double strands. Because of the characteristic of DSN enzyme, the complementary DNA-RNA RNA in the DNA-RNA heterozygous double strand can be recycled and combined with other CPs to amplify the signal. The short DNA strand released by CP induces HCR reaction with the labeled Biotin H _ (1) O _ (2). Realize double amplification of signal. Realize the visual detection of influenza virus H1N1 with test strip sensor, can reach the detection limit of 3.12 FM. To sum up, the three visual detection methods of influenza virus H1N1 established in this study can be realized conveniently. Rapid target detection saves detection time and cost and is valuable for mass screening of influenza virus and prevention and control of influenza virus.
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R440;R511.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;什么方式可以殺滅甲型H1N1流感病毒?[J];中華疾病控制雜志;2009年03期

2 ;為什么“豬流感病毒”改稱甲型H1N1流感病毒?[J];中華疾病控制雜志;2009年03期

3 高峰;;甲型H1N1流感病毒大流行的預(yù)防應(yīng)重視兒童及中青年患者[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版);2009年07期

4 李皓;;流感病毒與防控措施[J];科技潮;2009年12期

5 魏成軍;江新泉;高佩安;;甲型H1N1流感病毒特征及快速檢驗(yàn)方法[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2011年04期

6 陳慧英;;流感病毒將可“定位追蹤”[J];瀘州科技;2013年03期

7 苗鳳源;;經(jīng)鼻接種A型流感病毒對(duì)鼷鼠嗅粘膜的影響[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè);1987年02期

8 劉美琴,白小平,樊陜生,肖和宇;B型流感病毒流感22例報(bào)告(摘要)[J];臨床兒科雜志;1988年06期

9 郝莉萍;于樹芬;俞秀廉;齊云華;;荊、防、柴、菊抑制流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究[J];人民軍醫(yī);1992年11期

10 鄭賓;鐘江;;禽流感蔓延給人類敲響警鐘[J];科學(xué)生活;2005年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 伍銳;段正贏;劉澤文;楊克禮;梁望旺;鄧均華;周丹娜;田永祥;;A型流感病毒為載體的開發(fā)及其應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 杜雄偉;李葉;楊卓;;A型流感病毒對(duì)小鼠致病機(jī)制的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

3 曲敬來;;流感病毒A上呼吸道感染快速診治的研究[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國(guó)中醫(yī)藥防治感染病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];2009年

4 高福;;流感病毒侵入與多肽抑制藥物[A];第二屆傳染病診治高峰論壇暨2009年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

5 楊琴;張興曉;楊靈芝;郭慶棟;;流感病毒在三種細(xì)胞中的生長(zhǎng)對(duì)比[A];山東畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)專業(yè)委員會(huì)第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 袁達(dá)康;黃勇;楊華可;黎景全;李艷芬;;東莞市2004-2008年流感病毒監(jiān)測(cè)結(jié)果及分析[A];新發(fā)傳染病防治學(xué)習(xí)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 高玉偉;夏咸柱;扈榮良;王立剛;劉丹;鄒嘯環(huán);黃耕;賀文琦;;虎流感病毒的分離、鑒定、基因分析與抗體調(diào)查(摘要)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2003年

8 李葉;廖明;辛朝安;;A型流感病毒對(duì)小鼠致病機(jī)制的研究進(jìn)展[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

9 曲敬來;常曉;;流感病毒A上呼吸道感染快速診治的研究[A];2005年全國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文集[C];2005年

10 祝艷華;王雯慧;陳懷濤;;中藥抗流感病毒作用的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)第十五次、中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病生專業(yè)委員會(huì)第十四次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 江卉邋通訊員 胡運(yùn)海 實(shí)習(xí)生 汪紅燕;今冬江城流感病毒有加劇趨勢(shì)[N];湖北日?qǐng)?bào);2008年

