本文關(guān)鍵詞： 非酒精性脂肪性肝病 病毒性肝炎 鼠3型肝炎病毒 肝臟免疫損傷　出處：《華中科技大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：[背景及目的] 非酒精性脂肪性肝病(Non-alcholic fatty liver disease, NAFLD)是代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn),包括單純性脂肪肝(simple steatosis),非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcholic steatohepatitis, NASH),以及NASH相關(guān)的肝纖維化/肝硬化、肝癌。隨著生活水平的提高,NAFLD在發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率顯著上升,我國(guó)NAFLD患者數(shù)量在過(guò)去的10年增加了近一倍,部分地區(qū)的發(fā)病率已達(dá)四分之一。同時(shí),我國(guó)是病毒性肝炎感染的高發(fā)地區(qū),約有1億HBV感染者及4000萬(wàn)HCV感染者,其中合并NAFLD的患者有逐年增加的趨勢(shì),這一部分人群已經(jīng)引起了研究者們的注意。 目前關(guān)于NAFLD合并病毒性肝炎的研究多集中在NAFLD合并慢性丙型肝炎(Chronic hepatitis C,CHC):NAFLD可以增加CHC患者進(jìn)展為肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的風(fēng)險(xiǎn),并降低抗病毒治療的療效。但是,丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)本身具有致肝細(xì)胞脂肪變的作用,因此在NAFLD合并CHC患者中得到的結(jié)論可能并不能推而廣之。關(guān)于NAFLD對(duì)慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)的影響,目前的研究結(jié)果卻并不一致,與CHC中看到的現(xiàn)象也不相同。部分研究認(rèn)為,肝臟脂肪變對(duì)CHB具有保護(hù)作用：在脂肪肝患者中,乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)載量更低,乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)清除率更高。但另一方面,一些研究顯示,脂肪肝可能會(huì)增加CHB患者發(fā)展為肝硬化及HCC的風(fēng)險(xiǎn),降低恩替卡韋抗病毒治療的效果。還有一些研究認(rèn)為,脂肪肝對(duì)HBV病毒載量及干擾素抗病毒治療無(wú)影響。事實(shí)上,這方面的研究存在許多難點(diǎn),可能是導(dǎo)致這些矛盾結(jié)論的原因。首先,研究中多用肝臟超聲診斷脂肪肝。肝臟超聲檢查僅能檢出肝內(nèi)脂肪沉積超過(guò)30%的中度脂肪肝,難以檢出輕度脂肪肝(肝臟內(nèi)脂肪沉積為5%-30%),因此在分組時(shí),可能將輕度脂肪肝患者作為無(wú)脂肪肝的對(duì)照。其次,在研究NAFLD合并CHB時(shí),難以保證受試者在代謝、病毒、治療等多種因素上的一致性。第三,人群研究難以獲取肝組織觀察肝內(nèi)免疫、代謝等方面的改變。因此,NAFLD在慢性病毒性肝炎中的影響仍不明確。 動(dòng)物模型可以克服上述臨床研究中的不足,但目前尚缺乏NAFLD合并病毒性肝炎的動(dòng)物模型。為了更好的研究NAFLD對(duì)慢性病毒性肝炎的影響,本研究的具體研究目標(biāo)如下： 1.成功建立飲食誘導(dǎo)的NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型； 2.在飲食誘導(dǎo)的NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型中,動(dòng)態(tài)觀察肝炎病毒的復(fù)制情況及肝組織損傷程度； 3.探討NAFLD影響病毒性肝炎病程的相關(guān)免疫學(xué)機(jī)制。 [方法] 1.采用60%高脂飲食(High fatty diet, HFD)喂養(yǎng)C3H/HeN小鼠12周,觀察小鼠一般狀態(tài)及生活習(xí)性改變,觀察體重、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase, AST)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、總膽固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)、血糖(Glucose,GLU)、胰島素水平及穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(Homeostasis Model Assessment-Insulin Resistance, HOMA-IR)的動(dòng)態(tài)變化及肝臟組織學(xué)變化。 