本文關(guān)鍵詞： 乙型肝炎病毒感染 肝細(xì)胞 肝細(xì)胞癌 膠原三螺旋重復(fù)蛋白1 PKC/JNK/ERK/c-Jun信號(hào)級(jí)聯(lián) IFN/JAK/STAT通路 細(xì)胞免疫反應(yīng) 干擾素 干擾素誘導(dǎo)基因　出處：《武漢大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：乙型肝炎病毒(HBV)感染是導(dǎo)致肝臟疾病的主要原因,從爆發(fā)性肝炎到肝硬化階段,最終發(fā)展成肝癌(HCC)。本研究致力于研究乙肝病毒與膠原三螺旋重復(fù)蛋白1 (CTHRC1)之間的關(guān)系。CTHRC1是一個(gè)多功能的分泌蛋白,與癌癥細(xì)胞的侵襲和遷移具有緊密聯(lián)系。然而,關(guān)于CTHRC1調(diào)節(jié)病毒復(fù)制方面還沒有研究和報(bào)道。我們的研究將弄清楚HBV誘導(dǎo)CTHRC1表達(dá)和反過來CTHRC1影響HBV復(fù)制的調(diào)節(jié)機(jī)制。我們研究確定了HBV感染對(duì)CTHRC1表達(dá)的影響。首先,我們檢測(cè)到153例慢性乙肝病人血清中的CTHRC1蛋白水平比164例健康人高。其次,數(shù)據(jù)顯示12份HBV相關(guān)肝癌組織中CTHRC1 mRNA水平比13份癌旁組織高。再者,Elisa結(jié)果顯示142份HBV感染病人的血清中CTHRC1蛋白水平與HBV DNA載量顯著相關(guān)。另外,我們還在轉(zhuǎn)染HBV基因組的HepG2細(xì)胞和攜帶HBV基因組的HepG2.2.15中檢測(cè)了CTHRC1蛋白水平。因此,我們總結(jié)出：HBV感染的病人和攜帶HBV基因組的肝癌細(xì)胞中CTHRC1表達(dá)被激活。我們進(jìn)一步探索HBV激活CTHRC1表達(dá)的分子機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)CTHRC1啟動(dòng)子活性、mRNA和蛋白產(chǎn)量都被甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的抑制劑5'-aza-dc所下調(diào),提示DNMT在CTHRC1被激活過程中發(fā)揮重要作用。基因組甲基化測(cè)序分析顯示肝癌組織中的CTHRC1啟動(dòng)子的甲基化程度高于癌旁組織。進(jìn)一步還發(fā)現(xiàn)CTHRC1啟動(dòng)子活性、mRNA和蛋白表達(dá)都被甲基轉(zhuǎn)移酶3a (DNMT3a)所抑制,但卻被siDNMT3a所激活,說明DNMT3a介導(dǎo)CTHRC1的表達(dá)。接下來我們首次探究CTHRC1對(duì)HBV復(fù)制的影響。在HepG2、HepG2.2.15和L02細(xì)胞中,HBV e抗原(HBeAg、HBV s抗原(HBsAg)和HBV DNA表達(dá)與CTHRC1基因呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴,但卻被siCTHRC1所抑制。HBV的4.1/3.5 kb和2.4/2.1kb特定轉(zhuǎn)錄本活性同樣被CTHRC1基因增強(qiáng),被siCTHRC1所削弱�？偨Y(jié)以上結(jié)果我們得出過表達(dá)CTHRC1激活HBV復(fù)制,敲出CTHRC1基因抑制HBV復(fù)制。為了揭示CTHRC1調(diào)控HBV復(fù)制的分子機(jī)制,我們?cè)u(píng)估信號(hào)通路在此調(diào)節(jié)中的作用。結(jié)果顯示HBeAg和HBsAg表達(dá)被CTHRC1激活,卻被MEK1/2的抑制劑U0126、 JNK抑制劑SP600125和PKC抑制劑GF109203所抑制,說明PKC、ERK和JNK信號(hào)通路參與CTHRC1調(diào)控HBV復(fù)制。更深入的研究發(fā)現(xiàn)HBeAg和HBsAg表達(dá)被CTHRC1上調(diào),卻被si-c-Jun所抑制；而且免疫共沉淀結(jié)果顯示p-c-Jun與HBV基因組上的AP1位點(diǎn)結(jié)合。總結(jié)上述結(jié)果,我們證明了PKC、ERK、JNK和c-Jun介導(dǎo)CTHRC1調(diào)控的HBV復(fù)制。我們知道干擾素反應(yīng)能夠強(qiáng)烈抑制HBV復(fù)制,因此,我們探究CTHRC1調(diào)節(jié)干擾素的抗病毒活性方面的功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HBeAg、HBsAg和HBV DNA表達(dá)量分別被IFN-α(I型干擾素)、IFN-γ(II型干擾素)和IFN-λ1(工II型干擾素)所下調(diào),但這種抑制效應(yīng)卻被CTHRC1基因所削弱。進(jìn)一步研究顯示IFN-α激活I(lǐng)FN-α/β受體(IFNAR α/β)和干擾素誘導(dǎo)基因(PKR、Mxl和OAS1)和磷酸化STAT1/2,但卻被CTHRC1抑制。除此之外,CTHRC1還促進(jìn)IFNAR α的磷酸化和泛素化,但被GF109203和U0126所抑制。因此,我們總結(jié)出CTHRC1促進(jìn)HBV復(fù)制是通過激活PKC/ERK/JNK/c-Jun信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)以抑制IFN/JAK/STAT通路的抗病毒活性。綜上所述,HBV通過表觀修飾和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的方式激活CTHRC1表達(dá),CTHRC1反過來幫助HBV復(fù)制則是通過激活PKC/ERK/JNK/c-Jun信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)、減弱IFN/JAK/STAT通路活性和加快IFN-α/β降解。因此,我們揭示了一個(gè)新的機(jī)制：HBV捕獲細(xì)胞因子和信號(hào)級(jí)聯(lián)以逃避宿主免疫和維持持續(xù)感染。除此之外,我們還發(fā)現(xiàn)了HBV感染肝細(xì)胞過程中CTHRC1的一個(gè)新功能。
[Abstract]:It was found that the CTHRC1 promoter activity , mRNA and protein production were significantly associated with the invasion and migration of CTHRC1 . The results showed that the CTHRC1 promoter activity , mRNA and protein production were significantly associated with the expression of CTHRC1 . In addition , we found that the CTHRC1 promoter activity , mRNA and protein production were significantly associated with the expression of CTHRC1 . In conclusion , CTHRC1 promotes the phosphorylation and ubiquitination of IFNAR 偽 , but is inhibited by GF109203 and U0126 . In conclusion , we conclude that CTHRC1 promotes the replication of HBV by activating PKC / ERK / A / c - Jun signal cascade reaction , reducing IFN / JAK / STAT pathway activity and accelerating IFN - 偽 / 尾 degradation .

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

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1 Thomas F Baumert;Robert Thimme;Fritz von Weizs，

本文編號(hào)：1470457