本文關鍵詞： 乙型肝炎病毒感染 肝細胞 肝細胞癌 膠原三螺旋重復蛋白1 PKC/JNK/ERK/c-Jun信號級聯(lián) IFN/JAK/STAT通路 細胞免疫反應 干擾素 干擾素誘導基因　出處：《武漢大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：乙型肝炎病毒(HBV)感染是導致肝臟疾病的主要原因,從爆發(fā)性肝炎到肝硬化階段,最終發(fā)展成肝癌(HCC)。本研究致力于研究乙肝病毒與膠原三螺旋重復蛋白1 (CTHRC1)之間的關系。CTHRC1是一個多功能的分泌蛋白,與癌癥細胞的侵襲和遷移具有緊密聯(lián)系。然而,關于CTHRC1調節(jié)病毒復制方面還沒有研究和報道。我們的研究將弄清楚HBV誘導CTHRC1表達和反過來CTHRC1影響HBV復制的調節(jié)機制。我們研究確定了HBV感染對CTHRC1表達的影響。首先,我們檢測到153例慢性乙肝病人血清中的CTHRC1蛋白水平比164例健康人高。其次,數(shù)據(jù)顯示12份HBV相關肝癌組織中CTHRC1 mRNA水平比13份癌旁組織高。再者,Elisa結果顯示142份HBV感染病人的血清中CTHRC1蛋白水平與HBV DNA載量顯著相關。另外,我們還在轉染HBV基因組的HepG2細胞和攜帶HBV基因組的HepG2.2.15中檢測了CTHRC1蛋白水平。因此,我們總結出：HBV感染的病人和攜帶HBV基因組的肝癌細胞中CTHRC1表達被激活。我們進一步探索HBV激活CTHRC1表達的分子機制。研究發(fā)現(xiàn)CTHRC1啟動子活性、mRNA和蛋白產(chǎn)量都被甲基轉移酶(DNMT)的抑制劑5'-aza-dc所下調,提示DNMT在CTHRC1被激活過程中發(fā)揮重要作用�；蚪M甲基化測序分析顯示肝癌組織中的CTHRC1啟動子的甲基化程度高于癌旁組織。進一步還發(fā)現(xiàn)CTHRC1啟動子活性、mRNA和蛋白表達都被甲基轉移酶3a (DNMT3a)所抑制,但卻被siDNMT3a所激活,說明DNMT3a介導CTHRC1的表達。接下來我們首次探究CTHRC1對HBV復制的影響。在HepG2、HepG2.2.15和L02細胞中,HBV e抗原(HBeAg、HBV s抗原(HBsAg)和HBV DNA表達與CTHRC1基因呈現(xiàn)時間和劑量依賴,但卻被siCTHRC1所抑制。HBV的4.1/3.5 kb和2.4/2.1kb特定轉錄本活性同樣被CTHRC1基因增強,被siCTHRC1所削弱�？偨Y以上結果我們得出過表達CTHRC1激活HBV復制,敲出CTHRC1基因抑制HBV復制。為了揭示CTHRC1調控HBV復制的分子機制,我們評估信號通路在此調節(jié)中的作用。結果顯示HBeAg和HBsAg表達被CTHRC1激活,卻被MEK1/2的抑制劑U0126、 JNK抑制劑SP600125和PKC抑制劑GF109203所抑制,說明PKC、ERK和JNK信號通路參與CTHRC1調控HBV復制。更深入的研究發(fā)現(xiàn)HBeAg和HBsAg表達被CTHRC1上調,卻被si-c-Jun所抑制；而且免疫共沉淀結果顯示p-c-Jun與HBV基因組上的AP1位點結合。總結上述結果,我們證明了PKC、ERK、JNK和c-Jun介導CTHRC1調控的HBV復制。我們知道干擾素反應能夠強烈抑制HBV復制,因此,我們探究CTHRC1調節(jié)干擾素的抗病毒活性方面的功能。實驗結果顯示HBeAg、HBsAg和HBV DNA表達量分別被IFN-α(I型干擾素)、IFN-γ(II型干擾素)和IFN-λ1(工II型干擾素)所下調,但這種抑制效應卻被CTHRC1基因所削弱。進一步研究顯示IFN-α激活IFN-α/β受體(IFNAR α/β)和干擾素誘導基因(PKR、Mxl和OAS1)和磷酸化STAT1/2,但卻被CTHRC1抑制。除此之外,CTHRC1還促進IFNAR α的磷酸化和泛素化,但被GF109203和U0126所抑制。因此,我們總結出CTHRC1促進HBV復制是通過激活PKC/ERK/JNK/c-Jun信號級聯(lián)反應以抑制IFN/JAK/STAT通路的抗病毒活性。綜上所述,HBV通過表觀修飾和轉錄調節(jié)的方式激活CTHRC1表達,CTHRC1反過來幫助HBV復制則是通過激活PKC/ERK/JNK/c-Jun信號級聯(lián)反應、減弱IFN/JAK/STAT通路活性和加快IFN-α/β降解。因此,我們揭示了一個新的機制：HBV捕獲細胞因子和信號級聯(lián)以逃避宿主免疫和維持持續(xù)感染。除此之外,我們還發(fā)現(xiàn)了HBV感染肝細胞過程中CTHRC1的一個新功能。
[Abstract]:It was found that the CTHRC1 promoter activity , mRNA and protein production were significantly associated with the invasion and migration of CTHRC1 . The results showed that the CTHRC1 promoter activity , mRNA and protein production were significantly associated with the expression of CTHRC1 . In addition , we found that the CTHRC1 promoter activity , mRNA and protein production were significantly associated with the expression of CTHRC1 . In conclusion , CTHRC1 promotes the phosphorylation and ubiquitination of IFNAR 偽 , but is inhibited by GF109203 and U0126 . In conclusion , we conclude that CTHRC1 promotes the replication of HBV by activating PKC / ERK / A / c - Jun signal cascade reaction , reducing IFN / JAK / STAT pathway activity and accelerating IFN - 偽 / 尾 degradation .

【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62

【參考文獻】

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1 Thomas F Baumert;Robert Thimme;Fritz von Weizs，

本文編號：1470457