2.3型鼠肝炎病毒(Murine hepatitis virus-3,MHV-3)腹腔注射感染NAFLD小鼠,觀察小鼠一般狀態(tài)及生存率；動(dòng)態(tài)觀察小鼠感染后血清生化學(xué)變化及肝臟病理改變；逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)檢測(cè)小鼠肝內(nèi)MHV-3。 3.MHV-3腹腔感染NAFLD小鼠及正常飲食(Normal diet, ND)小鼠,比較兩組小鼠生存率；比較兩組小鼠各時(shí)間點(diǎn)血清生化學(xué)變化及肝組織病理改變；實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)檢測(cè)并比較各時(shí)間點(diǎn)兩組小鼠肝內(nèi)MHV-3復(fù)制情況。 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MHV-3感染后各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝內(nèi)CD3+CD8+CD69+T細(xì)胞、CD3+CD8+PD-1+T細(xì)胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例的變化,并比較兩組小鼠之間的差異；Real-time PCR檢測(cè)并比較兩組小鼠MHV-3感染后各時(shí)間點(diǎn)肝內(nèi)IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-22、IL-33、TNF-α、Fg12的表達(dá),并比較兩組小鼠之間的差異。 [結(jié)果] 1.成功建立NAFLD小鼠模型。HFD飲食喂養(yǎng)12周,C3H/HeN小鼠體型肥胖,皮毛油膩,不喜活動(dòng),體重明顯增加；外周血ALT及AST水平無(wú)顯著升高；TG、TC、HDL、LDL、GLU、胰島素水平及HOMA-IR均顯著升高；小鼠肝臟體積增大,肝重高于ND組,邊緣圓鈍,色澤紅黃,表面光滑,有油膩感；肝組織切片HE染色及油紅O染色可見(jiàn)肝細(xì)胞內(nèi)大量脂滴形成。 2.成功建立飲食誘導(dǎo)的NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型。NAFLD小鼠感染MHV-3病毒后,在3-12天內(nèi)出現(xiàn)死亡,死亡率約為20%；感染小鼠外周血ALT和AST水平顯著升高；感染小鼠肝臟蒼白,缺乏光澤,并可見(jiàn)彌漫分布的針尖樣出血點(diǎn)；HE染色除可見(jiàn)肝細(xì)胞內(nèi)脂滴形成,還可見(jiàn)肝細(xì)胞胞漿疏松、肝細(xì)胞壞死、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等表現(xiàn)；PCR可檢測(cè)到肝內(nèi)MHV-3病毒復(fù)制。 3. NAFLD小鼠感染MHV-3病毒后,生存率與對(duì)照組無(wú)差異；MHV-3病毒復(fù)制高于對(duì)照組,于感染4天時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.002); ALT及AST升高幅度大于ND組；肝組織炎癥壞死程度交對(duì)照組嚴(yán)重。 4. NAFLD小鼠感染MHV-3病毒后,肝內(nèi)IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-33、TNF-α、Fg12表達(dá)水平上調(diào),且上調(diào)幅度大于ND組小鼠,而IL-22表達(dá)水平降低,且降低幅度大于對(duì)照組小鼠。 5. NAFLD小鼠感染MHV-3病毒后,肝內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例降低,但感染第16天開(kāi)始高于ND組小鼠；CD3+CD8+CD69+T及CD3+CD8+PD1+T細(xì)胞均出現(xiàn)升高,上升幅度大于ND組小鼠,且細(xì)胞比例回落后仍持續(xù)高于ND組小鼠。 [結(jié)論] 1.本研究采用HFD喂養(yǎng)C3H/HeN小鼠12周成功建立NAFLD小鼠模型,并在此基礎(chǔ)上采用MHV-3病毒腹腔感染小鼠,成功建立NAFLD合并病毒性肝炎小鼠模型。為研究NAFLD對(duì)病毒性肝炎的影響提供了動(dòng)物模型,開(kāi)辟了新的研究途徑。 2. NAFLD可以加劇肝內(nèi)MHV-3病毒復(fù)制,加重肝內(nèi)炎癥反應(yīng)。 3. NAFLD在病毒性肝炎感染早期可以促進(jìn)肝內(nèi)細(xì)胞因子的釋放,使CD3+CD8+CD69+T比例增加,CD4+CD25+Foxp3+Treg比例降低,可導(dǎo)致肝內(nèi)炎癥壞死加重的。而感染后期CD4+CD25+Foxp3+Treg及CD3+CD8+PD1+T細(xì)胞比例的增加,有可能阻礙病毒清除。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.5;R512.6

