本文選題：阿薩希毛孢子菌　切入點：小鼠　出處：《第二軍醫(yī)大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一部分阿薩希毛孢子菌微進化株與小鼠骨髓來源樹突狀細胞共培養(yǎng)體系的構建目的建立并優(yōu)化阿薩希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)微進化株與野生型小鼠骨髓來源樹突狀細胞(Bone marrow-derived dendritic cell,BMDC)共培養(yǎng)體系。方法體外培養(yǎng)C57BL/6小鼠BMDC;用不同濃度比例的熱滅活T.asahii與BMDC共培養(yǎng)以篩選最優(yōu)濃度比例,檢測共培養(yǎng)6h和24h時各組BMDC細胞因子的產生情況以選擇最佳測定時刻,用脂多糖(LPS)和β-葡聚糖(β-glucan)分別刺激BMDC以選擇適宜陽性對照;利用優(yōu)化的體系進一步檢測BMDC表面共刺激分子的激活和相關細胞因子的產生情況。結果BMDC與T.asahii比例為1:5最適宜作為共培養(yǎng)的比例,24h為實驗結果最佳測定時刻,而β-glucan更適于作為陽性對照;小鼠BMDC能夠對T.asahii進行抗原提呈并通過增加IL-6和TNF-α的產生對其發(fā)揮抗真菌作用。結論該共培養(yǎng)體系能夠有效檢測T.asahii對小鼠BMDC的免疫原性,體系構建成功。第二部分慢性感染致微進化作用對阿薩希毛孢子菌免疫原性和毒力的影響目的初步探索慢性感染所致微進化作用對T.asahii免疫原性和毒力的影響。方法復蘇T.asahii原代株(T0)與微進化株(Tevo)并分別從肉眼、光鏡和電鏡下對比觀察兩者形態(tài);體外培養(yǎng)C57BL/6小鼠BMDC并以1:5比例分別與成活/熱滅活的T0、Tevo孢子共培養(yǎng)24h,其后檢測各組BMDC細胞因子TNF-α和IL-6的表達情況;比較感染T0與Tevo小鼠的生存率。結果T0以菌絲形態(tài)生長為主,而Tevo以孢子形態(tài)生長為主;成活Tevo刺激BMDC表達TNF-α和IL-6的水平明顯低于成活T0,而熱滅活后兩者差異消失;感染Tevo的小鼠存活率明顯高于T0。結論慢性感染所致微進化作用可能造成T.asahii通過改變菌株形態(tài)以減弱其免疫原性和毒力。第三部分慢性感染致微進化作用對阿薩希毛孢子菌轉錄組的影響目的通過比較T0與Tevo的轉錄組分析結果,初步探索慢性感染致T.asahii微進化作用的分子機制。方法復蘇T0和Tevo并提取菌株總RNA;純化總RNA后富集m RNA并構建c DNA文庫;對c DNA文庫進行測序并對測序數據進行質控;分別對比T0與Tevo的基因表達水平、差異表達基因、基因功能描述分類和代謝通路富集。結果測序結果清晰可靠;Tevo基因表達水平的分布與T0相比存在明顯差異,共有2212個差異表達基因;與T0相比,Tevo在針對菌體自身的基因轉錄、RNA合成與代謝以及細胞組分合成與代謝等生物過程項方面的基因明顯下調,上調基因雖在生物過程、細胞組分和分子功能項上均有涉及但并不顯著,以自身DNA損傷修復、能源利用和宿主細胞干預為主;下調基因參與的代謝通路在纈氨酸、亮氨酸及異亮氨酸的代謝上明顯富集,上調基因參與的代謝通路在酪氨酸代謝、核酸損傷修復、基因錯配修復和同源基因重組等通路略有富集。結論慢性感染所致的微進化作用可能造成T.asahii通過調節(jié)基因表達以改變其生存、代謝狀態(tài),從而在宿主體內長期生存。
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【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R756

【參考文獻】

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本文編號：1558235