本文關(guān)鍵詞： 乙型肝炎病毒 miR-26b 含半胱氨酸和組氨酸豐富域蛋白1　出處：《武漢大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：乙型肝炎病毒(HBV,簡稱乙肝病毒)能引起人類感染急性和慢性乙肝疾病,其病毒感染對全球的公共健康是一個巨大的威脅。雖然乙肝疫苗的應(yīng)用使乙肝病毒的傳播得到了遏制,但乙肝病毒的慢性感染依舊難以治愈。乙肝病毒在肝細(xì)胞中的表達(dá)和復(fù)制是受一系列宿主細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的,而乙肝病毒可以通過調(diào)控這些細(xì)胞因子來增強自身的病毒增殖。細(xì)胞miRNA是高度保守的非編碼RNA,它參與了多種生理過程和疾病進(jìn)程,目前很多文獻(xiàn)報道m(xù)iRNA在病毒與宿主細(xì)胞的交互作用中有重要作用。 在本研究中,我們報道了通過轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的miR-26b模擬物可以抑制乙肝病毒的抗原HBeAg與HBsAg表達(dá)、前基因組RNA (pgRNA)轉(zhuǎn)錄和衣殼DNA復(fù)制,而通過反義抑制子來降低內(nèi)源性的miR-26b表達(dá)后可以增強乙肝病毒的基因表達(dá)和DNA復(fù)制。過量表達(dá)和敲除實驗顯示miR-26b可以顯著降低乙肝病毒的增強子／啟動子的活性,證明miR-26b可以通過調(diào)節(jié)病毒轉(zhuǎn)錄水平來實現(xiàn)抑制乙肝病毒。然后,我們鑒定了一系列潛在的miR-26b宿主靶標(biāo)基因,它們可能與HBV復(fù)制的調(diào)控相關(guān),其中主要有含半胱氨酸和組氨酸豐富域蛋白1(CHORDCl)。通過miR-26b與CHORDCl信使RNA的3'UTR互補序列特異性地堿基配對,miR-26b可以明顯降低CHORDCl的蛋白表達(dá)。過表達(dá)和敲除實驗顯示CHORDCl可以通過促進(jìn)增強子／啟動子活性來增加乙肝病毒病毒抗原表達(dá)、pgRNA轉(zhuǎn)錄和DNA復(fù)制。我們同時還發(fā)現(xiàn),乙肝病毒的感染可以使人外周血單核細(xì)胞和肝細(xì)胞中的miR-26b的表達(dá)水平明顯下調(diào)。另外,我們還證實了miR-26a,另外一條成熟的miR-26家族miRNA,也能降低CHORDCl蛋白的表達(dá),從而也能抑制乙肝病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。 我們的實驗結(jié)果表明,在肝癌細(xì)胞中miR-26b可以下調(diào)包括CHORDCl在內(nèi)的多個靶標(biāo)基因的表達(dá),降低乙肝病毒的增強子／啟動子活性,從而抑制病毒轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)和病毒復(fù)制。乙肝病毒感染導(dǎo)致的miR-26b表達(dá)下調(diào),表明乙肝病毒可以通過抑制miR-26b的表達(dá)水平促進(jìn)自身的病毒增值。同時,由于miR-26b具有潛在抑癌作用,乙肝病毒誘導(dǎo)的miR-26b水平下降可能在相關(guān)肝癌的發(fā)生也有重要的作用。我們的發(fā)現(xiàn)為miR-26b用于潛在的臨床治療乙肝病毒感染的應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
[Abstract]:Hepatitis B virus (HBV) can cause acute and chronic hepatitis B diseases in human beings, and its infection is a great threat to global public health. Although the application of hepatitis B vaccine has prevented the spread of hepatitis B virus, However, chronic hepatitis B virus infection is still difficult to cure. The expression and replication of hepatitis B virus in liver cells are regulated by a series of host cytokines. Hepatitis B virus can enhance its virus proliferation by regulating these cytokines. Cell miRNA is a highly conserved noncoding RNAs that participate in many physiological processes and disease processes. At present, many literatures have reported that miRNA plays an important role in the interaction between virus and host cells. In this study, we reported that miR-26b mimics could inhibit the expression of hepatitis B virus antigen HBeAg and HBsAg, pregenomic RNA pgRNAs transcription and capsid DNA replication. The gene expression and DNA replication of hepatitis B virus could be enhanced by reducing endogenous miR-26b expression by antisense suppressor. Overexpression and knockout experiments showed that miR-26b could significantly reduce the activity of enhancer / promoter of hepatitis B virus. We then identified a series of potential miR-26b host target genes, which may be related to the regulation of HBV replication. Among them, there are mainly cysteine and histidine rich domain proteins (1) CHORDCl1. The protein expression of CHORDCl can be significantly reduced by the complementary sequence of miR-26b and CHORDCl messenger RNA. The overexpression and knockout experiments show that CHORDCl can pass through. We also found that, by increasing the activity of promoter / promoter to increase the expression of hepatitis B virus antigen, pgRNA transcription and DNA replication, Hepatitis B virus infection can significantly down-regulate the expression of miR-26b in human peripheral blood monocytes and hepatocytes. In addition, we have also confirmed that miR-26a, another mature miR-26 family, can also reduce the expression of CHORDCl protein. It can also inhibit the transcription and replication of hepatitis B virus. Our results show that miR-26b can down-regulate the expression of multiple target genes, including CHORDCl, and reduce the activity of enhancers / promoters of hepatitis B virus in hepatoma cells, thus inhibiting the transcription of the virus. Protein expression and viral replication. The down-regulation of miR-26b expression caused by HBV infection indicates that HBV can promote the proliferation of its own virus by inhibiting the expression level of miR-26b. At the same time, because miR-26b has a potential anti-cancer effect, The decrease of miR-26b level induced by hepatitis B virus may also play an important role in the occurrence of liver cancer. Our findings provide experimental evidence for the application of miR-26b in the potential clinical treatment of hepatitis B virus infection.
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62;R373

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3 張v，

本文編號：1538477