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉曉;朱月永;;慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝的研究進(jìn)展[J];實(shí)用肝臟病雜志;2009年04期

2 段曉燕;范建高;;代謝性危險(xiǎn)因素與病毒性肝炎[J];實(shí)用肝臟病雜志;2009年06期

3 李知玉;何清;敖飛健;黃珊;唐奇遠(yuǎn);唐蔚;張斌;;化痰消脂方對(duì)慢性乙型肝炎并發(fā)非酒精性脂肪性肝病患者抗病毒治療療效的影響[J];中國(guó)肝臟病雜志(電子版);2012年01期

4 謝莉;朱平;;IL-22在疾病中的最新研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年18期

5 趙瑩;邵清;陳國(guó)鳳;;慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝的研究動(dòng)態(tài)[J];傳染病信息;2013年05期

6 唐冬梅;陳小明;毛德文;胡小慧;石文峰;;解毒化瘀Ⅱ方對(duì)急性肝衰竭大鼠肝組織TLR4蛋白及TBIL的影響[J];廣西中醫(yī)藥;2013年06期

7 丁寧;程勇前;卿松;王建軍;閆濤;潘靜;靳雪源;趙平;;大鼠急性酒精性肝損傷肝細(xì)胞凋亡及其發(fā)病機(jī)制研究[J];廣西醫(yī)學(xué);2013年11期

8 Jun Cheng;Min Li;Ping Gao;Jin-ling Dong;Qi Wang;;Molecular Pathogenesis of Liver Steatosis Induced by Hepatitis C Virus[J];Infection International(Electronic Edition);2012年03期

9 張鵬飛;阿麗亞·熱哈提;范曉棠;希爾娜依·阿不都黑力力;董平;祝達(dá);石繡江;陳蘭;何方平;;男性慢性乙型肝炎患者肝細(xì)胞脂肪變危險(xiǎn)因素分析[J];實(shí)用肝臟病雜志;2014年02期

10 陳陽(yáng)琴;丁惠國(guó);;脂肪性肝病對(duì)慢性乙型肝炎疾病進(jìn)展及抗病毒應(yīng)答的影響[J];北京醫(yī)學(xué);2014年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 林云華;尹燕耀;宗亞力;吳林;;水林佳對(duì)脂肪肝有無(wú)合并乙肝病毒感染的臨床觀察[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病新進(jìn)展講習(xí)班、江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 彭仙娥;乙型肝炎病毒在非酒精脂肪肝發(fā)生中的作用及機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

2 史樹(shù)堂;淋巴瘀滯對(duì)家兔胰肝腎組織結(jié)構(gòu)和功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

3 張琴;乙肝病毒X基因參與肝細(xì)胞脂肪變性的作用及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

4 吳云麗;乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)對(duì)人FABP1和NQO1基因調(diào)控及機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

5 陽(yáng)喬;單核/巨噬細(xì)胞在肝衰竭中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

6 王棟;乙型肝炎病毒介導(dǎo)載脂蛋白和NQO1對(duì)肝細(xì)胞脂肪化的作用及機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

7 朱榮濤;游離脂肪酸通過(guò)NLRP3介導(dǎo)致Kupffer細(xì)胞炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

8 李揚(yáng)兮;CRACC與NK細(xì)胞介導(dǎo)小鼠肝臟損傷研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

9 劉征濤;影響廣西防城港地區(qū)男性人群谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平的遺傳變異及其在永生化肝細(xì)胞株中的驗(yàn)證[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

10 張建軍;SOCS1基因與慢加急性乙型肝炎肝衰竭病情評(píng)價(jià)及激素治療的研究[D];山東大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王榮榮;TGFβ1及TNF-α與慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝關(guān)系的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 高倩;運(yùn)用鴨乙肝合并非酒精性脂肪肝模型評(píng)價(jià)中藥降脂提高抗病毒治療應(yīng)答的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 周希靜;慢性HBV、HCV感染合并非酒精性脂肪性肝病的臨床及病理分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

4 傅苗苗;乙肝病毒轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)營(yíng)養(yǎng)性脂肪肝炎更敏感[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2009年

5 鄭黎黎;HBx蛋白與肝細(xì)胞脂肪變性的可能關(guān)系及機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

6 姜蕎玫;4316例慢性HBV感染者脂肪肝合并狀況分析[D];吉林大學(xué);2012年

7 饒紫蘭;乙型肝炎表面抗原主蛋白改變HepG2細(xì)胞脂代謝基因表達(dá)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

8 李艷芳;煙臺(tái)地區(qū)慢乙肝合并非酒精性脂肪性肝病臨床特征及脂聯(lián)素、α-SMA表達(dá)[D];濱州醫(yī)學(xué)院;2011年

9 張麗;葛根素蠶蛹油混懸劑口服生物利用度及抗氧化損傷功能的研究[D];浙江理工大學(xué);2012年

10 張平平;MRI定量診斷非酒精性脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1508617