2 ;新流感病毒可能已在豬身上悄悄傳播多年[N];新華每日電訊;2009年

3 記者 葛進(jìn)　陳超;日拍到新型流感病毒真實(shí)形態(tài)[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 特約記者 吳志軍　記者 蔡鵬程;研制成功迅速殺滅流感病毒新產(chǎn)品[N];解放軍報(bào);2009年

5 河北省邢臺(tái)市第一醫(yī)院副主任醫(yī)師 黃根柱;流感病毒有四怕[N];健康報(bào);2009年

6 本報(bào)記者 馬佳;陳繼明：為流感病毒繪制族譜[N];北京科技報(bào);2009年

7 江南雪舞;禽流感病毒與流感病毒有何關(guān)系？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

8 主任醫(yī)師 冀衡;流感病毒[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2003年

9 楊孝文　編譯;揭開20世紀(jì)初西班牙大流感致命秘密[N];北京科技報(bào);2007年

10 本報(bào)駐美國(guó)記者 毛黎;“狼”依然在家門口徘徊[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張文婧;抗A型流感病毒和腸道病毒71型天然化合物的篩選及其抗病毒分子機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 吳玲;A型流感病毒四種亞型同步檢測(cè)分型方法建立及兩株H5N1亞型禽流感病毒地方株的特性研究[D];武漢大學(xué);2013年

3 范文輝;犬Ⅲ型干擾素的功能特點(diǎn)及B型流感病毒NEP蛋白出核功能研究[D];廣西大學(xué);2015年

4 申新田;寡聚噻吩及皂苷類衍生物抑制流感病毒進(jìn)入靶細(xì)胞的作用及機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

5 趙化陽;小鼠動(dòng)物模型在哮喘氣道高反應(yīng)治療和抗流感藥物篩選中的應(yīng)用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 萬志敏;抗體壓下H9N2流感病毒囊膜糖蛋白關(guān)鍵抗原表位氨基酸的變異分析[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

7 高偉;新型甲型H1N1流感病毒致ALI發(fā)病機(jī)制研究—炎癥、細(xì)胞凋亡以及免疫調(diào)控[D];南京大學(xué);2012年

8 陽元娥;抗甲型流感病毒卵黃抗體的制備、活性評(píng)價(jià)及其應(yīng)用研究[D];廣東工業(yè)大學(xué);2016年

9 江靜雯;B型流感病毒誘發(fā)天然免疫應(yīng)答及M1核質(zhì)穿梭對(duì)于病毒復(fù)制的調(diào)控研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2016年

10 孔暉暉;H7N9亞型流感病毒遺傳演化分析及H7N9弱毒疫苗在哺乳動(dòng)物模型上的免疫效力評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孟慧芝;A型流感病毒條形碼檢測(cè)技術(shù)研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 胡云光;人季節(jié)性流感病毒H3N2小鼠適應(yīng)株的建立及分子機(jī)制的初步探究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 劉兵;SPF雞與BALB/c小鼠體內(nèi)流感病毒唾液酸受體組織分布的差異性分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

4 戴玉柱;五重?zé)晒舛縍T-PCR檢測(cè)甲型流感病毒方法的建立和應(yīng)用及2010～2013年杭州地區(qū)人H3N2病毒流行病學(xué)分析[D];浙江大學(xué);2015年

5 孫偉洋;B型流感病毒感染性克隆的構(gòu)建及其免疫原性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

6 王靜;HD-11細(xì)胞感染H9N2流感病毒后先天性免疫相關(guān)基因mRNA表達(dá)變化的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

7 李朋;貂源H9N2亞型流感病毒的分子生物學(xué)特性及其致病性研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 王倩;苦參主要成分的分離提取及其抗犬流感病毒的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 萬勇;甲型流感病毒不同亞型混合感染分析及N9亞型流感病毒NA基因進(jìn)化分析[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

10 王攀;MicroRNA在甲型H1N1流感病毒介導(dǎo)肺部炎性損傷調(diào)控作用的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1649992